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DOI: 10.3791/64099-v
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The peel-blot technique is a cryo-EM grid preparation method that allows for the separation of multilayered and concentrated biological samples into single layers. This method reduces thickness, increases sample concentration, and facilitates image processing.
La tecnica peel-blot è un metodo di preparazione della griglia crio-EM che consente la separazione di campioni biologici multistrato e concentrati in singoli strati per ridurre lo spessore, aumentare la concentrazione del campione e facilitare l'elaborazione delle immagini.
La tecnica peel-blot consente la separazione di campioni biologici crio-EM multistrato e concentrati in singoli strati per ridurre lo spessore, aumentare la concentrazione e facilitare l'elaborazione delle immagini. Le concentrazioni del campione possono essere aumentate prima della preparazione della griglia e la macchia può essere regolata per ottenere una distribuzione densa di campioni a strato singolo per una raccolta dati altamente efficiente. Per iniziare, impilare due pezzi di carta da filtro da 20-25 micrometri e posizionare una lunga pellicola di paraffina adiacente ad essa con la carta rivolta verso l'alto.
Posizionare un pezzo di carta da filtro submicron sopra altri due pezzi di carta da filtro. Posizionare la pinza anti-capillare con la gamba piegata rivolta verso l'alto e la gamba dritta rivolta verso il basso e selezionare una griglia a maglie 600 con il lato liscio o lucido verso l'alto. Posizionare la pinza su una piastra di Petri o su un'altra superficie rialzata per evitare il contatto della griglia pulita con altri oggetti.
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