Name: Metodi di coltivazione delle spirochete di Borrelia burgdorferi Sensu Lato Complex e febbre recidivante Borrelia (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-11-25T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 37 s
Description: Impara i metodi di coltivazione in vitro delle spirochete Borrelia burgdorferi e Borrelia miyamotoi per la diagnosi di malattie infettive. Questo protocollo supporta la ricerca microbiologica e clinica.

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Questo lavoro è stato parzialmente sostenuto dal Natural Science and Engineering Research Council of Canada e dalla Canadian Lyme disease Foundation (AB e VL), dal Consiglio svedese delle ricerche (SB, M-LF e IN), DAL PROGETTO TAČR GAMA 2 - "Support of application potential verification 2.0 at the Biology Centre CAS" (TP01010022) (MG e NR), e da una sovvenzione del Ministero della Salute della Repubblica Ceca NV19-05-00191 (MG e NR). Ringraziamo S. Vranjes (2021, Rudenko lab) per l'immagine in Figura 4 e J. Thomas-Ebbett (2021, Lloyd lab) per le immagini in Figura 5. Ringraziamo tutti i ricercatori che hanno contribuito al campo e ci scusiamo con coloro il cui lavoro non siamo stati in grado di citare a causa di limitazioni di spazio.

Non sono stati dichiarati conflitti di interesse.

La coltura di laboratorio dei batteri è il trampolino di lancio per la ricerca. Il profondo vantaggio conferito dalla capacità di cultura è esemplificato dalla lotta, nel corso di oltre un secolo culminata solo recentemente nel successo, alla cultura Treponema pallidum, la spirocheta che è l'agente eziologico della sifilide44. Le spirochete Borrelia sono anche impegnative per la cultura, ma la cultura è possibile 23,24,34,44,45,46,47,48,49.<sup ...

Borrelia è un genere di batteri spirocheta che comprende tre cladi principali: il gruppo della borreliosi di Lyme (LB), il gruppo della febbre recidivante (RF) e un gruppo meno ben caratterizzato apparentemente limitato ai rettili. La tassonomia di Borrelia è in continua evoluzione con l'avvento di metodologie molecolari che consentono confronti tra genoma e proteoma, come è vero per la maggior parte degli altri gruppi tassonomici 1,2,3,4,5,6,7. Il gruppo LB (chiamato anche gruppo della malattia di Lyme) è stato tradizionalmente definito Borrelia burgdorferi sensu lato dopo il suo membro meglio caratterizzato Borrelia burgdorferi sensu stricto.  Questo articolo utilizza la terminologia attualmente più diffusa: LB, RF e gruppo associato ai rettili e descrive i protocolli di coltura per i gruppi LB e RF.
Come ci si aspetterebbe per un membro della famiglia delle Spirochaetaceae, Borrelia può adottare la caratteristica forma a spirale lunga e sottile, tipicamente lunga 20-30 μm e larga 0,2-0,3 μm. Tuttavia, le cellule di Borrelia sono altamente pleomorfe e possono assumere molte altre forme sia in coltura che in vivo 1,8 come risultato della loro complessa struttura cellulare e genetica. Nella sua forma spirochetale, la morfologia dell'onda sinusoidale planare risulta dai suoi endoflagelli assiali che ruotano nello spazio periplasmatico tra le membrane interne ed esterne. Questa struttura consente alle cellule di essere altamente mobili, con la membrana esterna contenente proteine che consentono alla cellula di interagire con i tessuti ospiti 9,10. L'espressione delle proteine della membrana esterna è strettamente regolata e influenza non solo l'invasione del tessuto ospite, ma anche l'interazione con il sistema immunitario dell'ospite11. Questa complessa espressione genica consente alle cellule Borrelia di fare la spola tra ambienti molto diversi di ospiti vertebrati e vettori invertebrati. Il genoma di Borrelia è insolito tra i procarioti, costituito da un cromosoma lineare piuttosto che circolare. Oltre al cromosoma lineare, le specie Borrelia contengono 7-21 plasmidi, alcuni lineari e alcuni circolari. I plasmidi ospitano la maggior parte dei geni necessari per l'adattamento e la virulenza dell'ospite, e si ritiene che i plasmidi circolari derivati dai profagi siano responsabili della maggior parte del flusso genico orizzontale tra le cellule spirochetali12,13. Coerentemente con un ruolo nell'adattamento dell'ospite, alcuni, forse molti o tutti, i membri del gruppo della borreliosi di Lyme perdono plasmidi nella cultura14. Il ceppo "adattato in laboratorio" meglio studiato di B. burgdorferi, B31, ha solo sette dei nove plasmidi trovati negli isolati selvatici di questa specie15. Allo stesso modo, B. garinii perde plasmidi in coltura16. Alcuni studi hanno dimostrato che le specie RF e B. miyamotoi conservano plasmidi quando coltivati14,17, ma recenti lavori dimostrano plasmidi alterati e infettività con la coltivazione in vitro a lungo termine 18.
I metodi basati sulla coltura rimangono il gold standard per la rilevazione di laboratorio delle infezioni batteriche, sia per la ricerca che per il lavoro clinico14,17. La coltura di agenti patogeni provenienti da fluidi corporei o tessuti rileva direttamente agenti patogeni replicanti e fornisce materiale di partenza per la ricerca14,17. Questo protocollo dimostra la metodologia e le ricette necessarie per coltivare con successo le spirochete del gruppo LB, nonché RF Borrelia e B. miyamotoi. Il terreno di base per la coltivazione delle spirochete Borrelia è il terreno di Barbour-Stoenner-Kelly (BSK-II o BSK-H disponibile in commercio), con o senza antibiotici per ridurre la crescita dei procarioti contaminanti. Questo mezzo è stato adattato da un mezzo originariamente utilizzato per supportare RF Borrelia19, ulteriormente modificato da Stoenner20 e poi da Barbour21. Da allora sono state sviluppate molte modifiche, ognuna con effetti sulla fisiologia batterica che possono influenzare la crescita, l'infettività e la patogenicità22. Questo mezzo supporta in modo affidabile la crescita delle spirochete nelle colture consolidate ed è stato utilizzato per isolare le spirochete da zecche, mammiferi e campioni clinici23. La variante più recente sviluppata, il terreno Kelly-Pettenkofer (MKP) modificato, può fornire un migliore successo di isolamento, morfologia e motilità quando si isolano nuovi isolati di Borrelia da campioni ambientali, quando il numero di spirochete presenti nel campione disponibile per seminare la coltura è basso23,24. In tutti i casi, il successo della coltivazione dipende in modo critico dal mezzo appena preparato e dall'uso di ingredienti appropriati; Non tutti gli ingredienti commerciali producono un mezzo di alta qualità. Le colture inoculate possono essere comodamente incubate senza agitazione in un incubatore convenzionale a 32-34 °C in presenza di una piccola quantità di ossigeno ambientale residuo. Le spirochete Borrelia sono anaerobe ma sono esposte in natura alle fluttuazioni delle concentrazioni di ossigeno e anidride carbonica e rispondono con cambiamenti nell'espressione genica26,27,28,29. Pertanto, l'espressione genica, la crescita e altri studi metabolici dovrebbero controllare i livelli di ossigeno e anidride carbonica con l'uso di un incubatore controllato dall'ossigeno o di una camera anaerobica. In coltura, le colture vengono controllate settimanalmente, o più spesso, per la presenza di spirochete con microscopia in campo oscuro o microscopia a contrasto di fase. Gli strisci di coltura possono essere colorati con macchie d'argento, immunoistochimica o attraverso l'uso di ceppi marcati con fluorescenza29,30. La PCR seguita dal sequenziamento del DNA è un metodo sensibile e specifico per rilevare e identificare geneticamente o confermare la specie Borrelia 30,31,32,33.
Esistono molte varianti minori del BSK-II, e alcune sono disponibili in commercio. Il protocollo descritto qui nella sezione 1 è stato adattato da Barbour (1984)21. Il mezzo liquido MKP è un mezzo sviluppato più di recente ed è descritto nella sezione 2. Viene preparato secondo un protocollo33,34 precedentemente riportato, che, analogamente al mezzo BSK, consiste in due fasi: preparazione del mezzo di base e preparazione del mezzo completo. Il terreno di coltura Borrelia può essere preparato con o senza antibiotici, come descritto nel paragrafo 3; gli antibiotici agiscono per ridurre i batteri contaminanti introdotti durante l'inoculazione con campioni clinici o ambientali, come descritto nella sezione 4; se inoculati con coltura pura di Borrelia sp., gli antibiotici potrebbero non essere necessari. La produzione di scorte di Borrelia a lungo termine è spesso importante e un protocollo per farlo è descritto nella sezione 5. La sezione 6 descrive l'uso di questi mezzi per isolare cloni puri di Borrelia sensu lato da campioni clinici o ambientali. Ci sono un certo numero di approcci possibili36; Di seguito è riportato uno trovato efficace. Il mezzo di placcatura utilizzato in questo protocollo è una modifica del mezzo di placcatura BSK-II37 e del mezzo MKP 34 (con siero di coniglio aumentato al 10%38).

<table><tbody><tr><td>Provette da 1,7 mL</td><td>VWR</td><td>87003-294</td><td>Articolo standard - qualsiasi fornitore farà</td></tr><tr><td>0,2&nbsp; &micro; m Filtro siringa sterile&nbsp;</td><td>VWR</td><td>28145-501</td><td>Articolo standard - qualsiasi fornitore farà</td></tr><tr><td>10 &micro; Puntale per pipetta con barriera L</td><td>Neptune</td><td>BT10XLS3</td><td>Articolo standard: qualsiasi fornitore eseguirà</td></tr><tr><td>pipette sierologiche da 10 ml.</td><td>Celltreat</td><td>229011B</td><td>Articolo standard - qualsiasi fornitore farà</td></tr><tr><td>1000 &micro; Puntale per pipetta con barriera L</td><td>Neptune</td><td>BT1000.96</td><td>Articolo standard - qualsiasi fornitore farà</td></tr><tr><td>una provetta da 15 ml</td><td></td><td>Celltreat 188261</td><td>Articolo standard - qualsiasi fornitore farà</td></tr><tr><td>20 &; Puntale per pipetta con barriera L</td><td>Neptune</td><td>BT20</td><td>Articolo standard - qualsiasi fornitore eseguirà</td></tr><tr><td>una siringa sterile da 20 ml&nbsp;</td><td>BD</td><td>309661</td><td>Articolo standard - qualsiasi fornitore farà</td></tr><tr><td>200 &micro; Puntale per pipetta barriera L</td><td>Neptune</td><td>BT200</td><td>Articolo standard - qualsiasi fornitore eseguirà</td></tr><tr><td>provette di coltura con tappo a vite da 25 mL</td> Fisher <td>Scientific</td><td>14-933C</td><td>Articolo standard - qualsiasi fornitore eseguirà</td></tr><tr><td>pipette sierologiche da 25 mL Celltreat</td><td></td><td>229025B</td><td>Articolo standard - qualsiasi fornitore eseguirà</td></tr><tr><td>3 mL Siringa sterile</td><td>BD</td><td>309657</td><td>Articolo standard - qualsiasi fornitore eseguirà</td></tr> il <tr><td>35% di BSA&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>A-7409</td><td>La fonte è importante - vedere la nota</td></tr><tr><td>Pipette sierologiche da 5 ml&nbsp;</td><td>Celltreat</td><td>229006B</td><td>Articolo standard - qualsiasi fornitore farà</td></tr><tr><td>provette da 50 ml</td><td>Celltreat</td><td>229421</td><td>Articolo standard - qualsiasi fornitore farà</td></tr><tr><td>provette di vetro MKP da 6,5 ml...</td><td>Schott</td><td>Schott Nr. 26 135 115</td><td>Articolo standard - qualsiasi fornitore farà</td></tr><tr><td>Amikacine</td><td>Sigma</td><td>PHR1654</td><td>articolo standard - qualsiasi fornitore farà</td></tr><tr><td>Amfotericina B</td><td>Sigma</td><td>A9528-100MG</td><td>articolo standard - qualsiasi fornitore farà</td></tr><tr><td>Bactrim / rimetoprim / sulfametossazolo</td><td>Sigma</td><td>PHR1126-1G</td><td>articolo standard - qualsiasi fornitore farà</td></tr><tr><td>BBL Brucella brodo</td><td>BD</td><td>211088</td><td>Articolo standard - qualsiasi fornitore farà</td></tr><tr><td>Armadio di biosicurezza</td><td>Labconco</td><td>302419100</td><td>Articolo standard - qualsiasi fornitore farà</td></tr><tr><td>Provette per la raccolta del sangue (parte superiore gialla - ACD)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BD&nbsp; Provette per la raccolta del sangue in vetro Vacutainer con destrosio acido citrato (ACD)</td><td>Articolo standard - qualsiasi fornitore farà</td></tr><tr><td>BSK-H Medium [con 6% di siero di coniglio]&nbsp;</td><td>Darlynn biologicals</td><td>BB83-500</td><td>Articolo standard - qualsiasi fornitore farà</td></tr><tr><td>centrifuga&nbsp;</td><td>Eppendorf</td><td>modello 5430</td><td>Articolo standard - qualsiasi fornitore lo farà</td></tr><tr><td>Acido citrico TrisodiumSaltDihydrate</td><td>Sigma</td><td>C-8532 100 g</td><td>Articolo standard - qualsiasi fornitore farà</td></tr><tr><td>CMRL</td><td>Gibco BRL</td><td>21540 500 mL</td><td>Articolo standard - qualsiasi fornitore farà</td></tr><tr><td>CMRL-1066</td><td>Gibco</td><td>21-510-018</td><td>Articolo standard - qualsiasi fornitore farà</td></tr><tr><td>Tubi criogenici (Nalgene)</td><td>Fisher Scientific</td><td>5000-0020</td><td>Articolo standard - qualsiasi fornitore eseguirà</td></tr><tr><td>Deep Petri con anello di impilamento 100 mm & volte; 25 mm</td><td>Sigma</td><td>P7741</td><td>Articolo standard - qualsiasi fornitore farà</td></tr><tr><td>Incubatore digitale</td><td>VWR</td><td>modello 1545</td><td>Articolo standard - qualsiasi fornitore farà</td></tr><tr><td>DMSO</td><td>ThermoFisher</td><td>D12345</td><td>Articolo standard - qualsiasi fornitore farà</td></tr><tr><td>Filtri per la sterilizzazione dei</td> <td>filtriMillipore 0,22&mu; m Membrana GPExpressPLUS</td><td>SCGPU05RE</td><td>Articolo standard - qualsiasi fornitore farà</td></tr><tr><td>Gelatina</td><td>Difco BD</td><td>214340 500 g</td><td>Articolo standard - qualsiasi fornitore farà</td></tr><tr><td>Provette per coltura in vetro</td><td>Fisher Scientific</td><td>99449-20</td><td>Articolo standard - qualsiasi fornitore farà</td></tr><tr><td>Glucosio</td><td>Sigma</td><td>G-7021 1 kg</td><td>Articolo standard - qualsiasi fornitore farà</td></tr><tr><td>Glycerol</td><td>Sigma</td><td>G5516</td><td>Articolo standard - qualsiasi fornitore farà</td></tr><tr><td>Hemafuge (Ematocrito & Centrifuga immuno-ematologica )</td><td>Labwissen</td><td>Modello 3220</td><td>Articolo standard - qualsiasi fornitore farà</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>H-3784 100 g</td><td>Articolo standard - qualsiasi fornitore eseguirà</td></tr><tr><td>N-acetilglucoseamina</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>A-3286 25 g</td><td>Articolo standard - qualsiasi fornitore farà</td></tr><tr><td>Neopeptone</td><td>Difco&nbsp; BD</td><td>211681 500 g</td><td>Articolo standard - qualsiasi fornitore lo farà</td></tr><tr><td>Neubauer Ematocitometro</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>Z359629</td><td>Articolo standard - qualsiasi fornitore farà</td></tr><tr><td>il microscopio a contrasto di fase&nbsp;</td><td>Leitz</td><td></td><td>Standard item - qualsiasi fornitore farà</td></tr><tr><td>Phosphomycin</td><td>Sigma</td><td>P5396-1G</td><td>Standard item - qualsiasi fornitore farà</td></tr><tr><td>Phosphomycine</td><td>Sigma</td><td>P5396</td><td>Standard item - qualsiasi fornitore farà</td></tr><tr><td>Pipetboy</td><td>Integra</td><td></td><td>Standard item - qualsiasi fornitore farà</td></tr><tr><td>Precision Standard Balance</td><td>OHAUS</td><td>modello TS200S</td><td>Standard item - qualsiasi il fornitore farà</td></tr><tr><td>l'acido piruvico (sale Na)</td> <td>Sigma</td><td>P-8574 25 g</td><td>Articolo standard - qualsiasi fornitore farà</td></tr><tr><td>il siero di coniglio.</td><td>Gibco</td><td>16-120-032</td><td>La fonte è importante&nbsp;</td></tr><tr><td>Siero di coniglio&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>R-4505&nbsp; 100 mL</td><td>La fonte è importante&nbsp;</td></tr><tr><td>Rifampicina</td><td>Sigma</td><td>R3501-1G</td><td>Articolo standard - qualsiasi fornitore farà</td></tr><tr><td>Bicarbonato di sodio</td><td>Sigma</td><td>S-5761 &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 500 g</td><td>Articolo standard - qualsiasi fornitore farà</td></tr><tr><td>Sufametaxazolo&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>PHR1126</td><td>Articolo standard - qualsiasi fornitore farà</td></tr><tr><td>TC Yeastolate</td><td>Difco&nbsp; BD</td><td>255752 100 g</td><td>Articolo standard - qualsiasi fornitore lo farà</td></tr><tr><td>Pipette di trasferimento</td><td>VWR</td><td>470225-044</td><td>Articolo standard - qualsiasi fornitore farà</td></tr><tr><td>Trimetoprim</td><td></td><td>Sigma PHR1056</td><td>articolo standard - qualsiasi fornitore lo farà</td></tr></tbody></table>

metodi di coltivazione delle spirochete di borrelia burgdorferi sensu lato complex e febbre recidivante borrelia

Cultivation Methods of Spirochetes from Borrelia burgdorferi Sensu Lato Complex and Relapsing Fever Borrelia

La Borrelia è costituita da tre gruppi di specie, quelle del gruppo Borreliosi di Lyme (LB), noto anche come B. burgdorferi sensu lato (s.l.) e recentemente riclassificato in Borreliella, il gruppo della febbre recidivante (RF) Borrelia e un terzo gruppo di spirochete associate ai rettili. I metodi basati sulla coltura rimangono il gold standard per il rilevamento in laboratorio di infezioni batteriche sia per la ricerca che per il lavoro clinico, poiché la coltura di agenti patogeni da fluidi corporei o tessuti rileva direttamente agenti patogeni replicanti e fornisce materiale di partenza per la ricerca. Le spirochete Borrelia e Borreliella sono fastidiose e a crescita lenta, e quindi non sono comunemente coltivate per scopi clinici; Tuttavia, la cultura è necessaria per la ricerca. Questo protocollo dimostra la metodologia e le ricette necessarie per coltivare con successo spirochete LB e RF, comprese tutte le specie riconosciute del complesso B. burgdorferi s.l. tra cui B. afzelii, B. americana, B. andersonii, B. bavariensis, B. bissettii/bissettiae, B. burgdorferi sensu stricto (s.s.), B. californiensis, B. carolinensis, B. chilensis, B. finlandensis, B. garinii, B. japonica, B. kurtenbachii, B. lanei, B. lusitaniae, B. maritima, B. mayonii, B. spielmanii, B. tanukii, B. turdi, B. sinica, B. valaisiana, B. yangtzensis espirochete RF, B. anserina, B. coriaceae, B. crocidurae, B. duttonii, B. hermsii, B. hispanica, B. persica, B. recurrentis e B. miyamotoi. Il terreno di base per la coltivazione di spirochete LB e RF è il mezzo Barbour-Stoenner-Kelly (BSK-II o BSK-H), che supporta in modo affidabile la crescita delle spirochete nelle culture consolidate. Per essere in grado di coltivare isolati di Borrelia appena isolati da campioni derivati da zecche o ospiti in cui il numero iniziale di spirochete è basso nell'inoculo, è preferibile il mezzo Kelly-Pettenkofer (MKP) modificato. Questo mezzo supporta anche la crescita di B. miyamotoi. Il successo della coltivazione delle spirochete RF dipende anche in modo critico dalla qualità degli ingredienti.

I terreni di coltura Borrelia BSK e MKP, e le varianti, sono terreni di coltura ricchi con ingredienti che devono essere preparati e sterilizzati in sequenza. Se preparato correttamente, il terreno BSK deve essere rosso-arancio e chiaro (Figura 1). La torbidità e le precipitazioni che persistono dopo il riscaldamento indicano ingredienti problematici, produzione media o contaminazione; Tale mezzo è meglio scartarlo. Se la gelatina viene aggiunta a BSK e con MKP, il mezzo sarà gelati...

La coltura in vitro è un metodo di rilevamento diretto per la presenza di batteri viventi. Questo protocollo descrive i metodi per la coltura di diverse spirochete Borrelia, comprese quelle del complesso Borrelia burgdorferi sensu lato, della febbre recidivante delle specie Borrelia e della Borrelia miyamotoi. Queste specie sono esigenti e a crescita lenta, ma possono essere coltivate.

Metodi di coltivazione delle spirochete di Borrelia burgdorferi Sensu Lato Complex e febbre recidivante Borrelia

The Borrelia consists of three groups of species, those of the Lyme borreliosis (LB) group, also known as B. burgdorferi sensu lato (s.l.) and recently ...

Borrelia è un genere di batteri della spirocheta che comprende tre tipi principali. Il gruppo Borreliosi di Lyme, il gruppo della febbre recidivante e il gruppo meno ben caratterizzato trovato nei rettili. Molte specie di Borrelia sono patogene.La coltura di batteri è il gold standard per la rilevazione dell'infezione. Questo è vero sia per la ricerca che per il lavoro clinico. La coltura di batteri dal fluido corporeo e dai tessuti conferma che i batteri sono sia vitali che replicanti.Questo protocollo dimostra la metodologia e le ricette necessarie per coltivare e preservare con successo il gruppo di spirochete della borreliosi di Lyme, la febbre recidivante Borrelia e la Borrelia miyamotoi. Sono previsti metodi per la coltura di specie e ceppi precedentemente isolati, nonché nuovi isolati e isolati monoclonali da fonti ambientali o di mammiferi. A dimostrare la procedura saranno Marie-Line Faucillion, ricercatrice post-dottorato, e Ingela Nilsson, tecnico del Bergstrom Lab, Anne Berthold, ricercatrice associata del Lloyd Lab, e Maryna Golovchenko, ricercatrice associata del Rudenko Lab.Per iniziare, procurati i reagenti necessari per preparare un litro di terreno Barbara-Stoner-

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Immunology and Infection

Immunologia e Infezioni

Malattia di Lyme studi di ricerca spesso richiedono la generazione di zecche infette dal patogeno Borrelia burgdorferi, un processo che richiede in genere diverse settimane. Qui si dimostrano una microiniezione procedura basata infezione zecca che può essere compiuto entro poche ore. Abbiamo anche dimostrare un metodo di immunofluorescenza per la localizzazione in situ di B. burgdorferi in zecche.

Metodi per il trasferimento rapido e localizzazione di agenti patogeni malattia di Lyme All&#39;interno della Gut Tick

Fonte: Eggers, C. H. Manipolazione genetica mediata dai fagi della spirocheta Borrelia burgdorferi della malattia di Lyme. J. Vis. Exp. (2022)Questo video mostra la preparazione di una coltura di Borrelia burgdorferi geneticamente modificata ingegnerizzata con DNA batteriofago dormiente che trasporta un gene di resistenza agli antibiotici. Dopo la selezione e l'incubazione degli antibiotici, un induttore chimico innesca il danno al DNA, portando all'escissione, alla replicazione e...

Preparazione e induzione di colture di Borrelia burgdorferi per la produzione di particelle virali

Source: Berthold, A., et al. Cultivation Methods of Spirochetes from Borrelia burgdorferi Sensu Lato Complex and Relapsing Fever Borrelia. J. Vis. Exp.(2022)This video demonstrates the cultivation of pathogenic spirochetes from infected skin tissue to model dermal infection. It highlights their localization in the dermis, interaction with the extracellular matrix, and survival during selective culture conditions.

Cultivation of Pathogenic Spirochetes to Investigate Skin Infection

La malattia di Lyme è la più comunemente riportati vector-borne malattia in Nord America. L'agente eziologico, Borrelia burgdorferi è un batterio spirocheta trasmessa da zecche ixodid. Trasmissione e rilevamento di un'infezione in modelli animali è ottimizzata dall'utilizzo di alimentazione tick, che descriveremo qui.

Alimentazione di zecche su animali per trasmissione e Xenodiagnosis a Lyme Disease Research

Nested PCR è una tecnica sensibile, specifica e semplice che può essere applicata a tick che DNA estratti per sonda per Borrelia burgdorferi, l'agente eziologico della malattia di Lyme. L'esperimento PCR iniziale utilizza gli iniettori di gene-specific per generare ampliconi lunghi, che poi diventano modelli per una successiva reazione utilizzando primers interna.

Rilevare il malattia di Lyme Spirochete, Borrelia Burgdorferi, in segni di graduazione utilizzando la PCR annidata

I saggi di trascrizione in vitro possono decifrare i meccanismi di regolazione trascrizionale in Borreliella burgdorferi. Questo protocollo descrive i passaggi per purificare la RNA polimerasi di B. burgdorferi ed eseguire reazioni di trascrizione in vitro . Gli approcci sperimentali che utilizzano saggi di trascrizione in vitro richiedono una purificazione e una conservazione affidabili della RNA polimerasi attiva.

Componenti essenziali di Borreliella (Borrelia) burgdorferi Saggi di trascrizione in vitro

La capacità dei batteriofagi di spostare il DNA tra le cellule batteriche li rende strumenti efficaci per la manipolazione genetica dei loro ospiti batterici. Presentata qui è una metodologia per indurre, recuperare e utilizzare φBB-1, un batteriofago di Borrelia burgdorferi, per trasdurre DNA eterologo tra diversi ceppi della spirocheta della malattia di Lyme.

Manipolazione genetica mediata dai fagi della malattia di Lyme Spirochete Borrelia burgdorferi

Un sistema di analisi del flusso di fluorescenza a doppio reporter a tre canali è stato utilizzato per sviluppare un test immunologico multiplex basato su microsfere che valuta simultaneamente i campioni di siero per IgG e IgM suscitati contro più antigeni di diverse specie di Borrelia che causano la borreliosi di Lyme in Europa e Nord America.

Rilevamento simultaneo di diverse classi di anticorpi in un test sierologico multiplexato

Questo articolo presenta la metodologia per esporre l'uomo alla larva di Ixodes scapularis per la ricerca clinica. La tecnica è relativamente semplice, tollerabile dai volontari della ricerca e può essere modificata in base alle esigenze sperimentali. Tale ricerca che coinvolge soggetti umani deve essere condotta secondo protocolli di studio clinico approvati dalle autorità regolatorie competenti.

Un modello per l'esposizione sperimentale dell'uomo alle zecche larvali di Ixodes scapularis

Questo protocollo descrive la coltivazione in vitro del patogeno della sifilide Treponema pallidum subsp. pallidum in co-coltura con cellule di mammifero. Il metodo è scalabile; può essere utilizzato per produrre grandi quantità di T. pallidum e per generare colture clonali.

Procedure per la coltivazione in vitro di Treponema pallidum, la spirocheta della sifilide

Abbiamo sviluppato un sistema transwell ex vivo umano in grado di valutare cambiamenti infiammatori acuti, infettivi e strutturali nella sinovia.

Un modello preclinico di sinovite utilizzando tessuto sinoviale umano ex vivo con funzione e architettura preservate

Impara i metodi di coltivazione in vitro delle spirochete Borrelia burgdorferi e Borrelia miyamotoi per la diagnosi di malattie infettive. Questo protocollo supporta la ricerca microbiologica e clinica.

Metodi di coltivazione delle spirochete di Borrelia burgdorferi Sensu Lato Complex e febbre recidivante Borrelia

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