Tecniche di dissezione e campionamento istologico del cuore in modelli animali di grandi dimensioni per malattie cardiovascolari

Le differenze strutturali nel cuore tra specie e individui, così come le discrepanze nella letteratura richiedono una conoscenza approfondita dell'anatomia del cuore e l'aderenza a una rigorosa metodologia. Questa tecnica può migliorare l'uniformità dell'osservatore e aumentare la comparabilità e la riproducibilità della ricerca sperimentale sulle malattie cardiovascolari. Una persona che non ha familiarità con questa tecnica può avere difficoltà a identificare tutti i componenti del cuore.

La mia raccomandazione è di dedicare un po 'di tempo a familiarizzare con l'anatomia del cuore. Poiché l'anatomia complessa del cuore è difficile da comprendere, è necessaria una presentazione visiva del metodo. Per iniziare, pesare l'animale soggetto prima di posizionarlo sul tavolo necroscopico sul lato sinistro.

Quindi eseguire un esame esterno del soggetto ispezionando e palpando la cute e la mucosa, notando tutti i cambiamenti di colore, consistenza e volume. Quindi, usando un coltello, fai un'incisione affilata di sette centimetri nell'ascella destra. Dopo aver individuato la giunzione coxofemorale, aprire la capsula con un coltello e tagliare il legamento della testa del femore.

Estendere l'incisione cutanea nell'ascella cranica alla sinfisi mandibolare e caudalmente al peroneo. Rimuovere la pelle con il bisturi, esponendo la parete toracica e addominale dalla linea mediana ventrale al livello dei processi trasversali vertebrali. Successivamente, usando il bisturi e la pinza, creare un lembo attraverso la parete addominale, ventrocaudale all'arco costale destro.

Quindi, seguendo l'aspetto caudale dell'ipocondrio destro, aprire la cavità addominale con le forbici. Continuare ad estendere l'incisione caudalmente lungo la zona paralombare destra fino alla cresta iliaca esterna. Successivamente, estendere l'incisione fino all'inserimento pubico della linea alba ed esaminare brevemente gli organi addominali in situ per notare qualsiasi cambiamento nel loro colore, consistenza, volume e posizione.

Quindi, usando il bisturi e la pinza, forare il diaframma nel punto più alto. Quindi, utilizzando una pinza per tagliare l'osso, rimuovere la gabbia toracica destra sezionando prima il segmento cartilagineo parasternale e poi il segmento dorsale delle costole prossimali alle articolazioni costovertebrali. Esaminare il cuore in situ per notare le sue dimensioni, colore, posizione e connessioni con i tessuti adiacenti.

Inoltre, cerca qualsiasi cambiamento di coerenza mediante palpazione. Quindi, usando le forbici, aprire la cavità pericardica con una sezione longitudinale dalla base all'apice del cuore. Esaminare la cavità pericardica e l'epicardio per qualsiasi cambiamento di colore, consistenza e volume.

Successivamente, usando le forbici, rilasciare il cuore sezionando la vena cava superiore almeno un centimetro sopra l'ingresso nell'atrio destro, preservando la crista terminalis e producendo le sezioni trasversali dell'aorta, del tronco polmonare e di entrambe le vene cavae. Esaminare il contorno esterno dell'organo, l'aspetto dell'epicardio, quello del miocardio dalla trasparenza dell'epicardio e l'aspetto esterno dei grandi vasi. Per eseguire il metodo di afflusso-deflusso per la dissezione cardiaca, posizionare il cuore con la faccia atriale verso l'alto e, usando forbici e pinze senza denti, tagliare ampiamente dalla vena cava caudale nell'atrio destro.

Dopo aver tagliato il cuore all'appendice auricolare destra per esporre la crista terminalis o il nodo senoatriale, ispezionare la valvola tricuspide dalla vista dorsale. Quindi, tagliando una sezione dall'atrio destro alla giunzione tra il ventricolo destro e il setto intraventricolare, visualizzare la valvola atrioventricolare destra. Quindi, sezionare la parete libera del ventricolo destro lungo il setto intraventricolare fino all'origine del tronco polmonare.

Dopo aver esaminato accuratamente le valvole atrioventricolari destre, comprese le corde tendinee e i muscoli papillari, tagliare le corde tendinee. Quindi, posizionare la pinza lungo il tronco polmonare e tagliare il tronco longitudinalmente per esaminare il tratto di deflusso polmonare, l'origine del tronco polmonare e le valvole semilunari. Per ispezionare la valvola bicuspide dalla vista dorsale, tagliare l'atrio sinistro dalle vene polmonari alla punta del padiglione auricolare sinistro.

Quindi, posizionare il cuore con il setto interventricolare rivolto verso il basso e praticare una grande incisione nella parete libera ventricolare dalla base del ventricolo all'apice cardiaco. Quindi, tagliare le corde tendinee della cuspide della valvola atrioventricolare sinistra. Infine, aprire l'aorta posizionando una pinza attraverso il tratto di efflusso ventricolare sinistro.

Utilizzare soluzione salina per rimuovere tutti i coaguli di sangue e pesare il cuore. Per prelevare campioni per l'istologia, in primo luogo, effettuare due tagli longitudinali paralleli, a circa cinque millimetri di distanza, con un bisturi che coinvolge l'atrio destro, la valvola tricuspide e la parete libera ventricolare destra. Quindi, eseguire due tagli paralleli simili che coinvolgono l'atrio sinistro, la valvola mitrale, il muscolo papillare dorsale e il ventricolo sinistro.

All'interno del terzo superiore dorsale del cuore, sezione trasversale la base del cuore seguendo una linea, compreso il setto interventricolare, l'atrio destro, l'aorta, la valvola aortica e la valvola tricuspide. E fai due tagli longitudinali paralleli che coinvolgono la base dell'aorta e il setto interventricolare. Quindi, tagliare l'atrio destro attorno al crista terminalis.

Per ottenere sei pezzi del nodo senoatriale, fare diverse sezioni parallele a circa tre o quattro millimetri di distanza, orientate trasversalmente sull'asse longitudinale della crista. Quindi, tagliare i tessuti ottenuti in cassette istologiche e immergere i tessuti in formalina tamponata neutra al 10% per almeno 48 ore. Per campionare le arterie coronarie, utilizzare una pinza e un bisturi per sezionare le arterie coronarie dal solco paracanale e fissarle in formalina tamponata neutra al 10% durante la notte.

Se necessario, decalcificare il tessuto in una miscela uno-a-uno di acido formico all'8% e acido cloridrico. Quindi, eseguire diversi tagli trasversali a circa tre millimetri di distanza. Posizionare le sezioni in una cassetta istologica e mettere la cassetta in formalina tamponata neutra al 10% per l'incorporamento.

Dopo aver fissato il cuore in formalina tamponata neutra al 10% per almeno 48 ore, posizionare due pinze di dissezione dritte senza denti. Uno attraverso la cava cranica, l'atrio destro, la valvola tricuspide e il ventricolo destro. E l'altro attraverso la vena polmonare, l'atrio sinistro, la valvola mitrale e il ventricolo sinistro.

Utilizzando lo spazio tra le pinze come guida, utilizzare una lama da taglio per tagliare dalla base all'apice del cuore. A circa cinque millimetri di distanza, tagliare un'altra sezione longitudinale del segmento cardiaco che include l'aorta. Quindi, separare completamente la base cardiaca dall'apice.

Dopo aver posizionato ciascun segmento di tessuto in una cassetta istologica, posizionare le cassette in formalina tamponata neutra al 10% fino all'incorporazione. Questo protocollo ha permesso una corretta visualizzazione delle caratteristiche esterne e delle strutture interne del cuore. Utilizzando questa tecnica, campioni di tessuto cardiaco potrebbero essere raccolti con successo per studi istologici da diversi animali come cani e gatti.

Sii sempre cauto mentre rilasci il cuore perché potrebbe danneggiare alcune strutture di interesse. E anche, durante la dissezione, la raccolta e l'incorporazione del nodo senoatriale. Sebbene questo metodo sia stato creato per diagnosticare la modellazione dell'aritmia, la cardiomiopatia ipertrofica, l'infarto miocardico e l'intossicazione cardiaca, può essere utilizzato per diagnosticare qualsiasi condizione cardiaca.