Generazione di un modello di decidualizzazione artificiale del topo con ovariectomia per la ricerca sulla decidualizzazione endometriale

La compromissione del decentramento porta al virus dei disturbi endometriali come nella fatalità, un aborto spontaneo ricorrente. Questo metodo fornisce un modello animale valido e affidabile per lo studio del decentramento endometriale. Questo modello di decentralizzazione artificiale con Ovariectomia può evitare l'influenza dell'angelina sugli ormoni che spesso possono risultati altamente riproducibili con piccole differenze all'interno del gruppo.

Per iniziare a sterilizzare gli strumenti chirurgici con uno sterilizzatore ad alta temperatura e alta pressione un giorno prima dell'operazione. Applicare l'unguento protettivo per gli occhi ai bulbi oculari per prevenire la secchezza durante l'anestesia. Inizia l'operazione quando i topi sono completamente anestetizzati.

Posizionare i topi in posizione prona sulla superficie operatoria e radersi i peli sulla schiena dopo averli bagnati con acqua saponata. Disinfettare la pelle con etanolo al 70%. Trova il sito di incisione dell'operazione a 0,5 centimetri sul bordo superiore della radice della coscia di entrambi gli arti posteriori paralleli alla colonna vertebrale.

Prendi il sito di incisione come centro e disinfetta l'area di incisione con iodoporo, tre volte. Fai un'incisione longitudinale di circa 0,5 a un centimetro usando le forbici. Tagliare la fascia e separare passivamente i muscoli con una pinzetta.

Trova un pezzo del cuscinetto di grasso bianco nel campo di incisione vicino al polo inferiore del rene attraverso il sottile strato muscolare. Bloccare la massa grassa con clip emostatiche e tirare l'ovaia avvolta dal cuscinetto di grasso dall'incisione. Bloccare la giunzione delle tube di Ovaio e Falloppio con pinzette curve e rimuovere l'ovaio lungo il peduncolo ovarico con le forbici.

Interrompere il sanguinamento usando una penna elettrocoagulante o un ago di una siringa da un millilitro riscaldata sulla lampada ad alcool. Risciacquare l'incisione chirurgica con soluzione salina normale per prevenire l'adesione dei tessuti. Utilizzare una sutura 4-0 per seminare rispettivamente il muscolo e la pelle e disinfettare nuovamente l'incisione chirurgica con iodophor.

Metti i topi in posizione prona nella gabbia e rianimali in un'incubatrice a 25 gradi Celsius. Dotato di sorgente luminosa e sistema di ventilazione per circa due ore. Prestare attenzione ai topi dopo l'operazione.

Rimettili nel luogo di alimentazione originale da soli fino a quando non si riprendono completamente e dai loro abbastanza acqua e cibo. Per via sottocutanea iniettare 100 nanogrammi di estrogeni in 50 microlitri di olio di sesamo in ciascun topo per tre giorni seguiti da due giorni di riposo. Iniettare un milligrammo di progesterone e 10 nanogrammi di estrogeni in 50 microlitri di olio di sesamo in ciascun topo per altri tre giorni.

Operare i topi per indurre il modello di residualizzazione artificiale sei ore dopo la terza iniezione combinata di estrogeni progesterone. Trova il corno dell'utero all'estremità inferiore delle tube di Falloppio e inietta lentamente 20 microlitri di olio di sesamo lungo il corno uterino. Spingere indietro il tessuto, suturare l'incisione e consentire al topo di recuperare.

Fissare da tre a cinque millilitri di tessuto uterino con il 10% di formalina incorporata in paraffina e sezionarli. Colorare le sezioni con ematossilina ed eosina per osservare i cambiamenti morfologici. Incorporare altri tre-cinque millimetri di tessuto uterino in congelamento composto a temperatura di taglio ottimale in azoto liquido e conservare in un congelatore a meno 80 gradi Celsius.

Congelare il tessuto in 10 micrometri e rilevare l'attività della fosfatasi alcalina nel tessuto uterino con il metodo di accoppiamento azoico. La morfologia generale dell'utero artificiale decentralizzato dei topi indotto dall'olio è più vicina a quella dell'utero in gravidanza. Il corpo uterino diventa spesso e la cavità uterina diventa più piccola del lato non indotto.

Il volume e il peso del corno uterino indotto sono significativamente superiori a quelli del lato non indotto. La colorazione dell'ematossilina e dell'eosina del tessuto uterino ha mostrato che le ghiandole scompaiono e le cellule stromali endometriali finali sull'indotto strappato si differenziano in grandi cellule deciduali rotonde citoplasmatiche e multinucleate con confini cellulari poco chiari. Le sezioni laterali non indotte mostrano la morfologia del tessuto endometriale in uno stato fisiologico normale.

Il risultato del metodo di accoppiamento azoico ha mostrato che il contenuto di fosfatasi alcalina del lato indotto dall'olio era significativamente superiore a quello del lato non indotto. I risultati della QPCR hanno mostrato che l'espressione di mRNA di PRL-8-A-2, ALPL e IGFBP-1 nel corno indotto era significativamente superiore a quella in quello non indotto, suggerendo che l'olio può indurre il decentramento artificiale nei topi. L'integrazione di Homo è un processo lungo che richiede particolare attenzione alla contaminazione tra gli omosessuali che è la chiave del successo.

Sulla base di questo modello può essere eseguita l'iniezione di corno uterino di Adenovirus che può studiare il meccanismo rilevante di specifiche molecole che regolano la residualizzazione.