Generazione di un modello di decidualizzazione artificiale del topo con ovariectomia per la ricerca sulla decidualizzazione endometriale
July 27th, 2022
Qui, descriviamo il metodo per generare un modello di decidualizzazione artificiale usando il topo ovariectomizzato, un classico esperimento di decidualizzazione endometriale nel campo di ricerca della decidualizzazione endometriale.
La compromissione del decentramento porta al virus dei disturbi endometriali come nella fatalità, un aborto spontaneo ricorrente. Questo metodo fornisce un modello animale valido e affidabile per lo studio del decentramento endometriale. Questo modello di decentralizzazione artificiale con Ovariectomia può evitare l'influenza dell'angelina sugli ormoni che spesso possono risultati altamente riproducibili con piccole differenze all'interno del gruppo.
Per iniziare a sterilizzare gli strumenti chirurgici con uno sterilizzatore ad alta temperatura e alta pressione un giorno prima dell'operazione. Applicare l'unguento protettivo per gli occhi ai bulbi oculari per prevenire la secchezza durante l'anestesia. Inizia l'operazione quando i topi sono completamente anestetizzati.
Posizionare i topi in posizione prona sulla superficie operatoria e radersi i peli sulla schiena dopo averli bagnati con acqua saponata. Disinfettare la pelle con etanolo al 70%. Trova il sito di incisione dell'operazione a 0,5 centimetri sul bordo superiore della radice della coscia di entrambi gli arti posteriori paralleli alla colonna vertebrale.
Prendi il sito di incisione come centro e disinfetta l'area di incisione con iodoporo, tre volte. Fai un'incisione longitudinale di circa 0,5 a un centimetro usando le forbici. Tagliare la fascia e separare passivamente i muscoli con una pinzetta.
Trova un pezzo del cuscinetto di grasso bianco nel campo di incisione vicino al polo inferiore del rene attraverso il sottile strato muscolare. Bloccare la massa grassa con clip emostatiche e tirare l'ovaia avvolta dal cuscinetto di grasso dall'incisione. Bloccare la giunzione delle tube di Ovaio e Falloppio con pinzette curve e rimuovere l'ovaio lungo il peduncolo ovarico con le forbici.
Interrompere il sanguinamento usando una penna elettrocoagulante o un ago di una siringa da un millilitro riscaldata sulla lampada ad alcool. Risciacquare l'incisione chirurgica con soluzione salina normale per prevenire l'adesione dei tessuti. Utilizzare una sutura 4-0 per seminare rispettivamente il muscolo e la pelle e disinfettare nuovamente l'incisione chirurgica con iodophor.
Metti i topi in posizione prona nella gabbia e rianimali in un'incubatrice a 25 gradi Celsius. Dotato di sorgente luminosa e sistema di ventilazione per circa due ore. Prestare attenzione ai topi dopo l'operazione.
Rimettili nel luogo di alimentazione originale da soli fino a quando non si riprendono completamente e dai loro abbastanza acqua e cibo. Per via sottocutanea iniettare 100 nanogrammi di estrogeni in 50 microlitri di olio di sesamo in ciascun topo per tre giorni seguiti da due giorni di riposo. Iniettare un milligrammo di progesterone e 10 nanogrammi di estrogeni in 50 microlitri di olio di sesamo in ciascun topo per altri tre giorni.
Operare i topi per indurre il modello di residualizzazione artificiale sei ore dopo la terza iniezione combinata di estrogeni progesterone. Trova il corno dell'utero all'estremità inferiore delle tube di Falloppio e inietta lentamente 20 microlitri di olio di sesamo lungo il corno uterino. Spingere indietro il tessuto, suturare l'incisione e consentire al topo di recuperare.
Fissare da tre a cinque millilitri di tessuto uterino con il 10% di formalina incorporata in paraffina e sezionarli. Colorare le sezioni con ematossilina ed eosina per osservare i cambiamenti morfologici. Incorporare altri tre-cinque millimetri di tessuto uterino in congelamento composto a temperatura di taglio ottimale in azoto liquido e conservare in un congelatore a meno 80 gradi Celsius.
Congelare il tessuto in 10 micrometri e rilevare l'attività della fosfatasi alcalina nel tessuto uterino con il metodo di accoppiamento azoico. La morfologia generale dell'utero artificiale decentralizzato dei topi indotto dall'olio è più vicina a quella dell'utero in gravidanza. Il corpo uterino diventa spesso e la cavità uterina diventa più piccola del lato non indotto.
Il volume e il peso del corno uterino indotto sono significativamente superiori a quelli del lato non indotto. La colorazione dell'ematossilina e dell'eosina del tessuto uterino ha mostrato che le ghiandole scompaiono e le cellule stromali endometriali finali sull'indotto strappato si differenziano in grandi cellule deciduali rotonde citoplasmatiche e multinucleate con confini cellulari poco chiari. Le sezioni laterali non indotte mostrano la morfologia del tessuto endometriale in uno stato fisiologico normale.
Il risultato del metodo di accoppiamento azoico ha mostrato che il contenuto di fosfatasi alcalina del lato indotto dall'olio era significativamente superiore a quello del lato non indotto. I risultati della QPCR hanno mostrato che l'espressione di mRNA di PRL-8-A-2, ALPL e IGFBP-1 nel corno indotto era significativamente superiore a quella in quello non indotto, suggerendo che l'olio può indurre il decentramento artificiale nei topi. L'integrazione di Homo è un processo lungo che richiede particolare attenzione alla contaminazione tra gli omosessuali che è la chiave del successo.
Sulla base di questo modello può essere eseguita l'iniezione di corno uterino di Adenovirus che può studiare il meccanismo rilevante di specifiche molecole che regolano la residualizzazione.
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Panoramica
Questo articolo descrive un metodo per generare un modello artificiale di decidualizzazione utilizzando topi ovariectomizzati. Questo modello è significativo per studiare la decidualizzazione endometriale e i relativi disturbi.
Componenti Chiave dello Studio
Area della Scienza
- Neuroscienze
- Biologia Riproduttiva
- Modelli Animali
Sfondo
- La decidualizzazione è cruciale per un impianto e una gravidanza di successo.
- Il deterioramento in questo processo può portare a disturbi endometriali.
- I topi ovariectomizzati servono come modello affidabile per studiare queste condizioni.
- Questo modello aiuta a comprendere le influenze ormonali sulla decidualizzazione.
Scopo dello Studio
- Stabilire un modello animale riproducibile per la ricerca endometriale.
- Indagare gli effetti dei cambiamenti ormonali sulla decidualizzazione.
- Fornire informazioni sui meccanismi alla base dei aborti spontanei ricorrenti.
Metodi Utilizzati
- Sterilizzazione chirurgica degli strumenti prima dell'operazione.
- Applicazione di unguento protettivo per gli occhi per prevenire la secchezza durante l'anestesia.
- Induzione dell'anestesia nei topi prima delle procedure chirurgiche.
- Creazione di un modello di decidualizzazione artificiale attraverso ovariectomia.
Risultati Principali
- Il modello permette studi controllati delle risposte endometriali.
- I risultati mostrano un'alta riproducibilità con minime differenze all'interno del gruppo.
- Questo metodo evita influenze ormonali da fattori esterni.
- Fornisce un quadro affidabile per future ricerche sui disturbi endometriali.
Conclusioni
- Il modello artificiale di decidualizzazione è efficace per studiare la salute endometriale.
- Può aiutare a chiarire i meccanismi dei disturbi endometriali.
- Questo approccio può portare a una migliore comprensione e trattamento degli aborti spontanei ricorrenti.
Domande Frequenti
Executive Industry Relevance
Highly reproducible artificial decidualization models in ovariectomized mice enable precise investigation of endometrial differentiation, eliminating confounding ovarian hormone effects. This model supports robust target validation and mechanistic de-risking for endometrial biology, facilitating translational research on infertility and pregnancy disorders. Its reliability and quantitative outputs strengthen early discovery and preclinical decision-making across reproductive health portfolios.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Enables rigorous interrogation of endometrial differentiation pathways under controlled hormonal conditions.
- Supports functional target validation by isolating uterine responses from ovarian influences.
- Facilitates mechanistic de-risking for candidate targets implicated in endometrial disorders.
- Provides quantitative benchmarks for portfolio triage in reproductive health research.
Screening & Assay Development
- Establishes a standardized, reproducible in vivo system for evaluating endometrial responses.
- Delivers quantitative outputs such as uterine horn weight, morphology, and gene expression.
- Enables assay readiness for downstream molecular or pharmacological screening.
- Supports platform reuse for comparative studies of candidate interventions.
Translational & Preclinical Research
- Aligns with disease-relevant models for infertility, miscarriage, and endometrial dysfunction.
- Provides continuity from mechanistic discovery to preclinical validation of therapeutic hypotheses.
- Enables risk-adjusted advancement decisions based on robust, reproducible phenotypes.
- Supports biomarker development through quantitative molecular and histological readouts.
Pipeline & Workflow Integration
This model integrates into the discovery-to-preclinical continuum for reproductive health, supporting hypothesis testing, target validation, and translational research on endometrial disorders.
- Discovery Biology: Isolates uterine-specific mechanisms by removing ovarian hormone confounders.
- Screening: Provides reproducible, quantitative endpoints for assay development and compound evaluation.
- Analytics: Enables statistical comparison of induced versus non-induced uterine horns using weight, morphology, and gene expression.
- Translational Research: Bridges mechanistic findings to disease-relevant preclinical models for infertility and miscarriage.
- Enterprise Reuse: Offers a validated, scalable platform for ongoing reproductive biology and therapeutic studies.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence and reduces mechanistic ambiguity in endometrial research.
- Operational Value: Delivers standardized, reproducible, and scalable in vivo workflows.
- Strategic Value: Improves go/no-go decisions and capital efficiency by minimizing biological variability.
- Portfolio Impact: Supports risk-adjusted prioritization and advancement of reproductive health programs.
Implementation Considerations
- Requires surgical expertise in ovariectomy and uterine horn manipulation.
- Needs access to animal facilities, histology, and molecular analysis infrastructure.
- Demands strict cross-team standardization to ensure reproducibility and minimize contamination.
- Adaptable to various mouse strains but may require protocol optimization for different genetic backgrounds.
- Dependent on careful hormone supplementation and timing to achieve consistent decidualization.
