Combinazione di microscopia confocale a riflettanza con tomografia a coerenza ottica per la diagnosi non invasiva dei tumori della pelle tramite acquisizione di immagini

Questo protocollo descrive in dettaglio le fasi di acquisizione delle immagini per i dispositivi RCM e RCM-OCT al posto letto. È essenziale acquisire immagini di buona qualità per una corretta diagnosi e gestione delle lesioni cutanee. Questi dispositivi visualizzano la pelle a risoluzione istopatologica in vivo, risparmiando biopsie benigne non necessarie e rilevando tumori cutanei precoci.

Le diagnosi vengono effettuate al capezzale riducendo i tempi di attesa e l'ansia per i pazienti. L'imaging con questo microscopio ci aiuta a guidare in modo non invasivo il rilevamento e la diagnosi di lesioni cutanee e tumori della pelle sui pazienti al letto del paziente. Inoltre, l'imaging ci aiuta a valutare le lesioni cutanee in quelle che possono essere superficiali rispetto a quelle che possono essere più profonde, il che aiuta a guidare il trattamento.

Quindi l'imaging ci aiuta a integrare o combinare diagnosi e trattamento in un'unica visita del paziente, quello che ora viene chiamato un paradigma di cura del paziente one-stop shop. Oltre a utilizzare l'imaging per rilevare e diagnosticare lesioni cutanee e tumori della pelle, stiamo anche utilizzando l'imaging per guidare il rilevamento e la diagnosi di lesioni orali e tumori orali sui pazienti. A dimostrare la procedura sarà la signora Ucalene Harris, un istotecnico del mio laboratorio.

Per iniziare, selezionare il dispositivo WP-RCM per le lesioni situate sulle superfici piane della pelle, come il tronco e le estremità, e il dispositivo HH-RCM per le lesioni su superfici curve, come il naso, i lobi delle orecchie, le palpebre e i genitali. Per l'imaging, posizionare il paziente su una sedia completamente reclinabile o su un tavolo da visita piatto con supporto. Quindi pulire la lesione e la pelle circostante con una salvietta imbevuta di alcool.

Aggiungi una goccia di olio minerale al centro della finestra di plastica e distribuiscila con cura sulla larghezza della finestra. Rimuovere il libro cartaceo dal lato adesivo della finestra, allungare delicatamente la pelle e fissare la finestra. Per acquisire immagini utilizzando il dispositivo WP-RCM, posizionare la sonda perpendicolarmente alla lesione.

Quindi acquisire immagini dermatoscopiche passando la sonda WP-RCM sopra il tappo della finestra in plastica e stimare il miglior angolo di inserimento per la sonda. Allineare la piccola freccia bianca situata sul lato della sonda con la freccia sul lato della telecamera per dermatoscopia. Inserire la fotocamera per dermatoscopia nel cappuccio della finestra di plastica.

Assicurarsi che l'immagine del dermatoscopio copra l'intera superficie della lesione e premere il grilletto sulla fotocamera per acquisire un'immagine. Quindi rimuovere il dermatoscopio. Quindi posizionare una quantità di gel per ultrasuoni delle dimensioni di un pisello all'interno del tappo per finestre di plastica usa e getta.

Inserire la sonda RCM nel cappuccio monouso in plastica finché non si sente un clic acuto. Utilizzando l'immagine dermatoscopica acquisita nel passaggio precedente, selezionare il centro della lesione e identificare lo strato più alto o più luminoso della pelle, che è lo strato anucleare dello strato corneo. Impostare la profondità di imaging su zero a questo livello.

Premere l'icona della pila per acquisire una pila al centro della lesione. Dal menu a discesa, seleziona un sito anatomico, viso o corpo. Impostare stepsize su 4,5 micron e profondità su 250 micron.

Identificare la giunzione dermo-epidermica, o strato DEJ nella pila e selezionare un quadrato 8x8 millimetri per coprire l'intera lesione. Quindi premere l'icona del mosaico per acquisire il primo mosaico al DEJ. Per acquisire mosaici successivi, fare clic su una struttura sul mosaico DEJ per visualizzarlo nella vista dal vivo.

Scorri verso il basso dal DEJ per acquisire mosaici al derma, e poi verso l'alto dal DEJ per prendere i mosaici nell'epidermide. Cattura una pila in ogni quadrante e una al centro della lesione con un pattern omogeneo sulla dermatoscopia, oppure acquisisci pile aggiuntive per lesioni eterogenee. Dopo aver completato una sessione di immagini, staccare il cono protettivo che circonda la lente del microscopio.

Pulire la punta della lente dell'obiettivo con un tampone imbevuto di alcool e asciugare la lente. Riattaccare il cono di plastica alla sonda del microscopio. Per generare un rapporto di valutazione diagnostica confocale fare clic su Nuova valutazione.

Inserisci la diagnosi dalle opzioni preselezionate nel menu a discesa. Selezionare le funzionalità visualizzate durante l'imaging dall'elenco di controllo del report e selezionare la gestione applicabile. Clicca su Fine e firma.

Generare il report in formato PDF e stamparlo. per acquisire immagini utilizzando il dispositivo HH-RCM, posizionare prima il paziente e pulire il sito della lesione e circondare la lesione con un anello di carta. Applicare una quantità di gel per ultrasuoni delle dimensioni di un pisello sulla lente dell'obiettivo dell'HH-RCM e coprirla con il cappuccio di plastica.

Aggiungi una generosa goccia di olio minerale sul lato del tappo di plastica che toccherà la pelle. Premere la sonda sul lato della lesione sulla pelle con una pressione decisa. Utilizzare i controlli di profondità Z sul dispositivo HH-RCM per spostarsi su e giù a varie profondità all'interno della lesione.

Acquisisci più immagini a fotogramma singolo e pile nelle regioni di interesse. Per lesioni di grandi dimensioni, eseguire video continui su vari livelli spostando la sonda HH-RCM su tutta la superficie della lesione e facendo clic sul simbolo di acquisizione video. Registrare il movimento delle cellule del sangue all'interno dei vasi.

Al termine della sessione di imaging, premere Fine imaging. Pulire la lesione con un tampone imbevuto di alcool, rimuovere il gel ad ultrasuoni dalla lente dell'obiettivo della sonda e riattaccare il cappuccio di plastica. Posizionare il paziente per l'imaging e assicurarsi che il confine della lesione sia privo di peli eccessivi e impurità topiche.

Dopo aver preparato la sonda come descritto nella sezione precedente, fare clic su Impostazioni imaging. Selezionare la modalità Line Imaging per acquisire un'immagine RCM. Impostare la dimensione del passo su cinque micron e il numero di passaggi su 40.

Acquisisci stack come mostrato nella sezione precedente facendo clic su Grab. Quindi fare clic sul pulsante Blocca dopo il completamento. Fare clic su Impostazioni di imaging e selezionare Modalità raster per acquisire un video OCT correlativo per l'architettura della lesione.

Passare alla scheda tecnico. Una volta completato, fai clic sul pulsante Grab e premi immediatamente il pulsante Salva. Utilizzando questo protocollo, sono state acquisite immagini RCM di alta qualità a profondità rilevanti nella pelle.

Dovrebbero essere evitati artefatti come bolle d'aria, detriti superficiali e artefatti di movimento che ostacolano la valutazione diagnostica. Su RCM, sono stati osservati vari strati cutanei come lo strato corneale, composto da cheratinociti anucleati, e lo strato spinoso, composto da cellule nucleate strettamente imballate con citoplasma luminoso che crea un tipico schema a nido d'ape. Questo è stato seguito dallo strato basale, identificato dal modello di ciottoli formato dal cappuccio di melanina dei cheratinociti basali.

E il DEJ caratterizzato dal motivo ad anelli luminosi. Il derma papillare era composto da fibre di collagene brillante e vasi sanguigni. Le immagini RCM per i tumori della pelle comuni, come il carcinoma a cellule basali, hanno mostrato noduli tumorali con schisi e palizzata.

Il carcinoma a cellule squamose ha mostrato un modello atipico a nido d'ape e vasi ad asola. E il melanoma ha mostrato gruppi di cellule pagetoidi rotonde luminose e grandi nell'epidermide. Per il carcinoma basocellulare, l'immagine RCM non è stata in grado di mostrare un nodulo tumorale definitivo.

Mentre le immagini RCM-OCT interpretate sia da pile che da raster hanno mostrato un nodulo tumorale grigio distinto collegato all'epidermide, insieme a fasci di collagene ispessiti e schisi. La diagnosi è stata confermata dalla biopsia colorata H & E. È importante acquisire mosaici di qualità diagnostica da cinque strati della pelle con WP-RCM Imaging.

Registrare un video fluido e impilare utilizzando HH-RCM e sia uno stack che un raster nella stessa area utilizzando il dispositivo RCM-OCT.