Name: Misurazione della vasorilassazione endotelio-dipendente nellaorta toracica del topo mediante miografia tensometrica a camera di piccolo volume (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-08-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 47 s
Description: Scopri la miografia tensometrica per misurare la vasorilassazione endotelio-dipendente nell'aorta toracica del topo. Questo metodo affidabile consente di studiare la funzione vascolare e la reattività endoteliale in condizioni fisiologiche controllate.

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Questo lavoro è stato sostenuto da finanziamenti del National Institutes of Health (R15HL145646) e del Midwestern University College of Graduate Studies.

<ol><li>Wenceslau, C. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+for+the+measurement+of+vascular+function+and+structure+in+isolated+arteries+and+veins%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Guidelines for the measurement of vascular function and structure in isolated arteries and veins.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 321 (1), 77-111 (2021).</li>
<li>Deanfield, J. E., Halcox, J. P., Rabelink, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+function+and+dysfunction%3A+Testing+and+clinical+relevance%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Endothelial function and dysfunction: Testing and clinical relevance.</a> Circulation. 115 (10), 1285-1295 (2007).</li>
<li>Lerman, A., Zeiher, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+function%3A+Cardiac+events%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Endothelial function: Cardiac events.</a> Circulation. 111 (3), 363-368 (2005).</li>
<li>Rajendran, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+vascular+endothelium+and+human+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Biological+Sciences%22%5BJournal%5D)">The vascular endothelium and human diseases.</a> International Journal of Biological Sciences. 9 (10), 1057-1069 (2013).</li>
<li>Galley, H. F., Webster, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiology+of+the+endothelium%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Anaesthesia%22%5BJournal%5D)">Physiology of the endothelium.</a> British Journal of Anaesthesia. 93 (1), 105-113 (2004).</li>
<li>Orita, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+evaluation+of+phosphate%2C+bicarbonate%2C+and+Hepes+buffered+storage+solutions+on+hypothermic+injury+to+immature+myocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Drugs+and+Therapy%22%5BJournal%5D)">In vitro evaluation of phosphate, bicarbonate, and Hepes buffered storage solutions on hypothermic injury to immature myocytes.</a> Cardiovascular Drugs and Therapy. 8 (6), 851-859 (1994).</li>
<li>Liu, Y. H., Bian, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bicarbonate-dependent+effect+of+hydrogen+sulfide+on+vascular+contractility+in+rat+aortic+rings%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology.+Cell+Physiology%22%5BJournal%5D)">Bicarbonate-dependent effect of hydrogen sulfide on vascular contractility in rat aortic rings.</a> American Journal of Physiology. Cell Physiology. 299 (4), 866-872 (2010).</li>
<li>Griffiths, K., Madhani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+wire+myography+to+investigate+vascular+tone+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%3A+Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">The use of wire myography to investigate vascular tone and function.</a> Methods in Molecular Biology: Atherosclerosis. 2419, 361-367 (2022).</li>
<li>Pfeiffer, S., Leopold, E., Schmidt, K., Brunner, F., Mayer, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+nitric+oxide+synthesis+by+NG-nitro-L-arginine+methyl+ester+%28L-NAME%29%3A+Requirement+for+bioactivation+to+the+free+acid%2C+NG-nitro-L-arginine%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Inhibition of nitric oxide synthesis by NG-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME): Requirement for bioactivation to the free acid, NG-nitro-L-arginine.</a> British Journal of Pharmacology. 118 (6), 1433-1440 (1996).</li>
<li>Bacon, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cell+dysfunction+in+systemic+vasculitis%3A+New+developments+and+therapeutic+prospects%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Rheumatology%22%5BJournal%5D)">Endothelial cell dysfunction in systemic vasculitis: New developments and therapeutic prospects.</a> Current Opinion in Rheumatology. 17 (1), 49-55 (2005).</li>
<li>Gallo, G., Volpe, M., Savoia, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+dysfunction+in+hypertension%3A+Current+concepts+and+clinical+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Medicine%22%5BJournal%5D)">Endothelial dysfunction in hypertension: Current concepts and clinical implications.</a> Frontiers in Medicine. 8, 798958(2021).</li>
<li>Mikolajczyk, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+important+role+of+endothelium+and+extracellular+vesicles+in+the+cellular+mechanism+of+aortic+aneurysm+formation%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">The important role of endothelium and extracellular vesicles in the cellular mechanism of aortic aneurysm formation.</a> International Journal of Molecular Sciences. 22 (23), 13157(2021).</li>
<li>Vallance, P., Hingorani, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+nitric+oxide+in+humans+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Experimental+Pathology%22%5BJournal%5D)">Endothelial nitric oxide in humans in health and disease.</a> International Journal of Experimental Pathology. 80 (6), 291-303 (1999).</li>
<li>Tousoulis, D., Kampoli, A. M., Tentolouris, C., Papageorgiou, N., Stefanadis, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+nitric+oxide+on+endothelial+function%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Vascular+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">The role of nitric oxide on endothelial function.</a> Current Vascular Pharmacology. 10 (1), 4-18 (2012).</li>
<li>Gibson, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mild+aerobic+exercise+blocks+elastin+fiber+fragmentation+and+aortic+dilatation+in+a+mouse+model+of+Marfan+syndrome+associated+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Physiology%22%5BJournal%5D)">Mild aerobic exercise blocks elastin fiber fragmentation and aortic dilatation in a mouse model of Marfan syndrome associated aortic aneurysm.</a> Journal of Applied Physiology. 123 (1), 147-160 (2017).</li>
<li>Xiao, X., Ping, N. N., Li, S., Cao, L., Cao, Y. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+optimal+initial+tension+for+rat+basilar+artery+in+wire+myography%5BTitle%5D)+AND+%22Microvascular+Research%22%5BJournal%5D)">An optimal initial tension for rat basilar artery in wire myography.</a> Microvascular Research. 97, 156-158 (2015).</li>
<li>Chung, A. W., Yang, H. H., Yeung, K. A., van Breemen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+and+pharmacological+approaches+to+investigate+the+pathogenesis+of+Marfan+syndrome+in+the+abdominal+aorta%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Research%22%5BJournal%5D)">Mechanical and pharmacological approaches to investigate the pathogenesis of Marfan syndrome in the abdominal aorta.</a> Journal of Vascular Research. 45 (4), 314-322 (2008).</li>
<li>Zhong, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age+impairs+soluble+guanylyl+cyclase+function+in+mouse+mesenteric+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Age impairs soluble guanylyl cyclase function in mouse mesenteric arteries.</a> International Journal of Molecular Sciences. 22 (21), 11412(2021).</li>
</ol>

Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari concorrenti.

Il campo della biologia vascolare si basa fortemente su strumenti che aiutano i ricercatori a valutare l'integrità funzionale e strutturale della parete dei vasi sanguigni. Richiede anche un'attenzione particolare sulle interazioni dirette e indirette tra i tre strati di vasi sanguigni: l'intima, i media e l'avventizia. Tra questi tre strati, l'intima è formata da un monostrato di cellule endoteliali e ha una funzione molto importante nella regolazione della salute vascolare e dell'emostasi.
È...

Negli ultimi decenni, il sistema di miografia a camera piccola è stato utilizzato per misurare la reattività di diversi strati di pareti dei vasi sanguigni in risposta a vari agenti farmacologici e neurotrasmettitori in un ambiente ex vivo, in tempo reale. La reattività vascolare è una componente importante di un vaso sanguigno funzionale sano ed è fondamentale per la regolazione del flusso sanguigno e della perfusione nel sistema vascolare periferico e cerebrale1. All'interno della parete dei vasi sanguigni, l'interazione tra strati endoteliali e muscolari lisci è un importante determinante del tono vascolare, che è anche costantemente influenzato da cambiamenti strutturali nello strato di tessuto connettivo che circonda la parete dei vasi sanguigni (avventizia).
Lo strato endoteliale controlla la vasomozione rilasciando alcuni fattori vasodilatatori, tra cui ossido nitrico (NO), prostaciclina (PGI2) e fattore iperpolarizzante derivato dall'endotelio (EDHF), o producendo agenti vasocostrittori come endotelina-1 (ET-1) e trombossano (TXA2)2,3,4. Tra questi fattori, l'NO è stato ampiamente studiato e i suoi importanti ruoli regolatori in altre funzioni cellulari critiche come l'infiammazione, la migrazione, la sopravvivenza e la proliferazione sono stati altamente citati nella letteratura scientifica 2,5.
Nel campo della biologia vascolare, la miografia camerale ha fornito ai fisiologi vascolari e ai farmacologi uno strumento prezioso e affidabile per misurare la funzione endoteliale in un sistema semi-fisiologico strettamente controllato1. Attualmente, ci sono due diversi sistemi miografici disponibili per gli scienziati: miografia tensometrica (isometrica) a filo (o pin) e miografia a pressione. In un sistema di miografia a filo, il vaso sanguigno è teso tra due fili o perni, consentendo la misurazione isometrica dello sviluppo di forza o tensione nella parete del vaso sanguigno, mentre la miografia a pressione è una piattaforma preferibile per le misurazioni della reattività vascolare nelle piccole arterie di resistenza, dove i cambiamenti nella pressione sanguigna sono considerati lo stimolo principale per i cambiamenti nel tono vascolare e nella vasomozione. C'è un accordo generale sul fatto che, per le piccole arterie di resistenza come le arterie mesenteriche e cerebrali, la miografia pressoria crea una condizione più vicina alle condizioni fisiologiche nel corpo umano. Il miografo a camera piccola può essere utilizzato per vasi con diametri molto piccoli (200-500 μm) a vasi molto più grandi come l'aorta.
Mentre il miografo a filo è un potente sistema per registrare la tensione dei vasi sanguigni in condizioni isometriche, il miografo a pressione è un sistema più appropriato per misurare i cambiamenti nel diametro del vaso in risposta ai cambiamenti nelle condizioni isobariche. I cambiamenti di diametro nel vaso in risposta a cambiamenti di pressione o flusso sono molto più grandi in una piccola arteria muscolare (arteriola) rispetto alle grandi arterie elastiche come l'aorta. Per questi motivi, il miografo a pressione è considerato uno strumento migliore per i piccoli vasi sanguigni con vasoreattività sostanziale1. Uno degli altri punti di forza pratici della miografia tensometrica a camera multicamera a piccolo volume è che si può discernere il contributo di diversi meccanismi alla reattività vascolare studiando più (fino a quattro) segmenti della stessa arteria e dallo stesso animale per ridurre la variabilità e produrre dati robusti e conclusivi. È anche relativamente facile da configurare e mantenere tecnicamente. Vasi di quasi tutte le dimensioni possono essere studiati con un miografo a filo. È una soluzione più economica per valutare la funzione vascolare ed è una buona alternativa alla miografia a pressione negli esperimenti in cui la lunghezza del vaso sezionato è troppo breve per il protocollo del miografo a pressione.
Questo rapporto fornisce un protocollo dettagliato per la valutazione della funzione endoteliale nell'anello aortico toracico isolato del topo utilizzando perni di montaggio nella tecnica di miografia tensometrica a camera a piccolo volume utilizzando il sistema miografico multicamera DMT-620 (DMT-USA). Questo protocollo utilizza un topo maschio C57BL6 di 6 mesi con un peso medio compreso tra 25-35 g. Fortunatamente, questo protocollo può essere applicato a vari tipi e pesi di animali, considerando l'ampia gamma di tipi di vasi e diametri per cui questo protocollo può essere utilizzato.

<table><tbody><tr><td>Acetilcolina</td><td>SigmaAldrich</td><td>A6625-100G</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>SigmaAldrich</td><td>C4901-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Gas carbogeno</td><td>Matheson</td><td>H103847</td><td></td></tr><tr><td>Forbici da dissezione</td><td>FST</td><td>91460-11</td><td></td></tr><tr><td>DMT 620 Sistema miografico multicamera</td><td>DMT</td><td>DMT 620</td><td>Sistema</td></tr> <tr>miografo multicamera<td>Pinza Dumont</td><td>FST</td><td>91150-20</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>SigmaAldrich</td><td>E5134-10G</td><td></td></tr><tr><td>Glucosio</td><td>SigmaAldrich</td><td>G8270-1KG</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>SigmaAldrich</td><td>H7006-1KG</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>SigmaAldrich</td><td>P9541-1KG</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>SigmaAldrich</td><td>P5655-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Strumenti LabChart</td><td>ADI Software</td><td></td><td>di acquisizione dati</td></tr><tr><td>Sorgente luminosa</td><td>Volpi</td><td>14363</td><td></td></tr><tr><td>L-Name</td><td>Fischer Scientific</td><td>50-200-7725</td><td></td></tr><tr><td>MgSO4</td><td>SigmaAldrich</td><td>M2643-500G</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio</td><td></td> Leica <td>S6D</td><td>stereoscopio</td></tr><tr><td>zoom NaCl</td><td>SigmaAldrich</td><td>S5886-5KG</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>SigmaAldrich</td><td>S5761-500G</td><td></td></tr><tr><td>Sistema da bagno per organo</td><td>DMT</td><td>720MO</td><td></td></tr><tr><td>Fenilefrina</td><td>SigmaAldrich</td><td>P6126-10G</td><td></td></tr><tr><td>Pompa</td><td>Welch</td><td>2546B-01</td><td></td></tr><tr><td>Software</td><td>Strumenti ADI</td><td>LabChart 8.1.20</td><td></td></tr><tr><td>Forbici a molla</td><td>FST</td><td>15003-08</td><td></td></tr><tr><td>Sylgard 184 Kit</td><td>Servizi di microscopia elettronica</td><td>24236-10</td><td>Kit elastomero siliconico</td></tr><tr><td>Regolatore serbatoio</td><td>Fischer Scientific</td><td>10575147</td><td></td></tr><tr><td>Sistema a bagnomaria</td><td>Fischer Scientific</td><td>15-462-10</td><td></td></tr></tbody></table>

misurazione della vasorilassazione endotelio-dipendente nell'aorta toracica del topo mediante miografia tensometrica a camera di piccolo volume

Measurement of Endothelium-Dependent Vasorelaxation in the Mouse Thoracic Aorta Using Tensometric Small Volume Chamber Myography

La miografia tensometrica a camera di piccolo volume è una tecnica comunemente usata per valutare la contrattilità vascolare dei vasi sanguigni piccoli e grandi negli animali da laboratorio e nelle piccole arterie isolate dal tessuto umano. La tecnica consente ai ricercatori di mantenere i vasi sanguigni isolati in un ambiente strettamente controllato e standardizzato (quasi fisiologico), con la possibilità di adattarsi a vari fattori ambientali, sfidando i vasi isolati con diversi agenti farmacologici che possono indurre vasocostrizione o vasodilatazione. La camera miografica fornisce anche una piattaforma per misurare la reattività vascolare in risposta a vari ormoni, inibitori e agonisti che possono influire sulla funzione della muscolatura liscia e degli strati endoteliali separatamente o contemporaneamente. La parete dei vasi sanguigni è una struttura complessa costituita da tre diversi strati: l'intima (strato endoteliale), i media (muscoli lisci e fibre di elastina) e l'avventizia (collagene e altro tessuto connettivo). Per ottenere una chiara comprensione delle proprietà funzionali di ogni strato, è fondamentale avere accesso a una piattaforma sperimentale e a un sistema che consenta un approccio combinato per studiare tutti e tre gli strati contemporaneamente. Tale approccio richiede l'accesso a una condizione semi-fisiologica che imiterebbe l'ambiente in vivo in un ambiente ex vivo . La miografia tensometrica a camera di piccolo volume ha fornito un ambiente ideale per valutare l'impatto di segnali ambientali, variabili sperimentali o agonisti e antagonisti farmacologici sulle proprietà vascolari. Per molti anni, gli scienziati hanno utilizzato la tecnica del miografo tensometrico per misurare la funzione endoteliale e la contrattilità della muscolatura liscia in risposta a diversi agenti. In questo rapporto, un sistema miografico tensometrico a camera di piccolo volume viene utilizzato per misurare la funzione endoteliale nell'aorta isolata del topo. Questo rapporto si concentra su come la miografia tensometrica a camera di piccolo volume può essere utilizzata per valutare l'integrità funzionale dell'endotelio in piccoli segmenti di una grande arteria come l'aorta toracica.

Il protocollo di miografia tensometrica a piccola camera spiegato qui è il metodo standard per misurare la reattività vascolare nelle arterie piccole e grandi e consente misurazioni simultanee della reattività vascolare in un massimo di quattro segmenti di vasi sanguigni dallo stesso piccolo animale da laboratorio sperimentale. In questo rapporto, utilizziamo specificamente il sistema per misurare la funzione endoteliale nell'aorta di topo isolata (Figura 1). In questo protocollo, segmenti a...

Il presente protocollo descrive i concetti e l'applicazione tecnica della tecnica del miografo tensometrico utilizzando un sistema miografo multicamera nella valutazione sperimentale ex vivo della funzione endoteliale aortica del topo.

Misurazione della vasorilassazione endotelio-dipendente nell'aorta toracica del topo mediante miografia tensometrica a camera di piccolo volume

Small volume chamber tensometric myography is a commonly used technique to evaluate the vascular contractility of small and large blood vessels in ...

Dimostriamo la miografia isometrica o tensometrica come il protocollo gold standard per misurare la reattività di piccoli vasi sanguigni di resistenza o grandi condotti in una condizione fisiologica ben controllata. Le misure sono altamente riproducibili e affidabili. La tecnica è molto preziosa nel consentire ai ricercatori di studiare separatamente diversi strati di vasi sanguigni o studiare l'interazione tra diversi strati della parete dei vasi sanguigni contemporaneamente.A dimostrare la procedura sarà Robert Folk, lo specialista del laboratorio di ricerca del mio laboratorio. Inizia accendendo il bagno d'acqua e impostandolo a 37 gradi Celsius. Posizionare due becher etichettati in modo appropriato nel bagno d'acqua, uno con 600 millilitri di soluzione HEPES-PSS e uno con 150 millilitri di soluzione ad alto contenuto di potassio.Aerare un becher contenente 300 millilitri di soluzione HEPES-PSS con gas carbogeno per almeno 10 minuti. Aggiungere 30 millilitri della soluzione HEPES-PSS aerata in una provetta da centrifuga da 50 millilitri, etichettare in modo appropriato e posizionarla sul ghiaccio. Conservare la soluzione HEPES-PSS aerata rimanente su ghiaccio da utilizzare durante il processo di dissezione aortica.Accendere l'unità miografica a quattro camere a 5 millilitri di soluzione HEPES-PSS per ciascuna camera del miografo e impostare il calore a 37 gradi Celsius. Lasciare che la soluzione in ciascuna camera venga aerata per 30 minuti e controllare che le camere abbiano raggiunto i 37 gradi Celsius desiderati. Accendere l'hardware e il computer di acquisizione dati del miografo.Trasferire la gabbia toracica asportata dai topi eutanizzati in una capsula di Petri rivestita di elastomero siliconico trasparente riempita con tampone HEPES-PSS aerato ghiacciato e fissarla su entrambi i lati. Sotto il microscopio, tagliare delicatamente e rimuovere il cuore e l'aorta attaccata dalla gabbia toracica e trasferire in un piatto rivestito di elastomero siliconico pulito, quindi rimuovere delicatamente il tessuto connettivo grasso e il sangue coagulato dall'aorta. Utilizzando piccole forbici affilate, sezionare e isolare l'intera aorta a partire dalla zona dell'arco fino al fondo dell'aorta discendente.Tagliare l'aorta sezionata in quattro segmenti di 2 millimetri ciascuno. Usa il mini-righello all'interno del piatto come riferimento. Nelle camere contenenti già 5 millilitri di tampone HEPES-PSS riscaldato e aerato, far scorrere con attenzione ciascuno dei segmenti aortici da 2 millimetri sui due perni di montaggio usando una pinza.Quando si riposiziona la camera nell'unità miografa, spostare lentamente i perni ruotando il micrometro in senso antiorario in modo che il segmento aortico non scivoli via dai perni. Riportare ogni camera miografica all'unità e iniziare ad aerare le camere a 37 gradi Celsius per 20 minuti. Scolare le camere e aggiungere 5 millilitri di soluzione HEPES-PSS fresca, calda e aerata a ciascuna camera.Se necessario, regolare nuovamente le misurazioni della forza per leggere la tensione ottimale di 6 millinewton. Riposare il tessuto per altri 15-20 minuti. Aprire il software di acquisizione dati.Modificare i numeri di tracciamento da 50 a 1 a 500 a 1 e premere Start. Prima di iniziare un nuovo esperimento, assicurarsi di aggiungere l'etichetta appropriata sul software di acquisizione dati. Scolare le camere ancora una volta prima di aggiungere 5 millilitri di soluzione ad alto contenuto di potassio a ciascuna camera.Drenare nuovamente le camere non appena la risposta contrattile alla soluzione ad alto contenuto di potassio raggiunge un plateau per la generazione di forza. Lavare il tessuto con la soluzione HEPES-PSS tre volte. Aggiungere 5 millilitri di soluzione ad alto contenuto di potassio in ciascuna camera.Drenare le camere non appena la risposta contrattile alla soluzione ad alto contenuto di potassio raggiunge un plateau per la generazione di forza e lavare il tessuto tre volte con HEPES-PSS, quindi riposare il tessuto per 15-20 minuti. Pre-contrarre i segmenti aortici con l'agente vasocostrittore PE ad una dose inferiore alla massima. Consentire alla curva di contrazione indotta da PE di raggiungere un plateau per lo sviluppo della tensione.Aggiungere un plateau di sviluppo della tensione al PE a 5 microlitri di dosi crescenti di soluzioni di stock di lavoro di acetilcolina a intervalli di 3 minuti per stabilire concentrazioni finali di acetilcolina da 50 picomolar a 10 micromolari nella camera del miografo come descritto nel manoscritto del testo. Dopo aver completato l'esperimento dose-risposta, drenare le camere, lavare i segmenti aortici con soluzione HEPES-PSS calda e aerata tre volte e riposare i tessuti per 30 minuti. Dopo aver fatto riposare i segmenti aortici per 30 minuti, drenare le camere e aggiungere una soluzione fresca e calda ad alto contenuto di potassio a ciascuna camera, quindi drenare le camere e lavare il tessuto con la soluzione HEPES-PSS quando la risposta di contrazione alla soluzione ad alto contenuto di potassio raggiunge un plateau F come dimostrato in precedenza.Pre-incubare i segmenti aortici con L-NAME aggiungendo 10 microlitri della soluzione madre di lavoro da 100 millimolari preparata per valutare il contributo della produzione di ossido nitrico alla vasorilassamento indotta da acetilcolina osservata. Senza rimuovere il nome L, aggiungere la dose sub-massima di PE alla camera per indurre la contrazione aortica. Attendere che la curva di contrazione indotta da PE raggiunga un plateau per lo sviluppo della tensione, quindi aggiungere acetilcolina alla camera del miografo per ottenere una concentrazione finale di 500 nanomolari.Attendere alcuni minuti per registrare eventuali cambiamenti nello sviluppo della forza fino a quando il plateau formato è stabile. Scolare le camere e lavare il tessuto con una soluzione HEPES-PSS aerata calda tre volte. Posizionare la camera del miografo sotto il microscopio e passare delicatamente un piccolo filo attraverso il lume dell'aorta.Spostare delicatamente il filo attraverso il lume per un breve periodo. Tagliare l'aorta in anelli aortici di 2 millimetri e montare quegli anelli sulla camera del miografo. Impostare la tensione ottimale a 6 millinewton e lasciare riposare il tessuto per 30 minuti in tampone HEPES-PSS caldo aerato, quindi drenare le camere e aggiungere 5 millilitri di soluzione HEPES-PSS calda fresca a caldo in ciascuna camera.Azzerare la forza per tutte le camere del miografo e ruotare lentamente il micrometro in senso antiorario per aumentare la distanza tra i pin fino a quando la forza registrata raggiunge la tensione ottimale desiderata per l'aorta del topo. Premere il tessuto per altri 15-20 minuti alla tensione ottimale, quindi drenare nuovamente le camere prima di aggiungere 5 millilitri di soluzione ad alto contenuto di potassio a ciascuna camera. Drenare nuovamente le camere e lavare il tessuto con la soluzione HEPES-PSS tre volte una volta che la risposta di contrazione alla soluzione di ioni ad alto contenuto di potassio raggiunge un plateau.Riposare il tessuto per 15-20 minuti, quindi pre-contrarre i segmenti aortici con PE, l'agente vasocostrittore. Quando la forza indotta da PE raggiunge un plateau, aggiungere la concentrazione sub-massima di acetilcolina alla camera del miografo per ottenere una concentrazione finale di 500 nanomolari. Attendere 3 minuti per assicurarsi che il plateau registrato per lo sviluppo della forza indotta da PE non cambi prima di terminare l'esperimento.L'integrità e la vitalità di ciascun recipiente isolato sono state valutate registrando la generazione della forza contrattile. Il picco della forza registrata è stato successivamente utilizzato per normalizzare la generazione di forza per lo stesso segmento in risposta agli agonisti. Le misurazioni di vasorilassamento mediate dall'endotelio hanno rappresentato la contrazione mediata dalla muscolatura liscia e la generazione di forza.Quando la contrazione indotta da PE ha raggiunto un plateau, dosi crescenti di acetilcolina hanno raggiunto il massimo vasorilassamento nel segmento isolato. L'inibitore dell'ossido nitrico L-NAME ha completamente bloccato la vasorilassazione indotta da acetilcolina nell'aorta precontratta, indicando che l'acetilcolina induce vasorilassamento aortico attraverso l'aumento della produzione di ossido nitrico. Inoltre, la rimozione dello strato endoteliale dai segmenti aortici ha anche bloccato la vasorilassazione indotta da acetilcolina sottolineando il ruolo dell'endotelio nel rilassamento dei vasi sanguigni.Assicurarsi di essere delicati durante la manipolazione, la pulizia e la dissezione del vaso sanguigno. È fondamentale aggiungere gli agonisti farmacologici e gli inibitori con attenzione per non disturbare gli anelli dei vasi sanguigni montati sulle camere del miografo. Le informazioni possono aiutare a progettare esperimenti per esplorare potenziali approcci terapeutici per affrontare la disfunzione degli strati di uno specifico vaso sanguigno.

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Biology

Biologia

Un metodo myography automatizzato per misure di forza in arterie mesenteriche isolato è descritto. Si avvale di un Mulvany-Halpern miografo filo doppio Auto 510A per determinare le risposte a fenilefrina e calcio extracellulare. Il metodo permette la determinazione costante di risposte isometrica per agonisti in piccoli vasi di diametro di 60-300 micron, in modo indipendente.

Contrazione Arteria mesenterica e Studi Relax Utilizzando Myography automatica Wire

In myography pressione, un piccolo segmento intatta di una nave è attaccato su due piccole cannule e pressurizzato ad una pressione luminale adatto. Qui, descriviamo il metodo per misurare la risposta di vasodilatazione del mouse...

Valutare Murino Resistenza Funzione Arteria Utilizzando myography Pressione

Myography pressione è utilizzato per valutare vasoactivity di piccole arterie che si sviluppano costrizione sostenuta quando sotto pressione. Questo manoscritto fornisce un protocollo dettagliato per valutare in segmenti isolati di piccole arterie mesenterici di ratto, vasoactivity e l'effetto della pressione intraluminale del diametro vascolare.

Valutare Miogenica risposta e Vasoactivity nelle arterie di resistenza mesenteriche Utilizzando Myography Pressione

La disfunzione endoteliale è associata a numerose patologie ed è predittivo di eventi cardiovascolari avversi negli esseri umani. Vasodilatazione flusso-mediata (FMD) è un metodo ad ultrasuoni non invasivo di valutazione della funzione endoteliale. Scelte metodologiche ed esperienza dell'operatore possono influenzare i risultati. Un approccio sistematico per l'afta epizootica negli studi sull'uomo è discusso qui.

Ecografia Valutazione della endoteliali-dipendente flusso-mediata vasodilatazione dell&#39;arteria brachiale in Ricerca Clinica

Descriviamo una tecnica per misurare la rigidità aortica dalla sua relazione pressione-diametro in vivo nei topi. Il diametro aortico viene registrato mediante ecografia e la pressione aortica viene misurata in modo invasivo con un catetere a pressione a stato solido. La pressione sanguigna viene modificata in modo incrementale e viene misurato il diametro risultante.

Misurare Crescente aortica Rigidità In Vivo In topi con ultrasuoni

Videomicroscopia sistemi sono utilizzati per esaminare le proprietà funzionali delle arteriole del tessuto adiposo isolato in risposta a stimoli fisiologici e farmacologici. Questa tecnica può essere utilizzata per esaminare microvascolari fenotipi in domini differenti del tessuto adiposo in esseri umani obesi.

Valutazione della funzione microvascolare di tessuto adiposo umano mediante videomicroscopia

Questo manoscritto descrive protocolli di video microscopia in vitro per valutare la funzione vascolare nelle arterie di resistenza cerebrale del ratto. Il manoscritto descrive anche tecniche per la valutazione di densità del microvessel con aspersione di lectine e tessuto fluorescente contrassegnato utilizzando flussometria del Laser Doppler.

Valutazione dei meccanismi di controllo vascolare utilizzando Video microscopia del arterie di resistenza isolata dei ratti

La tecnica di myograph di filo è utilizzata per studiare le funzioni muscolari lisce e schermo nuove droghe. Segnaliamo un protocollo dettagliato per misurare la contrattilità isometrica dell'arteria mesenterica del mouse e per lo screening di nuovi farmaci rilassanti di muscolo liscio vascolare.

Misurazione di contrattilità isometrica dell'arteria mesenterica Mouse con filo Myography

Allenamento di alta intensità nell'ipossia è un protocollo che è stato dimostrato per indurre gli adattamenti vascolari potenzialmente utili in alcuni pazienti e migliorare degli atleti ripetuto capacità di sprint. Qui, verifichiamo la fattibilità dei topi di formazione utilizzando che il protocollo e identificare tali adeguamenti vascolare utilizzando ex vivo valutazione di funzione vascolare.

Sopramassimale intensità di esercizio Hypoxic e valutazione di funzione vascolare in topi

Il protocollo descrive l'uso della Miografia dei fili per valutare la tensione isometrica transmurale delle arterie mesenteriche isolate dai topi, con particolare attenzione alla modulazione da fattori rilasciati da cellule endoteliali e tessuti adiposi perivascolare.

Valutazione della reattività del tono vascolare utilizzando arterie mesenteriche isolate con un focus sulla modulazione dei tessuti adiposi perivascolare

Scopri la miografia tensometrica per misurare la vasorilassazione endotelio-dipendente nell'aorta toracica del topo. Questo metodo affidabile consente di studiare la funzione vascolare e la reattività endoteliale in condizioni fisiologiche controllate.

Misurazione della vasorilassazione endotelio-dipendente nellaorta toracica del topo mediante miografia tensometrica a camera di piccolo volume (Video) | JoVE Journal

Misurazione della vasorilassazione endotelio-dipendente nell'aorta toracica del topo mediante miografia tensometrica a camera di piccolo volume

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