Manipolazione genetica mediata dai fagi della malattia di Lyme Spirochete Borrelia burgdorferi

Questo protocollo è significativo perché descrive un altro importante strumento per sezionare la biologia molecolare dell'agente della malattia di Lyme Borrelia burgdorferi. Il vantaggio principale di questa tecnica è che utilizzando la trasduzione fagica, fornisce un metodo alternativo per introdurre il DNA nella Borrelia burgdorferi senza richiedere l'applicazione di un impulso elettrico, come nell'elettroporazione. Questo metodo potrebbe essere utilizzato per fornire ulteriori informazioni sui meccanismi molecolari utilizzati da Borrelia burgdorferi per persistere nel suo ciclo enzootico e, infine, causare la malattia di Lyme negli esseri umani.

Per iniziare, inoculare 150 microlitri del clone appropriato di Borrelia burgdorferi in 15 millilitri di BSK in provette coniche sterili strettamente coperte per il protocollo di trasduzione. Quindi, integrare il terreno con la concentrazione appropriata di antibiotici o una combinazione di antibiotici per la selezione e il mantenimento del DNA eterologo all'interno del clone Borrelia burgdorferi e incubare il campione a 33 gradi Celsius. Dopo che la coltura è cresciuta, centrifugare il volume appropriato di coltura a 6.000 G per 10 minuti.