Name: Preparazione scalata di un intermedio di upatinib, ACT051-3 (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-04-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 36 s
Description: Scopri la sintesi scalata dell'intermedio ACT051-3 di Upatinib con un metodo semplice, economico ed ecocompatibile. Questo protocollo di chimica organica supporta lo sviluppo farmaceutico sostenibile.

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1. Sintesi su scala pilota dei composti ACT051-2 e ACT051-3
<ol><li>Sintesi della 2-bromo-5-tosil-5H-pirrolo[2,3-b]pirazina (ACT051-2)<ol><li>In un matraccio a fondo tondo, sciogliere 50,0 g del composto 2-bromo-5H-pirrolo[2,3-b]pirazina (ACT051-1; 0,25 M) in 15 mL di N,N-dimetilformammide (DMF; 3 V).</li>
		<li>Aggiungere 65,3 g di diisopropiletilammina (DIPEA; 0,51 M) alla soluzione di reazione sotto protezione azotata (fornire una barriera contro gas e umidità) e raffreddare la temperatura a 0-5 °C attraverso un bagno d'acqua fredda. Per la protezione dall'azoto, pompare la pressione del reattore a -0,75--0,8 MPa, quindi passare N2 per bilanciare la pressione a 0,1 MPa.</li>
		<li>Aggiungere 60,20 g di TsCl sciolto in 12 ml di DMF (0,32 M). Portare la temperatura a 20-30 °C attraverso il bagnomaria e mescolare per circa 1 ora. Aggiungere acqua fredda (600,0 ml, 0-10 °C) alla miscela e mescolare per altre 1 ora.</li>
		<li>Filtrare il prodotto sottovuoto utilizzando un imbuto di vetro con un pannello abrasivo imbottito con carta da filtro. Lavare con acqua (200,0 ml) più volte e asciugare utilizzando un forno elettrico termostatico per ottenere un solido giallo pallido (ACT051-2) con una resa del 78%.</li>
	</ol></li>
	<li>Sintesi del terz-butile (5-toluensulfonil-5H-pirrolo [2,3-b] pirazina-2-il) carbammato (ACT051-3)<ol><li>Sciogliere 176,11 g di ACT051-2 in 366,31 g di 1,4-diossano in un matraccio a fondo tondo a tre porte.</li>
		<li>Aggiungere alla soluzione 65,75 g di terz-butilcarbammato, 138,21 g di carbonato di potassio granulare (2,0 eq), 11,57 g di xantphos (0,04 eq) e 2,25 g di Pd(OAc)2 (1,28% in peso).</li>
		<li>Riscaldare la miscela a 105 °C e mescolare per 7 ore in atmosfera di azoto. Lasciare raffreddare la miscela a temperatura ambiente e filtrare il prodotto con un imbuto Buchner (l'apertura della carta da filtro è 80-120 μm).</li>
		<li>Lavare il residuo filtrante con acetato di etile (200 ml). Utilizzare una pompa per vuoto ad acqua circolante per concentrare il prodotto a pressione ridotta a 50-60 °C con un valore di pressione di -0,095 MPa. Mantenere la pompa in funzione per mantenere la pressione e ottenere un olio marrone scuro.</li>
		<li>Purificare il prodotto grezzo con cromatografia su colonna, eluendo con etere di petrolio e acetato di etile (V/V, 10/1) per ottenere il composto target come solido bianco con una resa del 93,5%.</li>
	</ol></li>
</ol>2. Sintesi pilota scale-up dei composti ACT051-2 e ACT051-3
<ol><li>Sintesi pilota di scale-up di 2-bromo-5-tosil-5H-pirrolo[2,3-b]pirazina (ACT051-2)<ol><li>Aggiungere 1,0 kg di ACT051-1 (5,05 M) e 1,305 kg di DIPEA (10,1 M) a un matraccio a fondo tondo a tre porte. Aggiungere 3 L di DMF (3 V) al matraccio e sciogliere il solido. Riscaldare la miscela di reazione a 35 °C.</li>
		<li>Aggiungere 1,203 kg di TsCl (6,31 M) alla soluzione di reazione e agitare per 1 ora. Mescolare la miscela fino a quando il completamento della reazione è confermato dalla cromatografia su strato sottile (TLC) e dalla cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC). In breve, prendere una piccola quantità di prodotto di reazione e sottoporlo al monitoraggio TLC. Quando il TLC mostra che non è rimasta quasi nessuna materia prima, inviare il campione al controllo centrale HPLC e rilevare la reazione alla materia prima o il rapporto del prodotto pari a 0,1/99,9.</li>
		<li>Versare 8,4 L di acqua fredda e mescolare per altri 0,5 h. Filtrare tutti i liquidi con un imbuto Buchner (l'apertura della carta da filtro è 80-120 μm) e sciacquare il prodotto grezzo con 600 ml di acqua.</li>
		<li>Asciugare il prodotto ottenuto a 70 °C durante la notte utilizzando un forno elettrico termostatico e ottenere un prodotto con una resa del 94,9%.</li>
	</ol></li>
	<li>Sintesi pilota su scale-up del terz-butile (5-toluenesulfonil-5H-pirrolo [2,3-b] pirazina-2-il) carbammato (ACT051-3)<ol><li>Aggiungere 3,31 L di alcool terz-amilico e 4,97 L di toluene (V/V, 2/3) al bollitore di reazione.</li>
		<li>Alla soluzione, aggiungere 1,66 kg di ACT051-2, 0,83 kg di terz-butilcarbammato, 1,301 kg di carbonato di potassio in polvere, 0,11 kg di xantphos e 0,31 kg di DIPEA.</li>
		<li>Evacuare l'azoto tre volte, come al punto 1.1.2, ripetere questa operazione 3x e aggiungere 10 g di Pd(OAc)2 (0,60% in peso) alla soluzione di reazione sotto protezione azotata.</li>
		<li>Riscaldare la miscela di reazione a 90 °C e mescolare per 4 ore. Raffreddare la miscela a 40 °C o inferiore.</li>
		<li>Filtrare la soluzione di reazione con un imbuto di Buchner (l'apertura della carta da filtro è 80-120 μm) usando la diatomite come coadiuvante filtrante e lavando la torta filtrante con toluene.</li>
		<li>Raccogliere e concentrare il filtrato. Utilizzare una pompa per vuoto ad acqua circolante per concentrare il filtrato a pressione ridotta a 50-60 °C con un valore di pressione di -0,095 MPa. Mantenere la pompa in funzione per mantenere la pressione.</li>
		<li>Aggiungere 300 ml di eptano e mescolare per 20 minuti. Filtrare nuovamente la soluzione di reazione con un imbuto di Buchner (l'apertura della carta da filtro è 80-120 μm) e sciacquare il prodotto grezzo con eptano (50 ml, tre volte). Asciugare e ottenere il prodotto con una resa del 96,3%.</li>
	</ol></li>
</ol>3. Produzione industriale di composti ACT051-2 e ACT051-3
<ol><li>Produzione industriale di 2-bromo-5-tosil-5H-pirrolo[2,3-b]pirazina (ACT051-2)<ol><li>Verificare che il reattore sia pulito e privo di acqua e assicurarsi che il dispositivo di miscelazione non emetta rumore all'accensione e che la valvola di scarico inferiore del reattore sia stata chiusa.</li>
		<li>Aggiungere 355,50 kg di DMF (3 V) nel reattore smaltato da 2.000 L e iniziare a mescolare. Aggiungere alla soluzione 125,04 kg di ACT051-1 (1,0 eq) e 164,8 kg di DIPEA (2,0 eq).</li>
		<li>Abbassare la temperatura a 20-25 °C sotto protezione da azoto. Aggiungere 150,22 kg di TsCl (1,25 eq) a 25-35 °C in 10 lotti entro 3 ore.</li>
		<li>Lasciare che la miscela rimanga a 25-35 °C e mescolare per 2 ore. Preparare 750,20 kg di acqua fredda (3-4 °C) in un altro reattore da 2.000 L.</li>
		<li>Monitorare la reazione mediante HPLC e confermare il completamento della reazione quando la materia prima rimanente è dello 0,5%.</li>
		<li>Aggiungere l'acqua fredda (3-4 °C) alla miscela di reazione e mescolare a 15-30 °C per 1,5 h. Raccogliere il filtrato e risciacquare con acqua (250-500 kg, 2-4 V) fino a quando non diventa neutro (testato con carta pH).</li>
		<li>Asciugare il prodotto a 60-65 °C per 30,5 h per ottenere un solido marrone chiaro con una resa del 95,5%.</li>
	</ol></li>
	<li>Produzione industriale di terz-butile (5-toluensulfonil-5H-pirrolo [2,3-b] pirazina-2-il) carbammato (ACT051-3)<ol><li>Verificare che il reattore sia pulito e privo di acqua e assicurarsi che il dispositivo di miscelazione sia normale e che la valvola di scarico inferiore del reattore sia stata chiusa.</li>
		<li>Aggiungere 340,10 kg di alcool terz-amilico (2 V) e 552,50 kg di toluene (3 V) in un reattore smaltato da 2.000 L e iniziare a mescolare.</li>
		<li>Aggiungere alla soluzione 212,40 kg di ACT051-2 (1,0 eq), 106,00 kg di terz-butilcarbammato (1,5 eq), 166,70 kg di carbonato di potassio in polvere (2,0 eq), 14,10 kg di xantphos (0,04 eq), 39,40 kg di DIPEA (0,5 eq) e 1,06 kg di Pd(OAc)2 (0,5% in peso).</li>
		<li>Sostituire l'azoto quattro volte, lasciare riscaldare la miscela a 85-95 °C sotto protezione azotata e mescolare per 3 ore. Monitorare la reazione mediante HPLC e confermare il completamento della reazione quando la materia prima rimanente è dello 0,44%.</li>
		<li>Raffreddare la temperatura di reazione a 20-30 °C. Raccogliere la soluzione in lotti e metterla in un secchio di plastica da 125 L per 30 minuti.</li>
		<li>Filtrare la soluzione di reazione con un cilindro del filtro di aspirazione chimica (l'apertura del sacchetto del filtro è 10-15 μm) usando la diatomite come coadiuvante filtrante e lavando la torta del filtro con toluene (185,20-370,40 kg, 1-2 V).</li>
		<li>Raccogliere il filtrato in un recipiente di smalto e utilizzare una pompa per vuoto ad acqua circolante a pressione ridotta a 55-65 °C per 10 h con un valore di pressione di -0,095 MPa. Mantenere la pompa in funzione per mantenere la pressione e ottenere il composto del prodotto come liquido viscoso.</li>
		<li>Far evaporare il prodotto due volte pompando toluene e continuando la reazione. Concentrare il prodotto finale per 4 ore. Purificare il prodotto ottenuto mediante cromatografia su colonna, eluendo con eptano e acetato di etile (V/V, 10/1-3/1), per ottenere un solido con una resa del 98,5%.</li>
	</ol></li>
</ol>

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<li>Fragoulis, G. E., Brock, J., Basu, N., McInnes, I. B., Siebert, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+for+JAK+inhibitors+in+the+treatment+of+immune-+mediated+rheumatic+and+related+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Allergy+and+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">The role for JAK inhibitors in the treatment of immune- mediated rheumatic and related conditions.</a> The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 148 (4), 941-952 (2021).</li>
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<li>Paul, F., Patt, J., Hartwig, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Palladium-catalyzed+formation+of+carbon-nitrogen+bonds.+Reaction+intermediates+and+catalyst+improvements+in+the+hetero+cross-coupling+of+aryl+halides+and+tin+amides%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Palladium-catalyzed formation of carbon-nitrogen bonds. Reaction intermediates and catalyst improvements in the hetero cross-coupling of aryl halides and tin amides.</a> Journal of the American Chemical Society. 116 (13), 5969-5970 (1994).</li>
<li>Zhou, T., Ji, C. L., Hong, X., Szostak, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Palladium-catalyzed+decarbonylative+Suzuki-Miyaura+cross-coupling+of+amides+by+carbon-nitrogen+bond+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Science%22%5BJournal%5D)">Palladium-catalyzed decarbonylative Suzuki-Miyaura cross-coupling of amides by carbon-nitrogen bond activation.</a> Chemical Science. 10 (42), 9865-9871 (2019).</li>
<li>Sain, S., Jain, S., Srivastava, M., Vishwakarma, R., Dwivedi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+palladium-catalyzed+cross-coupling+reactions+in+organic+synthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Organic+Synthesis%22%5BJournal%5D)">Application of palladium-catalyzed cross-coupling reactions in organic synthesis.</a> Current Organic Synthesis. 16 (8), 1105-1142 (2019).</li>
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</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Le condizioni di reazione della sintesi, tra cui la temperatura di reazione, il tempo, la selezione dei reagenti di reazione e il rapporto tra i materiali, influenzano la fattibilità della reazione, le rese, la purezza e il costo di produzione, in particolare per la produzione su larga scala.
Nella sintesi di laboratorio di ACT051-2, TsCl in forma liquida (disciolto in DMF; passo 1.1.3) può essere utilizzato nella reazione; tuttavia, non è adatto per la sintesi pilota su scala o la produzione ...

Upatinib è diventato un inibitore della Janus chinasi 1 (JAK1) popolare a livello mondiale per il trattamento dei disturbi immunitari negli ultimi anni 1,2. Questo farmaco ha dimostrato significativi effetti terapeutici sull'artrite psoriasica (PsA)3,4, artrite reumatoide (RA)5,6,7, e dermatite atopica (AD)8,9. Inoltre, grazie alla sua elevata selettività10, Upatinib ha una vasta gamma di applicazioni cliniche. Il carbammato di terz-butile (5-tosil-5h-pirolo [2,3-b] pirazina-2-il) (ACT051-3) è un importante intermedio di Upatinib. I suoi principali componenti strutturali sono l'anello pirrolico e l'anello pirazinico, che possono essere utilizzati nella preparazione di nuovi inibitori delle chinasi triciclici contenenti azoto per il trattamento di malattie immunitarie e tumorali11.
Lo scale-up pilota è uno scale-up di medie dimensioni (50x-100x) del percorso di processo e delle condizioni determinate dallo studio pilota di laboratorio, seguito da test di processo, indagini industriali e ottimizzazione per determinare le migliori condizioni operative e di produzione industriale12.
Allo stato attuale, le vie di sintesi di laboratorio per questo composto intermedio (ACT051-3) sono state riportate, ma sono state eseguite solo su piccola scala a causa di problemi di bassa resa, reazioni complesse e requisiti elevati delle apparecchiature, che hanno ancora molto spazio per essere ottimizzate11,13,14,15. Tuttavia, al momento non è stato segnalato alcun percorso di processo per lo scale-up pilota e la produzione industriale del composto intermedio ACT051-3.
Pertanto, in questo studio, abbiamo studiato lo scale-up pilota e il percorso di produzione del composto ACT051-3, con riferimento alle vie sintetiche di laboratorio meglio riportate. Rispetto alla via di sintesi originale di laboratorio, sono stati apportati molti aggiustamenti e miglioramenti appropriati alle condizioni di reazione e sono stati studiati altri fattori che possono influenzare i risultati della reazione. Infine, sono stati identificati i parametri di processo più adatti per il percorso ottimale e abbiamo ottenuto un percorso di processo semplice da utilizzare, a basso costo e rispettoso dell'ambiente, adatto allo scale-up pilota e alla produzione di ACT051-3.

<table><tbody><tr><td>2-bromo-5H-pirrolo[2,3-b]pirazina</td><td>Nanjing Cook Biotechnology Co., Ltd.</td><td></td><td></td>19120110</tr><tr><td>1,4-diossano</td><td>Liaoning cook Biotechnology Co., Ltd</td><td>Reagente</td><td></td>generale</tr><tr><td>1H NMR</td><td></td><td>Bruker AVIII 500</td><td></td></tr><tr><td>37% cloruro acido grado molecolare</td><td>NEON</td><td>02618 NEON</td><td></td></tr><tr><td>4-toluenesulfonilcloruro (TsCl)</td><td>Nanjing Cook Biotechnology Co., Ltd.</td><td>AR A2010137</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Chicken IgY (H+L), altamente adsorbito in modo incrociato, CF  Anticorpo 488A prodotto nell'asino</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>SAB4600031</td><td></td></tr><tr><td>Anti-topo IgG (H+L), F(ab′)2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>SAB4600388</td><td></td></tr><tr><td>BD FACSCanto II</td><td>BD Biosciences</td><td>BF-FACSC2</td><td></td></tr><tr><td>BD FACSDiva CS&amp; Perle di ricerca T (CS&amp; BD</td> <td>Biosciences</td><td>655050</td><td></td></tr><tr><td>BD FACSDiva software 7.0</td><td>BD Biosciences</td><td>655677</td><td></td></tr><tr><td>Albumina sierica bovina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4503</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuga 5702 R</td><td>Eppendorf</td><td>Z606936</td><td></td></tr><tr><td>Pompa per vuoto di circolazione dell'acqua</td><td>Guangzhou Zhiyan Instrument Co., Ltd</td><td>SHZ-D(<img alt="Equazione 1" src="/files/ftp_upload/64514/64514eq01.jpg" style="margine: auto; ">)Lattice</td><td></td></tr> <tr><td>CML, 4% w/v</td><td>Invitrogen</td><td>C37253</td><td></td></tr><tr><td>Diatomite</td><td>Guangzhou Qishuo Chemical Co., Ltd.</td><td>/</td><td></td></tr><tr><td>Essiccatore a vuoto rotativo a doppio cono</td><td>Jiangsu Yang-Yang Chemical Equipment Plant Inc</td><td>SZE-500T</td><td></td></tr><tr><td>bollitore smaltato</td><td>Jiangsu Yang-Yang Chemical Equipment Plant Inc</td><td>CS-03-002</td><td>1000L / 2000L</td></tr><tr><td>eptano</td><td>Nanjing Cook Biotechnology Co., Ltd.</td><td>General Reagent</td><td></td></tr><tr><td>HPLC</td><td>Guangzhou aoyi Technology Trading Co., Ltd</td><td>LC-2030C 3D</td><td></td></tr><tr><td>Evaporatori rotanti su larga scala</td><td>Guangzhou Xingshuo Instrument Co., Ltd.</td><td>RE-2002</td><td></td></tr><tr><td>Bagno di reazione di agitazione a bassa temperatura e temperatura costante</td><td>Guangzhou Yuhua Instrument Co., Ltd</td><td>XHDHJF-3005</td><td></td></tr><tr><td>Pompa di circolazione del refrigerante a bassa temperatura</td><td>Guangzhou Jincheng Scientific Instrument Co., Ltd</td><td>XHDLSB-5/25</td><td></td></tr><tr><td>Megafuge 8R</td><td>Thermo Scientific</td><td>TS-HM8R</td><td></td></tr><tr><td>N, N-Diisopropyl ethylamine (DIPEA)</td><td>Apicci Pharm</td><td>Reagente</td><td></td>generale</tr><tr><td>N-dimetilformammide (DMF)</td><td>Guangzhou bell Biotechnology Co., Ltd</td><td>Reagente</td><td></td>generale</tr><tr><td>Acido ottanoide</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>O3907</td><td></td></tr><tr><td>Pd(OAc)2</td><td>Xi'an Catalyst New Materials Co., ltd.</td><td></td><td></td>200704</tr><tr><td>Soluzione salina tamponata con fosfato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1003335620</td><td></td></tr><tr><td>Carbonato di potassio (K2CO3)</td><td>Guangzhou Zhonghua Trade Co., Ltd.</td><td>Reagente</td><td></td>generale</tr><tr><td>Alcool amilico Tert</td><td>Nanjing Cook Biotechnology Co., Ltd.</td><td>Reagente</td><td></td>generale</tr><tr><td>terz-butil carbammato</td><td>Nanjing Cook Biotechnology Co., Ltd.</td><td>Reagente</td><td></td>generale</tr><tr><td>Thermo Mixer Caldo/Freddo</td><td>KASVI</td><td>K80-120R</td><td></td></tr><tr><td>toluene</td><td>Liaoning cook Biotechnology Co., Ltd</td><td>Reagente</td><td></td>generale</tr><tr><td>Forno di essiccazione sottovuoto</td><td>Guangzhou Yuhua Instrument Co., Ltd</td><td>DZF-6090</td><td></td></tr><tr><td>Acqua</td> <td>/</td><td>/</td><td></td></tr><tr><td>Xantphos</td><td>Liaoning cuoco Biotechnology Co., Ltd</td><td>Asp20-44892</td><td></td></tr></tbody></table>

preparazione scalata di un intermedio di upatinib, act051-3

Scaled-Up Preparation of an Intermediate of Upatinib, ACT051-3

Upatinib, un farmaco inibitore della chinasi Janus, è stato sviluppato da una società biotecnologica per il trattamento delle malattie immunitarie. Il composto terz-butile (5-toluenesulfonil-5H-pirrolo [2,3-b] pirazina-2-il) carbammato (ACT051-3) è un importante intermedio di Upatinib. Ad oggi, la produzione industriale costante di questo composto intermedio (ACT051-3) non è stata segnalata. In questo studio, abbiamo descritto il metodo di sintesi specifico e il processo del composto ACT051-3 in termini di sintesi di laboratorio, scale-up pilota e produzione industriale. Durante l'esplorazione del percorso di processo per ACT051-3, sono state apportate molte modifiche e miglioramenti appropriati alle condizioni di reazione, portando infine allo sviluppo di successo del processo di produzione industriale ottimale per ACT051-3. Il tempo di reazione è stato quasi raddoppiato modificando lo stato del carbonato di potassio coinvolto nella reazione, che ha notevolmente migliorato l'efficienza della reazione. Inoltre, introducendo N,N-diisopropiletilammina (DIPEA) nella reazione, la quantità del costoso catalizzatore Pd(OAc)2 è stata ridotta di 2,5 volte, riducendo significativamente i costi di produzione, confermando la fattibilità di questo percorso di processo e la produzione industriale di ACT051-3 e soddisfacendo la domanda del mercato per questo importante intermedio.

Questo studio fornisce il processo di sintesi scalato per l'importante intermedio ACT051-3 di Upatinib (Figura 1 e Figura 2). La sezione del protocollo (fasi 1-3) mostra specificamente la sintesi gram-grade, la sintesi su scala pilota di chilogrammo e la fase di produzione scale-up del composto ACT051-2 e dell'intermedio ACT051-3.
Nel corso dell'esplorazione del percorso ottimale per il composto ACT051-2, come mostrat...

Qui, presentiamo un protocollo per la sintesi su larga scala del terz-butile intermedio (5-toluenesulfonil-5h-pirrolo [2,3-b] pirazina-2-il) carbammato (ACT051-3) di Upatinib.

Preparazione scalata di un intermedio di upatinib, ACT051-3

Upatinib, a Janus kinase inhibitor drug, was developed by a biotech company to treat immune diseases. The compound tert-butyl ...

Qui viene presentato un protocollo per la sintesi su larga scala di un intermedio di upatinib, ACT051-3. Questo metodo è semplice da usare, a basso costo e rispettoso dell'ambiente. Per iniziare, preparare ACT051-2 sciogliendo 50 grammi del composto 2-bromo-5-tosil-5H-pirrolo[2, 3-b] pirazina in 15 millilitri di N, N-dimetilformammide o DMF in un matraccio a fondo rotondo.Aggiungere 65,3 grammi di diisopropiletilammina alla soluzione di reazione sotto protezione da azoto e raffreddare la temperatura da 0 a 5 gradi Celsius attraverso un bagno di acqua fredda. Aggiungere 60,2 grammi di cloruro di para-toluene sulfonile, o TsCL, sciolto in 12 millilitri di DMF e aumentare la temperatura a 20-30 gradi Celsius attraverso il bagno di acqua calda. Mescolare per circa 1 ora.Aggiungere 600 millilitri di acqua fredda alla miscela e mescolare per un'altra 1 ora. Filtrare il prodotto sottovuoto utilizzando un imbuto di vetro con un pannello abrasivo imbottito con carta da filtro. Lavare con 200 millilitri di acqua più volte e asciugare, utilizzando un forno elettrico termostatico per ottenere ACT051-2 solido giallo pallido con una resa del 78%Per la sintesi di ACT051-3, sciogliere 176,11 gramm

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