Un modello di aneurisma dell'aorta addominale del topo indotto da fosfato di calcio

Questo protocollo descrive il modello murino tripla A dell'aneurisma dell'aorta addominale indotto da fosfato di calcio per studiare le caratteristiche patologiche nei meccanismi molecolari dell'aneurisma dell'aorta addominale. Il modello di aneurisma dell'aorta addominale indotto da fosfato di calcio è un modello rapido ed economico rispetto ai modelli di tubo dell'angiotensina e aneurisma dell'aorta addominale indotto da elastasi. A dimostrare la procedura sarà Zeyu Cai, post-medico qui, un collega del nostro laboratorio.

Per iniziare tagliare strisce larghe 0,3 centimetri di guanti di gomma senza polvere e garza. Quindi acquista topi Mayo C57BL6J di otto-dieci settimane e ospita gli animali in un ambiente climatizzato con un ciclo buio chiaro di 12 ore e accesso gratuito a cibo e acqua. Successivamente, autoclavare la garza, i tamponi di cotone, le forbici e le pinze prima dell'intervento chirurgico e ottenere Betadine, etanolo al 70% e lavaggio delle mani antisettico.

Rasare i peli addominali del topo anestetizzato usando un tagliacapelli elettrico o una crema depilatoria. Quindi tamponare e pulire l'area rasata con Betadine, seguito da etanolo al 70% più volte con un movimento circolare. Quindi fare un'incisione di circa 1,5 centimetri sull'addome inferiore lungo la linea mediana dell'addome usando le forbici.

Utilizzando un batuffolo di cotone sterile inumidito con soluzione salina normale, rimuovere con cura l'intestino fino a quando l'aorta infrarenale è visibile. Successivamente, sezionare il tessuto connettivo e il grasso dall'aorta infrarenale per una sezione di circa 0,5 centimetri, evitando qualsiasi lacerazione nei piccoli vasi sul lato dorsale. Quindi imballare un pezzo della striscia di guanto di gomma imbevuta di soluzione salina sotto l'aorta addominale e la vena principale addominale mentre si pulisce il liquido in eccesso usando un batuffolo di cotone.

Successivamente, imballare un pezzo di garza imbevuto di cloruro di calcio 0,5 molare sull'avventizia della vascolarizzazione addominale infrarenale per 10 minuti. Rimuovere la garza e imballare un altro pezzo di garza imbevuto di soluzione PBS per cinque minuti per generare cristalli di calcio orto fosfato in C2 nell'avventizia dell'aorta. Quindi rimuovere con attenzione la striscia di guanti di gomma e la garza.

Dopo aver ripristinato il tratto intestinale del topo, suturare l'incisione addominale e la pelle con una sutura a cinque zero. Quindi, posizionare il mouse su una piastra elettrica fino a quando il mouse non riprende conoscenza. Ospitare il topo per altri 14 giorni e monitorare attentamente il topo dopo l'intervento chirurgico e osservare almeno ogni giorno successivo.

Dopo 14 giorni dall'intervento, tagliare ventralmente le cavità toracica e addominale del topo eutanasizzata e aprire l'atrio destro. Profuse i topi con tampone PBS attraverso il ventricolo sinistro del cuore per rimuovere il sangue nell'aorta e quindi perfondere con il 4% di paraformaldeide come descritto nel manoscritto. Rimuovere accuratamente il tessuto avventiziale e il grasso sotto uno stereomicroscopio.

Quindi raccogliere l'aorta e metterla in un tubo contenente cinque millilitri di paraformaldeide al 4% per 48 ore. Quindi appuntare l'aorta su una piastra di cera nera con aghi di insetti e procedere all'acquisizione di immagini aortiche. Dopo 14 giorni di applicazione di ortofosfato di calcio, è stata ripresa la morfologia delle aorte per visualizzare la formazione dell'aneurisma dell'aorta addominale.

È stato osservato che l'ortofosfato di calcio ha portato alla dilatazione dell'aorta addominale infrarenale e ha provocato una drammatica degradazione delle fibre elastiche, come illustrato dalle rotture dell'elastina. Utilizzando un batuffolo di cotone sterile inumidito con soluzione salina normale per rimuovere l'intestino fino a quando l'aorta infrarenale è visibile e quindi estrarre il tessuto connettivo e il grasso dall'aorta infrarenale. Nel complesso, il modello di aneurisma dell'aorta addominale indotto da fosforato di calcio dei topi è un approccio rapido ed economico per esplorare i meccanismi molecolari e le strategie terapeutiche dell'aneurisma dell'aorta addominale e potrebbe essere applicato in parallelo con gli altri modelli per imitare completamente le caratteristiche dell'aneurisma dell'aorta addominale umana.