Estrazione dinamica continua del sangue dal cuore di ratto tramite tecnica di microdialisi non invasiva

Il presente protocollo descrive un metodo semplice ed efficace per la raccolta dinamica e in tempo reale del sangue del cuore di ratto utilizzando la tecnica della microdialisi.

La nostra tecnica di raccolta dinamica continua del sangue da un cuore di ratto è molto importante per analizzare i componenti del sangue, contribuendo alla comprensione delle malattie cardiovascolari e delle loro malattie correlate. Rispetto ai metodi di campionamento tradizionali, questa tecnica presenta i vantaggi di essere in vivo, in tempo reale, dinamica e non invasiva, senza micromolecole biologiche e pre-processo di campionamento del titolo per un test esterno. Questa tecnica non è applicabile solo alle malattie cardiovascolari, ma dovrebbe anche funzionare per la diagnosi e il trattamento delle malattie rilevando biomarcatori del sangue combinati con cromatografia liquida ad alta fase e spettrometria di massa.

Questo metodo può essere utilizzato per studiare malattie cardiovascolari come infarto miocardico, apnea e aterosclerosi. Inoltre, si applica anche all'edema polmonare cardiogeno e all'embolia polmonare e cerebrale. Dopo aver eseguito la preparazione sperimentale, collegare l'ingresso della sonda dell'unità di dialisi con l'ago della siringa, l'adattatore del tubo e il tubo FEP.

Controllare la pervietà del sistema di tubazioni di microdialisi perfondendo la soluzione di destrosio citrato anticoagulante nel sistema di tubazioni. Fare un'incisione per esporre la vena giugulare destra mediante dissezione smussata dei tessuti molli e della fascia perivascolare. Utilizzando una sutura chirurgica 4-0, fare un nodo staccabile nella vena giugulare destra all'estremità distale del cuore per bloccare temporaneamente il flusso sanguigno.

Quindi fare un'incisione nella vena giugulare destra vicino al cuore. Inserire uno stiletto catetere a forma di ago nella vena giugulare destra verso l'estremità prossimale del cuore di ratto. Inserire la sonda di microdialisi del sangue in un catetere e impiantare la sonda con pinza oftalmica lungo l'incisione obliqua dello stile del catetere.

Rimuovere lo stiletto del catetere guidato e immergere completamente la membrana semipermeabile della sonda nella vena giugulare destra. Sbroglia il nodo staccabile all'estremità distale del cuore per ripristinare il flusso sanguigno nella vena giugulare destra. Quindi utilizzare suture chirurgiche 4-0 per legare la sonda con la vena giugulare destra.

Posizionare il ratto sveglio in un serbatoio a movimento libero e collegare la sonda al sistema di microdialisi. Quindi irrigare la soluzione di destrosio citrato anticoagulante ad una velocità di due microlitri al minuto per un'ora per equilibrare la membrana di dialisi della sonda. Raccogliere campioni di sangue di microdialisi e conservarli temporaneamente in un contenitore frazionato di quattro gradi Celsius.

Per riconfermare che la sonda è nella vena giugulare destra, sezionare il ratto. Rimuovere la sonda di microdialisi dalla vena giugulare destra e metterla in acqua ultrapura. Collegare la sonda alla tubazione e risciacquare durante la notte con acqua ultrapura per lavare accuratamente il sale residuo nel tubo e nella sonda.

I campioni di sangue normali apparivano rosso vivo mentre potenziali coaguli di sangue sono stati osservati nei campioni ipossici. I campioni ottenuti attraverso la tecnica di microdialisi del sangue erano incolori, chiari e trasparenti. Per evitare la distruzione della membrana e la sonda di scivolamento o spostamento, dovremmo prestare attenzione quando stiamo posizionando e immergendo la sonda nella vena giugulare del ratto.

I campioni di sangue ottenuti attraverso la tecnica della microdialisi possono essere utilizzati per analizzare i biomarcatori di diverse malattie e la distribuzione del sangue di farmaci e metaboliti rari.