Name: Un modello di topi di danno peritoneale indotto da clorexidina gluconato (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-04-28T14:45:00.000+00:00
Duration: 4 min 25 s
Description: Impara a stabilire un modello murino di fibrosi peritoneale indotta da clorexidina gluconato per la dialisi peritoneale. Questo protocollo semplice e visibile facilita lo studio dei cambiamenti fisiopatologici durante la terapia.

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Ringraziamo sinceramente Shin-Han Tseng per la discussione critica e l'esecuzione parziale dello studio. Questo studio è stato supportato da EDAHP110003 e NCKUEDA110002 della Research Foundation dell'E-DA Hospital e della National Cheng Kung University, Taiwan.

Tutti gli esperimenti sui topi sono stati approvati dal Laboratory Animal Center dell'E-DA Hospital / I-Shou University e sono stati gestiti secondo la "Guida per la cura e l'uso degli animali da laboratorio" (NRC, USA 2011). Per il presente studio sono stati utilizzati topi maschi C57BL/6, di 7-8 settimane.
1. Preparazione chimica
<ol><li>Preparare l'irritante chimico diluendo lo 0,1% di clorexidina gluconato (CG, vedi Tabella dei materiali) in etanolo al 15%.</li>
</ol>2. Trattamento degli animali
<ol><li>Assegnare tre topi come gruppo di controllo. Eseguire l'iniezione intraperitoneale (i.p.) di 1 ml/kg di soluzione salina normale allo 0,9% (NS) a giorni alterni per 3 settimane, per un totale di nove volte.</li>
	<li>Assegnare tre topi al gruppo di fibrosi peritoneale. Indurre la fibrosi peritoneale utilizzando clorexidina gluconato (CG) somministrando iniezioni i.p. dello 0,1% di CG in etanolo al 15% (fase 1.1) alla dose di 12,5 μL/g di peso corporeo. Eseguilo a giorni alterni per 3 settimane, per un totale di nove volte.</li>
</ol>3. Test di funzionalità peritoneale (test di equilibrio peritoneale modificato)
<ol><li>Preparare una soluzione di dialisi contenente glucosio al 4,25%. Prelevare 0,5 ml di campione di dializzato con una siringa, quindi controllare la concentrazione di glucosio nel campione di dializzato. NOTA: La concentrazione di glucosio è determinata secondo il metodo esochinasi/G6PD. I campioni di dializzato sono stati sottoposti al test Glu 2 di tipo L e sono stati studiati con un analizzatore biochimico (vedi Tabella dei materiali). Questa è la concentrazione iniziale di glucosio dializzato.</li>
	<li>Anestetizzare i topi mediante iniezione intramuscolare di Zoletil e Xilazina (preparati in un rapporto di 1:2 in volume, vedere Tabella dei materiali) alla dose di 20 μL/20 gw. Inoltre, utilizzare un unguento veterinario sugli occhi per prevenire la secchezza in anestesia.</li>
	<li>Eseguire l'instillazione i.p. della soluzione di dialisi (2 ml/20 g di peso corporeo).</li>
	<li>Dopo 30 minuti, valutare e verificare la profondità dell'anestesia con mancanza di riflesso del pizzico della punta. Quindi, eseguire un'incisione verticale nella linea mediana dell'addome (sotto il processo xifoideo), quindi aprire l'addome dei topi e raccogliere il liquido intraperitoneale con una siringa (definita come "volume 1"). Quindi, misurare il peso di un cotone pulito e asciutto e mettere il cotone nella cavità addominale dei topi per assorbire il liquido intraperitoneale residuo. Infine, misurare nuovamente il peso del cotone. NOTA: L'aumento di peso del cotone è uguale al peso del liquido intraperitoneale residuo. Quindi, convertire nel volume ottenuto (peso specifico: 1 g / cm3; definito come "volume 2"). Il volume finale del dializzato è il volume 1 più il volume 2.</li>
	<li>Utilizzare 0,5 ml di campione di dializzato (dializzato finale) per misurare la concentrazione di glucosio. Questa è la concentrazione finale di glucosio dializzato.</li>
	<li>Calcolare l'ultrafiltrazione netta utilizzando la formula15: <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/63903/63903eq01.jpg" style="margin: auto;"></li>
	<li>Calcolare la permeabilità peritoneale utilizzando la seguente formula15: <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/63903/63903eq02.jpg" style="margin: auto;"></li>
</ol>4. Preparazione tissutale del muscolo della parete addominale e del fegato e analisi istologica
<ol><li>Sacrificare i topi mediante puntura cardiaca (flebotomia)3,16.</li>
	<li>Tagliare la parete addominale (1 cm x 1 cm) ed epatectomia totale. Fissare la parete addominale dei topi e i tessuti del fegato durante la notte in formalina tamponata neutra al 10%.</li>
	<li>Preparare sezioni di paraffina spesse 3 μm del muscolo della parete addominale e del fegato ed eseguire l'analisi istologica seguendo il rapporto17 precedentemente pubblicato.</li>
	<li>Valutare il peritoneo parietale della parete addominale e il peritoneo viscerale delle superfici epatiche dei topi usando la morfometria18.</li>
	<li>Eseguire analisi statistiche utilizzando software di statistica e grafici (vedi Tabella dei materiali). Esprimere tutti i dati come media ± SD e analizzare la significatività statistica utilizzando un t-test19. Definire valori con P &lt; 0,05 come risultati significativi.</li>
</ol>

<ol><li>Han, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+outcome+of+CAPD%3A+twenty-five+years%27+experience+in+a+single+Korean+center%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Improving outcome of CAPD: twenty-five years' experience in a single Korean center.</a> Peritoneal Dialysis International. 27 (4), 432-440 (2007).</li>
<li>Kawaguchi, Y., Hasegawa, T., Nakayama, M., Kubo, H., Shigematu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Issues+affecting+the+longevity+of+the+continuous+peritoneal+dialysis+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International+Supplements%22%5BJournal%5D)">Issues affecting the longevity of the continuous peritoneal dialysis therapy.</a> Kidney International Supplements. 62, 105-107 (1997).</li>
<li>Lee, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vitamin+D+can+ameliorate+chlorhexidine+gluconate-induced+peritoneal+fibrosis+and+functional+deterioration+through+the+inhibition+of+epithelial-to-mesenchymal+transition+of+mesothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22BioMed+Research+International%22%5BJournal%5D)">Vitamin D can ameliorate chlorhexidine gluconate-induced peritoneal fibrosis and functional deterioration through the inhibition of epithelial-to-mesenchymal transition of mesothelial cells.</a> BioMed Research International. 2015, 595030(2015).</li>
<li>Nakamoto, H., Kawaguchi, Y., Suzuki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+technique+survival+on+peritoneal+dialysis+better+in+Japan%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Is technique survival on peritoneal dialysis better in Japan.</a> Peritoneal Dialysis International. 26 (2), 136-143 (2006).</li>
<li>Schaefer, F., Klaus, G., Muller-Wiefel, D. E., Mehls, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+practice+of+peritoneal+dialysis+in+children%3A+results+of+a+longitudinal+survey.+Mid+European+Pediatric+Peritoneal+Dialysis+Study+Group+%28MEPPS%29%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Current practice of peritoneal dialysis in children: results of a longitudinal survey. Mid European Pediatric Peritoneal Dialysis Study Group (MEPPS).</a> Peritoneal Dialysis International. 19, Suppl 2 445-449 (1999).</li>
<li>Woodrow, G., Turney, J. H., Brownjohn, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technique+failure+in+peritoneal+dialysis+and+its+impact+on+patient+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Technique failure in peritoneal dialysis and its impact on patient survival.</a> Peritoneal Dialysis International. 17 (4), 360-364 (1997).</li>
<li>Schmidt, D. W., Flessner, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+and+treatment+of+encapsulating+peritoneal+sclerosis%3A+basic+and+translational+research%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis and treatment of encapsulating peritoneal sclerosis: basic and translational research.</a> Peritoneal Dialysis International. 28, Suppl 5 10-15 (2008).</li>
<li>Augustine, T., Brown, P. W., Davies, S. D., Summers, A. M., Wilkie, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Encapsulating+peritoneal+sclerosis%3A+clinical+significance+and+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Nephron+Clinical+Practice%22%5BJournal%5D)">Encapsulating peritoneal sclerosis: clinical significance and implications.</a> Nephron Clinical Practice. 111 (2), 149-154 (2009).</li>
<li>Di Paolo, N., Nicolai, G. A., Garosi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+peritoneum%3A+from+histological+studies+to+mesothelial+transplant+through+animal+experimentation%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">The peritoneum: from histological studies to mesothelial transplant through animal experimentation.</a> Peritoneal Dialysis International. 28, Suppl 5 5-9 (2008).</li>
<li>Fusshoeller, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histomorphological+and+functional+changes+of+the+peritoneal+membrane+during+long-term+peritoneal+dialysis%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Histomorphological and functional changes of the peritoneal membrane during long-term peritoneal dialysis.</a> Pediatric Nephrology. 23 (1), 19-25 (2008).</li>
<li>Goffin, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peritoneal+membrane+structural+and+functional+changes+during+peritoneal+dialysis%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Dialysis%22%5BJournal%5D)">Peritoneal membrane structural and functional changes during peritoneal dialysis.</a> Seminars in Dialysis. 21 (3), 258-265 (2008).</li>
<li>Ito, T., Yorioka, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peritoneal+damage+by+peritoneal+dialysis+solutions%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Experimental+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Peritoneal damage by peritoneal dialysis solutions.</a> Clinical and Experimental Nephrology. 12 (4), 243-249 (2008).</li>
<li>Io, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SAHA+suppresses+peritoneal+fibrosis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">SAHA suppresses peritoneal fibrosis in mice.</a> Peritoneal Dialysis International. 35 (3), 246-258 (2015).</li>
<li>Yoh, K., Ojima, M., Takahashi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Th2-biased+GATA-3+transgenic+mice+developed+severe+experimental+peritoneal+fibrosis+compared+with+Th1-biased+T-bet+and+Th17-biased+RORgammat+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Animals%22%5BJournal%5D)">Th2-biased GATA-3 transgenic mice developed severe experimental peritoneal fibrosis compared with Th1-biased T-bet and Th17-biased RORgammat transgenic mice.</a> Experimental Animals. 64 (4), 353-362 (2015).</li>
<li>Karl, Z. J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peritoneal+Equilibration+Test%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Peritoneal Equilibration Test.</a> Peritoneal Dialysis International. 7 (3), 138-148 (1987).</li>
<li>Lee, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+clinical+implication+of+vitamin+D+nanomedicine+for+peritoneal+dialysis-related+peritoneal+damage%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">The clinical implication of vitamin D nanomedicine for peritoneal dialysis-related peritoneal damage.</a> International Journal of Nanomedicine. 14, 9665-9675 (2019).</li>
<li>Goldner, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modification+of+the+masson+trichrome+technique+for+routine+laboratory+purposes%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Modification of the masson trichrome technique for routine laboratory purposes.</a> The American Journal of Pathology. 14 (2), 237-243 (1938).</li>
<li>Cheng, F. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+application+of+magnetite+nanoparticle-mediated+vitamin+D3+delivery+for+peritoneal+dialysis-related+peritoneal+damage%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Novel application of magnetite nanoparticle-mediated vitamin D3 delivery for peritoneal dialysis-related peritoneal damage.</a> International Journal of Nanomedicine. 16, 2137-2146 (2021).</li>
<li>Ross, A., Willson, V. L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRoss%2C+A+%22Basic+and+Advanced+Statistical+Tests%3A+Writing+Results+Sections+and+Creating+Tables+and+Figures%22">Basic and Advanced Statistical Tests: Writing Results Sections and Creating Tables and Figures</a>. , SensePublishers. 13-16 (2017).</li>
<li>Suga, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preventive+effect+of+pirfenidone+against+experimental+sclerosing+peritonitis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+and+Toxicologic+Pathology%22%5BJournal%5D)">Preventive effect of pirfenidone against experimental sclerosing peritonitis in rats.</a> Experimental and Toxicologic Pathology. 47 (4), 287-291 (1995).</li>
<li>Ishii, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+experimental+sclerosing+encapsulating+peritonitis+model+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrology+Dialysis+Transplantation%22%5BJournal%5D)">An experimental sclerosing encapsulating peritonitis model in mice.</a> Nephrology Dialysis Transplantation. 16 (6), 1262-1266 (2001).</li>
<li>Nishino, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antisense+oligonucleotides+against+collagen-binding+stress+protein+HSP47+suppress+peritoneal+fibrosis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International%22%5BJournal%5D)">Antisense oligonucleotides against collagen-binding stress protein HSP47 suppress peritoneal fibrosis in rats.</a> Kidney International. 64 (3), 887-896 (2003).</li>
<li>Mishima, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+expression+of+heat+shock+protein+47+in+rat+model+of+peritoneal+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Enhanced expression of heat shock protein 47 in rat model of peritoneal fibrosis.</a> Peritoneal Dialysis International. 23 (1), 14-22 (2003).</li>
<li>Kushiyama, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+liposome-encapsulated+clodronate+on+chlorhexidine+gluconate-induced+peritoneal+fibrosis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrology+Dialysis+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Effects of liposome-encapsulated clodronate on chlorhexidine gluconate-induced peritoneal fibrosis in rats.</a> Nephrology Dialysis Transplantation. 26 (10), 3143-3154 (2011).</li>
<li>Nishino, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+lymphocyte+infiltration+in+the+progression+of+mouse+peritoneal+fibrosis+model%5BTitle%5D)+AND+%22Renal+Failure%22%5BJournal%5D)">Involvement of lymphocyte infiltration in the progression of mouse peritoneal fibrosis model.</a> Renal Failure. 34 (6), 760-766 (2012).</li>
<li>Lua, I., Li, Y., Pappoe, L. S., Asahina, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myofibroblastic+conversion+and+regeneration+of+mesothelial+cells+in+peritoneal+and+liver+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Myofibroblastic conversion and regeneration of mesothelial cells in peritoneal and liver fibrosis.</a> The American Journal of Pathology. 185 (12), 3258-3273 (2015).</li>
<li>Kitamura, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigallocatechin+gallate+suppresses+peritoneal+fibrosis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Chemico-Biological+Interactions%22%5BJournal%5D)">Epigallocatechin gallate suppresses peritoneal fibrosis in mice.</a> Chemico-Biological Interactions. 195 (1), 95-104 (2012).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

In questo studio, un modello di PD murino è presentato mediante iniezione i.p. di CG e i risultati hanno mostrato fibrosi peritoneale e deterioramento funzionale in questo modello, che imitava le condizioni del paziente PD.
Ci sono diversi passaggi critici nel protocollo. In primo luogo, per eseguire un'iniezione i.p. di CG o NS, la pelle della parete addominale del topo deve essere prelevata usando una pinza per prevenire danni agli organi intraperitoneali indotti dalla puntura. In secondo lu...

La dialisi peritoneale (PD) è un tipo di terapia sostitutiva renale. Tuttavia, il PD ha problemi che non possono essere risolti. Ad esempio, il trattamento a lungo termine della malattia di Parkinson può causare danni peritoneali, portando infine al fallimento dell'ultrafiltrazione e alla sospensione del trattamento 1,2,3,4,5,6. La fibrosi peritoneale è una delle complicanze più gravi 7,8. La fibrosi peritoneale è caratterizzata dalla deposizione e dall'accumulo di matrice extracellulare all'interno dell'interstizio e dalla neoangiogenesi e vasculopatia del peritoneo 9,10.
Le cause principali di questi cambiamenti peritoneali sono la peritonite ricorrente e la non biocompatibilità del dializzato, che sono iperosmotiche, alto glucosio, basso pH e accumulo di prodotti di degradazione del glucosio11,12. Pertanto, modelli sperimentali animali adatti possono aiutare i ricercatori a studiare meglio i cambiamenti fisiologici e patologici del peritoneo durante la terapia con PD. Pertanto, stabilire un modello animale di PD è importante per migliorare la tecnologia PD e l'efficacia della dialisi e prolungare la sopravvivenza del paziente. Questo studio mirava a generare un modello murino PD mediante iniezione intraperitoneale (i.p.) di clorexidina gluconato (CG), come descritto in precedenza13,14. Questo modello di topo PD è semplice, facile da usare e fattibile rispetto ad altri modelli animali PD.

<table><tbody><tr><td>0,9% Soluzione salina normale</td><td>Y F CHEMICAL CORP., New Taipei City,</td> <td>Taiwan-10</td><td></td></tr><tr><td>% formalina tamponata neutra</td><td>Taiwan Burnett International Co., Ltd., Taipei City, Taiwan</td><td>00002A</td><td></td></tr><tr><td>Analizzatore biochimico automatico</td><td>Hitachi Ltd., Tokyo, Giappone</td><td>Labospect Serie 008</td><td>per la determinazione della concentrazione di glucosio</td></tr><tr><td>Soluzione di clorexidina digluconato, 20% in H2O</td><td>Sigma-Aldrich, MO, USA</td><td>C9394</td><td>diluito allo 0,1% con etanolo al 15% per iniezione</td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Avantor Performance Materials, LLC, PA, USA</td><td>BAKR8006-05</td><td>diluito al 15% con soluzione fisiologica normale per la concentrazione di lavoro</td></tr><tr><td>Glucosio (Dianeal)</td><td>Baxter International, Inc., IL, USA</td><td>FNB9896</td><td>Soluzione per dialisi commerciale (4,25%)</td></tr><tr><td>GraphPad Prism 8.0</td><td>GraphPad Software, Inc., CA, US</td><td></td><td></td></tr><tr><td>L-type Glu 2 assay</td><td>FUJIFILM Wako, Giappone</td><td>461-32403</td><td></td></tr><tr><td>Xilazina 20</td><td>Juily Pharmaceutical Co., Ltd., New Taipei City,</td> <td>Taiwan-Zoletil</td><td></td></tr> <tr><td>50</td><td>Virbac Laboratories, Carros, Francia</td><td>-</td><td></td></tr></tbody></table>

un modello di topi di danno peritoneale indotto da clorexidina gluconato

A Mice Model of Chlorhexidine Gluconate-Induced Peritoneal Damage

La fibrosi peritoneale è un'importante complicanza della dialisi peritoneale (PD). Per indagare e affrontare questo problema, è necessario un modello animale appropriato di PD. Il presente protocollo stabilisce un modello di fibrosi peritoneale indotta da clorexidina gluconato (CG) che imita la condizione di un paziente con PD. La fibrosi peritoneale è stata indotta mediante iniezione intraperitoneale dello 0,1% di CG in etanolo al 15% per 3 settimane (somministrato a giorni alterni), per un totale di nove volte nei topi maschi C57BL / 6. I test funzionali peritoneali sono stati quindi eseguiti il giorno 22. Dopo che i topi sono stati sacrificati, sono stati raccolti il peritoneo parietale della parete addominale e il peritoneo viscerale del fegato. Erano più spessi e più fibrotici se analizzati al microscopio dopo la colorazione tricromatica di Masson. La velocità di ultrafiltrazione è diminuita e il trasporto di massa di glucosio ha indicato un aumento della permeabilità peritoneale indotto da CG. Il modello PD così stabilito può avere applicazioni nel miglioramento della tecnologia PD, nell'efficacia della dialisi e nel prolungamento della sopravvivenza del paziente.

Nella Figura 1A,B, il peritoneo parietale della parete addominale era marcatamente più spesso e più fibrotico sotto la colorazione tricromatica di Masson17, indicando che nel gruppo esposto a CG, la fibrosi peritoneale è più grave rispetto al gruppo salino di controllo (NS). Nella Figura 2A,B, il peritoneo viscerale delle superfici epatiche era anche marcatamente più spesso e più fibrotico, dimostrando così che nel gruppo...

Il presente protocollo stabilisce un modello murino di dialisi peritoneale (PD) di fibrosi peritoneale indotta da clorexidina gluconato (CG). Il modello attuale è semplice e facile da usare rispetto ad altri modelli animali PD.

Un modello di topi di danno peritoneale indotto da clorexidina gluconato

Peritoneal fibrosis is an important complication of peritoneal dialysis (PD). To investigate and address this problem, an appropriate animal model of PD ...

Stabilire un modello animale per la dialisi peritoneale, PD, è molto importante. Speriamo che possa migliorare la tecnologia e l'efficacia della terapia PD e alla fine migliorare la sopravvivenza del paziente. Questo modello murino di dialisi peritoneale è semplice, facile da usare e visibile rispetto ad altri modelli animali di dialisi peritoneale.Un modello animale di dialisi peritoneale adatto può aiutare i ricercatori a studiare il cambiamento peritoneale, fisiologico e patologico durante la terapia PD. A dimostrazione della procedura sarà Fang-Ling Liao, un assistente di ricerca del mio laboratorio. Per iniziare, preparare l'irritante chimico diluendo lo 0,1% di clorexidina gluconato in etanolo al 15%.Quindi, assegnare tre topi come gruppo di controllo e iniettare un millilitro per chilogrammo di soluzione salina normale allo 0,9% per via intraperitoneale a giorni alterni per tre settimane per un totale di nove volte. Quindi assegnare tre topi al gruppo di fibrosi peritoneale e indurre la fibrosi peritoneale somministrando un'iniezione intraperitoneale di soluzione gluconato di clorexidina allo 0,1% preparata in precedenza alla dose di 12,5 microlitri per chilogrammo di peso corporeo. Per i test di funzionalità peritoneale, preparare una soluzione di dialisi contenente glucosio al 4,25%.Quindi utilizzare una siringa per prelevare 0,5 millilitri di campione di dializzato. Preparare un'iniezione di zoletil e xilazina e anestetizzare i topi somministrando un'iniezione intramuscolare. Eseguire l'installazione intraperitoneale della soluzione di dialisi alla dose di due millilitri per 20 grammi di peso corporeo.Fare una piccola incisione nella linea mediana dell'addome e raccogliere il principale liquido intraperitoneale con una siringa. Dopo 30 minuti, eseguire un'incisione verticale nella linea mediana dell'addome sotto il processo xifoideo e aprire l'addome del topo per raccogliere il liquido intraperitoneale residuo con una siringa. Quindi, misurare il peso di un batuffolo di cotone pulito e asciutto.Metti il cotone nella cavità addominale del topo per assorbire il liquido intraperitoneale residuo e poi rimuoverlo. Misurare nuovamente il peso del cotone. La colorazione tricromatica di Masson ha mostrato che il peritoneo parietale della parete addominale nel gruppo esposto al gluconato di clorexidina era marcatamente più spesso e fibrotico rispetto al gruppo di controllo.Il peritoneo viscerale delle superfici epatiche era anche significativamente più spesso e fibrotico nel gruppo esposto al gluconato di clorexidina rispetto al gruppo salino di controllo, indicando che la fibrosi peritoneale è più grave nel gruppo esposto al gluconato di clorexidina. Il gruppo esposto al gluconato di clorexidina ha mostrato una diminuzione del tasso di ultrafiltrazione e un aumento del trasporto di massa di glucosio, indicando che la permeabilità peritoneale aumenta nei topi esposti alla clorexidina gluconato Durante l'esecuzione di una procedura di iniezione intraperitoneale, utilizzare il forcipe e scegliere la pelle addominale del topo per prevenire danni agli organi intraperitoneali indotti dalla puntura.

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Fonte: de Vries, C. R., et.al. Un modello di inoculazione ritardata dell'infezione cronica della ferita da Pseudomonas aeruginosa . J. Vis. Esp. (2020)Questo video mostra l'inoculazione ritardata di Pseudomonas aeruginosa luminosa in un topo con due ferite dorsali a spessore totale coperte da una medicazione trasparente. Questo facilita la formazione di biofilm e l'instaurazione di infezioni croniche. Il monitoraggio regolare della bioluminescenza consente la quantificazione del carico...

Sviluppo di un modello topino di infezione cutanea cronica da Pseudomonas aeruginosa 

Qui descriviamo un nuovo modello murino diabetico utilizzando topi glabri per il monitoraggio in tempo reale, non invasiva, di infezioni di ferita di biofilm di bioluminescenti Pseudomonas aeruginosa. Questo metodo può essere adattato ad infezione di altre specie di batteri e microrganismi geneticamente modificati, inclusi i biofilm multi-specie, di valutare e testare l'efficacia delle strategie di antibiofilm.

Vieni nel lato di luce: In Vivo monitoraggio di Pseudomonas aeruginosa Biofilm infezioni nelle ferite croniche in un modello murino Hairless diabetico

Questo articolo viene illustrato il metodo per l'inserimento chirurgico in topi di un catetere intraperitoneale collegata a una porta di accesso che è posizionata nella parte posteriore dell'animale. Inoltre, spiega la procedura per 5/6 di nefrectomia assomigliare lo stato uremico di pazienti del Palladio.

Tecniche chirurgiche per la disposizione del catetere e 5/6 di nefrectomia nei modelli murini di dialisi peritoneale

Le ferite croniche sono sviluppate da ferite acute su un modello di topo diabetico inducendo alti livelli di stress ossidativo dopo una ferita cutanea a tutto spessore. La ferita viene trattata con inibitori per catalasi e glutathione peroxidasi, con conseguente alterazione della guarigione e sviluppo di biofilm da parte di batteri presenti nel microbioma cutaneo.

Protocollo per creare ferite croniche nei topi diabetici

Qui, presentiamo un protocollo per indurre localmente la parodontite apicale nei topi. Mostriamo come praticare un foro nel dente del topo ed esporre la sua polpa, al fine di causare infiammazione locale. Sono inoltre dimostrati metodi di analisi per studiare la natura di questa infiammazione, come la micro-TC e l'istologia.

Indurre la parodontite apicale nei topi

Il presente protocollo descrive un metodo chirurgico standardizzato per il modello AAA indotto da elastasi attraverso l'applicazione diretta di elastasi all'avventizia dell'aorta addominale infrarenale nei topi.

Modello di aneurisma dell'aorta addominale del topo indotto dall'applicazione perivascolare dell'elastasi

Questo articolo descrive le modifiche di una procedura per impiantare un catetere per dialisi peritoneale in un modello murino per evitare importanti problemi tecnici osservati con le tecniche convenzionali.

Un approccio di impianto retrogrado per il posizionamento del catetere di dialisi peritoneale nei topi

Questo studio presenta due tecniche sperimentali cruciali: la costruzione di un modello di ferita murina per valutare la chiusura della ferita e la preparazione di sospensioni unicellulari dalla pelle murina per preservare la vitalità cellulare.

Modelli di ferita nel topo e preparazione di sospensioni a cellula singola

Questo manoscritto presenta un protocollo per stabilire un modello murino di aneurisma dell'aorta addominale utilizzando cloruro di calcio ed elastasi, combinando i vantaggi dei precedenti metodi di modellazione. Questo modello può essere utilizzato per studiare i meccanismi fisiopatologici alla base degli aneurismi dell'aorta addominale.

Un modello murino di aneurisma dell'aorta addominale mediante cloruro di calcio periavventiziale e infiltrazione di elastasi

La somministrazione intraperitoneale di farmaci è un approccio non invasivo sicuro ed efficace per indurre lesioni pancreatiche. Questo studio ha confrontato cinque distinti protocolli di iniezione intraperitoneale sui topi per indurre vari gradi di danno pancreatico e ha stabilito un modello di grave danno pancreatico per studiare i cambiamenti patologici e le strategie di trattamento per la pancreatite acuta grave (SAP).

Preparazione di un modello murino di pancreatite acuta grave tramite una combinazione di iniezione intraperitoneale di ceruleina e lipopolisaccaride

Impara a stabilire un modello murino di fibrosi peritoneale indotta da clorexidina gluconato per la dialisi peritoneale. Questo protocollo semplice e visibile facilita lo studio dei cambiamenti fisiopatologici durante la terapia.

Un modello di topi di danno peritoneale indotto da clorexidina gluconato

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