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DOI: 10.3791/64003-v
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Questo protocollo descrive un modello di enterocolite necrotizzante apicale (NEC) in un piatto che utilizza enteroidi intestinali piccoli con polarità invertita, consentendo l'accesso alla superficie apicale. Forniamo un protocollo di colorazione immunofluorescente per rilevare l'interruzione epiteliale correlata al NEC e un metodo per determinare la vitalità degli enteroidi apicali-out sottoposti al protocollo NEC-in-a-dish.
Questo protocollo descrive il primo modello apical-out in-a-dish ed è un miglioramento critico rispetto ai modelli enteroidi basali laterali out-a-dish quando si stabilisce la modellazione in vitro di potenziali terapie destinate alla somministrazione orale. Questo metodo consente l'accesso alla superficie apicale degli enteroidi. I composti possono essere aggiunti ai terreni cellulari e i composti vengono assorbiti apicamente come sarebbero in vivo.
I ricercatori interessati a stabilire un sistema in vitro di infiammazione intestinale per testare potenziali terapie orali possono trovare questa tecnica particolarmente utile. I tessuti provenienti da età e specie diverse possono richiedere un'ulteriore standardizzazione. Quindi i pazienti mentre stabiliscono i tempi di inversione di polarità possono essere necessari.
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