In vivo Rilevamento della permeabilità vascolare nella ghiandola sottomandibolare del topo

Il presente protocollo descrive una misura di rilevamento della permeabilità paracellulare in vivo per valutare la funzione delle giunzioni endoteliali strette nelle ghiandole sottomandibolari di topo. La microscopia a scansione laser a due fotoni, tuttavia, non solo ha il vantaggio della microscopia confocale convenzionale, ma può anche essere utilizzata per rilevare più chiaramente tessuti e immagini più profondi. Questo esperimento fornisce un buon metodo di misura per valutare la permeabilità vascolare di diversi tessuti, in particolare i tessuti superficiali e gli organi degli animali.

Inizia scegliendo traccianti appropriati come fluoresceina, isotiocianato, destrano marcato e Rhodamine B, destrano marcato con spettri di emissione di eccitazione distinti, per ridurre al minimo l'interferenza tra i segnali di fluorescenza per il saggio di permeabilità. Diluire le tracce in soluzione salina tamponata con fosfato sterile in 100 milligrammi per millilitro di scorte e conservare le aliquote al riparo dalla luce a meno 20 gradi Celsius. Dopo aver anestetizzato il topo selvatico maschio di 8-10 settimane, tenere delicatamente la testa e il collo del topo per far sporgere leggermente un lato del bulbo oculare.