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Un approccio basato sulla spettrometria di massa per identificare le fosfatasi delle fosfoprotein...
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JoVE Journal Biochemistry
A Mass Spectrometry-Based Approach to Identify Phosphoprotein Phosphatases and their Interactors

Un approccio basato sulla spettrometria di massa per identificare le fosfatasi delle fosfoproteine e i loro interattori

Full Text
2,873 Views
10:17 min
April 29, 2022

DOI: 10.3791/63805-v

Kali A. Smolen1, Arminja N. Kettenbach1,2

1Department of Biochemistry and Cell Biology,Geisel School of Medicine at Dartmouth, 2Norris Cotton Cancer Center

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Qui presentiamo un protocollo per l'arricchimento delle fosfatasi fosfoproteine endogene e delle loro proteine interagenti da cellule e tessuti e la loro identificazione e quantificazione mediante proteomica basata sulla spettrometria di massa.

PIB-MS è una nuova tecnica utilizzata per arricchire le fosforproteine fosfatasi endogene e sono proteine interagenti da cellule e tessuti. Implica l'identificazione e la quantificazione di queste proteine utilizzando la proteomica basata sulla spettrometria di massa. Questa tecnica non richiede l'espressione esogena di versioni marcate di fosforproteina fosfatasi che potrebbero alterare l'attività o la localizzazione delle proteine.

Inoltre, non utilizza anticorpi che potrebbero essere non specifici o incapaci di distinguere tra isoforme specifiche. Questo metodo per studiare il PPPM può essere scalato per l'uso su tutto, dalle cellule ai campioni clinici. Per iniziare, raccogliere il pellet cellulare mediante centrifugazione a 277 volte g per due minuti a temperatura ambiente.

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