Name: Iniezione intracardiaca di cellule tumorali della prostata umane per creare un modello murino di xenotrapianto di metastasi ossee (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-11-04T14:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 32 s
Description: Scopri come creare un modello murino di metastasi ossee da cancro della prostata mediante iniezione intracardiaca di cellule PC3 marcate con luciferasi. Questo metodo consente di studiare i meccanismi molecolari e testare terapie in vivo.

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Questo lavoro è supportato da sovvenzioni del National Key R&D Program of China (2018YFC1704300 e 2020YFE0201600), della National Nature Science Foundation (81973877 e 82174408), dei progetti di ricerca all'interno del budget della Shanghai University of Traditional Chinese Medicine (2021LK047) e dello Shanghai Collaborative Innovation Center of Industrial Transformation of Hospital TCM Preparation.

Topi atimici maschi BALB/c di sei-otto settimane (n = 10) sono stati alloggiati in gabbie di topi ventilate individualmente (5 topi/gabbia) in una stanza per animali priva di agenti patogeni specifici (SPF) nelle condizioni di 12 ore di ciclo luce/buio, con libero accesso al mangime SPF e all'acqua sterile. I topi sono stati nutriti in modo adattivo per una settimana prima degli esperimenti. Tutti gli esperimenti sugli animali sono stati approvati dal comitato per il benessere degli animali dell'Università di Shanghai di medicina tradizionale cinese.
1. Preparazione delle cellule
<ol><li>Il giorno dell'iniezione di cellule tumorali della prostata, lavare due volte l'80% -90% di cellule PC-3 marcate con luciferasi confluente (PC-3-luciferasi) coltivate in un piatto di coltura cellulare da 10 cm con PBS sterile pre-freddo (pH 7,4). Tripsinizzare per 3 minuti con 1,5 ml di tripsina allo 0,25% e raccogliere le cellule in una provetta da centrifuga da 15 ml dopo aver spento la tripsina con 6 ml di terreno F-12 contenente il 10% di siero. NOTA: La linea cellulare PC-3-luciferasi è derivata dalla linea cellulare PC-3 dopo essere stata trasfettata con il vettore pLV-luciferasi15.</li>
	<li>Utilizzare un contatore automatico delle celle e calcolare la concentrazione della cella trasferendo 20 μL della sospensione cellulare alla piastra di conteggio delle celle (vedere Tabella dei materiali).</li>
	<li>Centrifugare le celle a 800 x g a temperatura ambiente (RT) per 5 min.</li>
	<li>Utilizzare una pipetta per eliminare il surnatante e risospendere il pellet cellulare nel mezzo F-12 (vedere Tabella dei materiali) fino a una densità cella finale di 1 x 107 cellule/ml.</li>
	<li>Tenere le cellule sempre ghiacciate fino all'iniezione.</li>
	<li>Portare le cellule nella sala operatoria e terminare l'iniezione cellulare entro 2 ore. NOTA: Preparare sospensioni cellulari aggiuntive (di solito volumi raddoppiati secondo necessità) per garantire dosi di iniezione accurate (ad esempio, per evitare gli spazi morti all'interno delle siringhe).</li>
</ol>2. Chirurgia per iniezione intracardiaca delle cellule tumorali della prostata umana
NOTA: L'apparato chirurgico utilizzato per l'iniezione intracardiaca è una siringa da 1 mL (Figura 1). Fornire supporto termico durante tutta la procedura fino al recupero dell'animale dall'anestesia.
<ol><li>Tieni il mouse nella stanza degli animali SPF. Eseguire tutte le procedure con apparecchi sterilizzati all'interno di un armadio asettico.</li>
	<li>Anestetizzare il topo usando isoflurano al 2% con ossigeno al 98% sotto una portata di ossigeno di 2 L/min. NOTA: Spalmare una piccola quantità di unguento oftalmico sugli occhi del topo per evitare secchezza durante l'anestesia. Eseguire l'intero intervento chirurgico in un'area ben ventilata. Assicurarsi che il topo sia profondamente anestetizzato pizzicando le dita dei piedi del topo prima dell'iniezione cellulare. Se le risposte (ad esempio, uno scatto o una contrazione) rimangono, attendere ulteriore tempo affinché l'anestesia abbia effetto.</li>
	<li>Posizionare il topo in posizione supone e immobilizzare entrambi gli arti superiori perpendicolarmente distesi lontano dalla linea mediana (Figura 2A).</li>
	<li>Immobilizzare il mouse dall'addome in giù con nastro adesivo chirurgico. Evitare di premere con forza e spostare gli organi interni (Figura 2B). NOTA: Mantenere l'anatomia topografica (cioè il fissaggio con nastro adesivo) è essenziale poiché l'iniezione intracardiaca è cieca (cioè, il sito di iniezione accurato sul cuore è invisibile ad occhio nudo).</li>
	<li>Disinfettare la pelle del torace con un tampone etanolo al 70%.</li>
	<li>Identificare il processo xifoideo del topo nella depressione all'estremità più bassa dello sterno medio palpando lungo il centro della parete toracica anteriore. Identificare la tacca giugulare del topo nella depressione centrale sul bordo superiore del manubrio palpando dal centro della parete toracica anteriore.</li>
	<li>Etichettare il punto più inferiore del processo xifoideo e la tacca giugulare con un pennarello (Figura 2A). Fai un terzo segno nel mezzo di questi due punti di riferimento e leggermente a destra (a sinistra dell'animale) appena sopra il cuore nel terzo spazio intercostale. NOTA: Il sito di iniezione si trova a sinistra di 1-2 mm rispetto alla linea mediana e il punto di iniezione si trova tra la terza e la quarta costola del topo (Figura 2A).</li>
	<li>Caricare 200 μL della sospensione cellulare in una siringa da 1 ml. NOTA: Tenere una bolla d'aria nella siringa, come mostrato nella Figura 2C, per assicurarsi che il sangue pulsi. La sospensione cellulare deve essere accuratamente miscelata prima del caricamento.</li>
	<li>Inserire verticalmente un ago da 26 G attraverso il sito di iniezione (Figura 2D).</li>
	<li>Tenere la mano che tiene la siringa stabile sul tavolo, o usare l'altra mano per tenerla stabile. Assicurarsi che l'asse lungo della siringa sia perpendicolare al sito di iniezione e inserire la siringa di circa 2 mm per via sottocutanea.</li>
	<li>La pulsazione del sangue rosso vivo è visibile nel mozzo dell'ago e/o nella sospensione cellulare quando la punta dell'ago viene inserita correttamente nel ventricolo sinistro. Se la pulsazione del sangue è invisibile, la punta dell'ago non è nel cuore. Ritrarre e sostituire l'ago (nel caso in cui la coagulazione del sangue all'interno dell'ago interrompa la pulsazione del sangue). Inserire nuovamente l'ago.</li>
	<li>Iniettare le cellule. Iniettare la sospensione cellulare (100 μL) molto lentamente nell'arco di 40-60 s e mantenere la mano che tiene la siringa stabile per tutto il tempo. NOTA: Tenere d'occhio la sospensione cellulare nella siringa e non iniettare la bolla d'aria all'interno della siringa nel cuore.</li>
	<li>Applicare pressione sul sito di iniezione con un batuffolo di cotone asciutto per 15 s per garantire l'emostasi quando l'ago è retratto.</li>
	<li>Riportare il mouse nella gabbia pulita e monitorare l'animale fino a quando non si riprende completamente dall'anestesia.</li>
	<li>Immagina il topo con un sistema di bioluminescenza in vivo entro 24 ore dall'iniezione per garantire che le cellule tumorali siano entrate nella circolazione sistemica. NOTA: Le cellule tumorali correttamente iniettate entrano nella circolazione arteriosa attraverso il ventricolo cardiaco sinistro, che è visibile dalla segnalazione di bioluminescenza visibile su tutto il corpo (ad esempio, vedere Figura 3A).</li>
	<li>Eseguire l'imaging a bioluminescenza in vivo.<ol><li>Accendere lo strumento e il computer. Aprire il software quando l'indicatore di alimentazione dello strumento e del computer si illumina, quindi aprire la finestra Acquisizione immagini .</li>
		<li>Identificare il sistema di imaging in vivo collegato al computer nel riquadro dei dispositivi. Posizionare il mouse da visualizzare nella camera di imaging in posizione supina. Quindi chiudere lo sportello della camera di imaging.</li>
		<li>Impostare i parametri nel riquadro Impostazioni fornito nella finestra Acquisizione immagini .<ol><li>Imposta i parametri con Lens > Zoom > 1x, Lens > Focus > 108 e Lens > Iris > F 2.8 per rendere chiare le immagini.</li>
			<li>Impostare il canale di ripresa in Filter&Light: Filter&Light > Filter > Luminescence, Filter&Light > Light > OFF e Filter&Light > Light Intensity > Middle.</li>
			<li>Impostare il tipo di immagine da scattare: Imaging > Type > Single-Frame, Imaging > Tempo di esposizione > 500 ms, Imaging > HDR Mode > Low GainMode. Fare clic sul pulsante Acquisisci per acquisire l'immagine.</li>
		</ol></li>
	</ol></li>
	<li>Visualizza la crescita metastatica del cancro con bioluminescenza in vivo . NOTA: In ogni punto temporale della visualizzazione, iniettare per via intraperitoneale 200 μL del substrato di luciferina in un topo da 20 g (150 mg/kg) e attendere 15 minuti prima dell'anestesia (isoflurano al 2% miscelato con ossigeno al 98% in una camera di induzione). Posizionare il mouse sulla piattaforma del sistema di imaging a bioluminescenza. Mantenere l'anestesia attraverso una maschera nasale con isoflurano al 2%.</li>
</ol>3. Indagine patologica
<ol><li>Quattro settimane dopo l'iniezione cellulare, sacrificare il topo per inalazione di CO2 e poi dislocazione cervicale.</li>
	<li>Immobilizzare il mouse in posizione supina. Fare un'incisione verticale (circa 6 cm) dall'addome al torace con forbici chirurgiche per esporre ed esaminare grossolanamente tutti gli organi dell'addome e del torace per lesioni cancerose e / o alterazioni patologiche. NOTA: Per uno studio di iniezione intra-cardiaca di cellule tumorali, le lesioni tumorali nel mediastino adiacente al cuore suggeriscono cellule tumorali iniettate in modo errato (cellule non iniettate nel ventricolo cardiaco sinistro); Pertanto, questi topi non sono inclusi nella raccolta dati finale.</li>
	<li>Eliminare i tumori metastatici con le forbici. Misurare i diametri lunghi (a) e i diametri corti (b) del tumore usando calibri per calcolare il volume del tumore (V) usando la formula V = 1/2 × a × b2 e pesare il tumore usando una bilancia elettronica.</li>
	<li>Fissare i tessuti tumorali in una soluzione di formalina al 10% seguita dall'incorporazione in paraffina. In alternativa, congelare i tumori in azoto liquido.</li>
	<li>Asportare le ossa (arti posteriori, vertebre e/o costole) con lesioni metastatiche. Fissare il campione di ciascun topo in una provetta da 50 mL contenente 20 ml di soluzione di formalina al 10% per 24 ore dopo aver rimosso la pelle e i muscoli, seguita da decalcificazione per 14 giorni in soluzione di EDTA al 10% con frequenti cambi di tampone (ogni 3 giorni).</li>
	<li>Incorporare il campione in paraffina e sezionare i campioni per l'esame istologico di routine16.</li>
</ol>

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Tutti gli autori non dichiarano interessi finanziari concorrenti.

L'iniezione intracardiaca di cellule tumorali della prostata umane per generare metastasi ossee è un modello murino ideale per esplorare le funzioni e i meccanismi delle metastasi ossee del cancro alla prostata e valutare l'efficacia terapeutica. Gli studi hanno dimostrato che il danno osseo si verifica molto probabilmente nella tibia prossimale e nel femore distale17, che può essere dovuto alla loro elevata vascolarizzazione e attività metabolica.
Poiché la metastasi o...

Il cancro alla prostata è il tumore più frequente negli uomini in 112 paesi e si colloca al secondo posto per mortalità nei paesi con un indice di sviluppo umano più elevato 1,2. La maggior parte dei decessi nei pazienti con cancro alla prostata sono causati da metastasi e circa il 65% -75% dei casi svilupperà metastasi ossee 3,4. Pertanto, la prevenzione e il trattamento delle metastasi ossee del cancro alla prostata sono urgentemente necessari per migliorare l'esito clinico dei pazienti con cancro alla prostata. Il modello animale di metastasi ossee è uno strumento indispensabile per esplorare il processo multistadio e i meccanismi molecolari coinvolti in ogni stadio delle metastasi ossee del cancro alla prostata, identificando così bersagli terapeutici e sviluppando nuove terapie5.
I metodi più comuni per generare modelli animali sperimentali di metastasi ossee del cancro alla prostata includono l'ortotopica, l'intra-diafisi (come l'iniezione intra-tibiale) e intra-cardiaca delle cellule tumorali della prostata. Il modello di metastasi ossea con iniezione ortotopica viene generato iniettando direttamente cellule tumorali della prostata nella prostata di un topo 6,7. Questo modello animale sperimentale ha caratteristiche cliniche molto simili alle metastasi ossee del cancro alla prostata. Tuttavia, le metastasi avvengono principalmente nel linfonodo ascellare e nel polmone piuttosto che nell'osso 8,9. Il modello di iniezione intratibiale per il cancro alla prostata inietta direttamente cellule tumorali della prostata nella tibia con un alto tasso di formazione tumorale nell'osso (tibia)10,11; Tuttavia, la corteccia ossea e la cavità del midollo osseo sono facilmente danneggiate. Inoltre, il metodo di iniezione tibiale non può stimolare il processo patologico delle metastasi ossee del cancro alla prostata in cui le cellule tumorali colonizzano l'osso attraverso la circolazione. Per studiare la circolazione, lo stravaso vascolare e le metastasi a distanza con un più alto tasso di metastasi ossee delle cellule tumorali, è stata sviluppata una tecnica di iniezione intracardiaca iniettando direttamente le cellule tumorali della prostata nel ventricolo sinistro del topo 8,12,13. Questo lo rende un valido modello animale per la ricerca sulle metastasi ossee8. Il metodo di iniezione intracardiaca mostra un tasso di metastasi ossee di circa il 75%9,14, molto più alto rispetto al metodo di iniezione ortotopica. Pertanto, l'iniezione intracardiaca è un metodo ideale per generare un modello animale con metastasi ossee del cancro alla prostata.
Questo lavoro mira a descrivere il processo di creazione di un modello murino di metastasi ossee del cancro alla prostata, consentendo ai lettori di visualizzare l'istituzione del modello. Il lavoro attuale fornisce processi dettagliati, precauzioni e immagini illustrative per generare un modello di xenotrapianto di metastasi ossee tramite iniezione intracardiaca di cellule tumorali della prostata umane in topi atimici. Questo metodo fornisce uno strumento efficace per esplorare ulteriormente i meccanismi molecolari e gli effetti terapeutici in vivo delle metastasi ossee del cancro alla prostata.

<table><tbody><tr><td>Siringhe e aghi da 1 ml</td><td>Shandong Weigao Group Medical Polymer Co., Ltd</td><td>20200411</td><td>Le cellule sono state iniettate nei ventricoli dei topi</td></tr><tr><td>Macchina per anestesia</td><td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td><td>R500IP</td><td>Attrezzatura per l'anestesia dei topi</td></tr><tr><td>Contatore cellulare automatico</td><td>Shanghai Simo Biological Technology Co., Ltd</td><td>IC1000</td><td>&nbsp; Per il conteggio delle cellule</td></tr><tr><td>BALB/c topi atimici</td><td>Shanghai SLAC Laboratory Animal Co, Ltd.</td><td>Maschio</td><td>di 6-8 settimane, topi maschi</td></tr><tr><td>Sistema di imaging a bioluminescenza</td><td>Shanghai Baitai Technology Co., Ltd</td><td>Vieworks</td><td>Per monitorare la crescita del tumore e le metastasi polmonari se le cellule iniettate sono etichettate con luciferasi</td></tr><tr><td>Provetta da centrifuga (15 mL, 50 mL)</td><td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td><td>&nbsp; 430790, soluzione EDTA Corning</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Wuhan Xavier Biotechnology Co., Ltd</td><td>G1105</td><td>&nbsp; Per la decalcificazione del tessuto osseo</td></tr><tr><td>F-12 medium</td><td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td><td>21700075, GIBCO</td><td>Terreno di coltura cellulare</td></tr><tr><td>Soluzione di formalina</td><td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td><td>BL539A</td><td>Per il fissaggio del campione di ciascun topo</td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td><td>VETEASY</td><td>Per anestesia&nbsp;</td></tr><tr><td>Lipofectamina 2000</td><td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td><td>11668027, Thermo fisher</td><td>Reagente di trasfezione plasmidico</td></tr><tr><td>Linea cellulare PC-3</td><td>Banca cellulare dell'Accademia cinese delle scienze</td><td>TCHu 158</td><td>Linea cellulare per cancro alla prostata</td></tr><tr><td>Soluzione salina tamponata con fosfato</td><td>Beyotime Biotechnology</td><td>ST447</td><td>Lavare le cellule dell'osteosarcoma umano</td></tr><tr><td>Tripsina (0,25%)</td> <td>Shanghai YueNian Biotechnology Co. , Ltd</td><td>25200056, Gibco</td><td>Per il distacco delle cellule</td></tr><tr><td>Vettore (pLV-luciferasi)</td><td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td><td>VL3613</td><td>Plasmide per il</td></tr><tr><td>sistema di imaging a raggi X</td> di trasfezione <td>Brook (Beijing) Technology Co., Ltd</td><td>FX PRO</td><td>Per ottenere immagini a raggi X per rilevare la crescita del tumore</td></tr><tr><td>&mu; CT80</td><td>Shenzhen Fraun Technology Service Co., Ltd</td><td>Scanco Medical AG, Svizzera</td><td>Per il rilevamento della distruzione ossea. Il mico-CT è dotato di 3DCalc, ricostruzione del cono,&nbsp; e &mu; Software di visualizzazione del modello CT Ray V3.4A.</td></tr></tbody></table>

iniezione intracardiaca di cellule tumorali della prostata umane per creare un modello murino di xenotrapianto di metastasi ossee

Intra-Cardiac Injection of Human Prostate Cancer Cells to Create a Bone Metastasis Xenograft Mouse Model

Come la neoplasia maschile più comune, il cancro alla prostata (PC) è al secondo posto nella mortalità, principalmente a causa di un tasso di metastasi ossee del 65% -75%. Pertanto, è essenziale comprendere il processo e i relativi meccanismi delle metastasi ossee del cancro alla prostata per lo sviluppo di nuove terapie. Per questo, un modello animale di metastasi ossee è uno strumento essenziale. Qui, riportiamo procedure dettagliate per generare un modello murino di metastasi ossee tramite iniezione intracardiaca di cellule tumorali della prostata. Un sistema di imaging a bioluminescenza può determinare se le cellule tumorali della prostata sono state accuratamente iniettate nel cuore e monitorare le metastasi delle cellule tumorali poiché ha grandi vantaggi nel monitoraggio dello sviluppo della lesione metastatica. Questo modello replica lo sviluppo naturale delle cellule tumorali disseminate per formare micro-metastasi nell'osso e imita il processo patologico delle metastasi ossee del cancro alla prostata. Fornisce uno strumento efficace per ulteriori esplorazioni dei meccanismi molecolari e degli effetti terapeutici in vivo di questa malattia.

L'imaging a bioluminescenza offre enormi vantaggi nel monitoraggio dello sviluppo della lesione metastatica per un modello di iniezione intracardiaca. Subito dopo l'iniezione di cellule tumorali (entro 24 ore), è stata utilizzata la bioluminescenza per visualizzare le cellule tumorali che entrano nella circolazione generale (Figura 3A). L'evidente segnalazione di bioluminescenza su tutto il corpo sarà visibile quando le cellule tumorali vengono iniettate correttamente nella circolazione arte...

Qui, presentiamo un protocollo per l'iniezione intra-cardiaca di cellule tumorali della prostata umane per generare un modello murino con lesioni da metastasi ossee.

Iniezione intracardiaca di cellule tumorali della prostata umane per creare un modello murino di xenotrapianto di metastasi ossee

As the most common male malignancy, prostate cancer (PC) ranks second in mortality, primarily due to a 65%-75% bone metastasis rate. Therefore, it is ...

Questo metodo può aiutare a produrre un modello ideale che imita da vicino il naturale progresso delle metastasi ossee delle cellule tumorali della prostata in vivo. Questa tecnica ha il vantaggio di una metastasi ossea e rappresenta il processo naturale di metastasi ossea delle cellule tumorali della prostata in vivo. Questa tecnica favorisce l'esplorazione dei meccanismi molecolari e lo studio degli effetti terapeutici in vivo per le metastasi ossee del cancro alla prostata.Il giorno dell'iniezione, prendere dall'80 al 90% di cellule PC3 confluenti marcate con luciferasi coltivate in un piatto di coltura cellulare di 10 centimetri e iniziare a preparare le cellule per l'iniezione lavandole due volte con PBS sterile a freddo. Tripsinizzare le cellule lavate con 1,5 millilitri di tripsina allo 0,25% per tre minuti, dopodiché spegnere la tripsina aggiungendo sei millilitri di mezzo F12 contenente il 10% di siero e raccogliere le cellule in una provetta da centrifuga da 15 millilitri. Trasferire 20 microlitri della sospensione cellulare raccolta in una piastra di conteggio delle celle e calcolare la concentrazione cellulare utilizzando un contatore automatico delle celle.Quindi, centrifugare le celle a temperatura ambiente per cinque minuti a 800 G.Scartare il surnatante usando una pipetta e risospendere il pellet di cella in mezzo F12 per ottenere la densità finale desiderata. Ora porta le cellule nella sala operatoria ed esegui l'iniezione cellulare entro due ore. Tenere le cellule sul ghiaccio fino all'iniezione.Per iniziare l'intervento chirurgico, posizionare il topo anestetizzato in posizione supina e immobilizzare entrambi gli arti superiori allungandoli perpendicolarmente lontano dalla linea mediana. Utilizzando del nastro adesivo chirurgico, immobilizzare il mouse dall'addome in giù senza premere forte e spostare gli organi interni. Disinfettare la pelle del torace utilizzando un tampone etanolo al 70%.Quindi, palpare lungo il centro della parete toracica anteriore per individuare il processo xifoideo del topo nella depressione all'estremità inferiore dello sterno medio. Etichettare il punto più inferiore del processo xifoideo. Quindi, palpando dal centro della parete toracica anteriore, individuare la tacca giugulare del topo nella depressione centrale sul bordo superiore del manubrio e segnare il punto più inferiore della tacca giugulare.Ora individua e segna il punto medio tra i due segni precedenti, leggermente verso destra e appena sopra il cuore nel terzo spazio intercostale. Questo è il punto di iniezione. Mescolare accuratamente la sospensione cellulare prima di caricare 200 microlitri della sospensione in una siringa da un millilitro montata con un ago da 26 gauge.Lasciare un po' d'aria nella siringa tra lo stantuffo e la sospensione per consentire l'ingresso di sangue pulsante durante l'iniezione. Per eseguire l'iniezione, inserire verticalmente l'ago attraverso il sito di iniezione. Se la punta dell'ago è inserita correttamente nel ventricolo sinistro, il sangue pulsante rosso vivo sarà visibile nel mozzo dell'ago.Riprovare a iniettare se la pulsazione del sangue non è visibile o il sangue è coagulante. Una volta inserito correttamente l'ago, iniettare 100 microlitri di sospensione cellulare molto lentamente nell'arco di 40-60 secondi con una mano stabile. Dopo il completamento dell'iniezione, ritrarre l'ago applicando pressione sul sito di iniezione con un batuffolo di cotone asciutto per 15 secondi per garantire l'emostasi.Riportare il mouse nella gabbia pulita e monitorare l'animale fino a quando non si riprende completamente dall'anestesia. L'imaging a bioluminescenza eseguito 24 ore dopo l'iniezione di cellule PC3 marcate con luciferasi nel topo ha mostrato segnali provenienti da tutto il corpo dell'animale che indicano la presenza di cellule tumorali nella circolazione sistemica. Le lesioni metastatiche sono apparse negli arti posteriori del topo due settimane dopo l'iniezione.Le lesioni metastatiche sono diventate più grandi con il passare del tempo e hanno iniziato a comparire in altri siti. Le lesioni metastatiche indotte dalle cellule del cancro alla prostata nelle ossa sono state ulteriormente rilevate utilizzando l'imaging a raggi X che ha mostrato la distruzione ossea nella tibia prossimale dell'animale. Lo stesso è stato confermato anche dalla scansione micro CT.Le lesioni metastatiche sono state ulteriormente confermate nei tessuti incorporati in paraffina dalla colorazione con ematina ed eosina. Un sito di iniezione accurato è molto importante per garantire il tasso di successo di questo modello. Questo può essere ottenuto con la pratica.

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I modelli animali sono spesso utilizzati per studiare metastasi alle ossa. In questo protocollo si descrivono due metodi comuni di inoculo del tumore per gli studi di metastasi ossee e descrivere brevemente alcune delle analisi utilizzati per monitorare e quantificare questi modelli.

Modelli di metastasi ossee

Il video dimostra la tecnica di inoculazione ortotopica del cancro al seno in un modello murino. Questa tecnica produce un alto tasso di tumorigenesi con una minore variabilità nelle dimensioni e nella forma del tumore rispetto all'iniezione sottocutanea o non chirurgica.

Iniezione ortotopica: impianto di cellule tumorali tessuto-specifiche in un topo adulto

In questo video, dimostriamo la procedura per la somministrazione di iniezione intra-prostatica di cellule tumorali della prostata in un modello murino. I modelli murini ortotopici possono essere utilizzati per studiare l'origine della malattia e la risposta alle terapie terapeutiche in un ambiente non invasivo e clinicamente rilevante.

Iniezione intraprostatica di cellule tumorali: una tecnica per fornire cellule tumorali per stabilire un modello murino di cancro alla prostata ortotopico

Questo modello ortotopico di carcinoma della prostata umana consente per la quantificazione della dimensione del tumore, cellule tumorali circolanti, e la formazione di metastasi distinto al polmone. Come le cellule devono sfuggire l'organo primario, immettere il flusso sanguigno, e impiantare in un sito secondario, questo modello riassume efficacemente lo scenario in esseri umani.

Un ortotopico Modello murino di Human Prostate Cancer Metastasi

La tecnica istituita per inoculare ortotopici xenotrapianti carcinoma vescicale invasivo primarie richiede laparotomia e la mobilitazione della vescica. Questa procedura infligge significativa morbilità sui topi, è tecnicamente difficile e richiede molto tempo. Abbiamo quindi sviluppato una alta precisione, approccio percutaneo utilizzando guida ecografica.

Mini-Invasiva Istituzione di murini ortotopico vescica Xenotrapianti

Il cancro è una malattia complessa che è influenzata dal tessuto circostante il tumore nonché pro- locale e anti-infiammatori mediatori. Pertanto, modelli iniezione ortotropici, anziché modelli sottocutanee possono essere utili per studiare la progressione del cancro in un modo che imita migliori patologia umana.

Iniezione ortotopico di cellule di carcinoma mammario nel mammaria Fat Pad di Mice per studiare la crescita del tumore.

Questo manoscritto descrive in dettaglio un metodo utilizzato per generare xenotrapianti derivati da pazienti affetti da cancro alla prostata (PDX) da cellule tumorali circolanti (CTC). La generazione di modelli PDX da CTC fornisce un modello sperimentale alternativo per studiare il cancro alla prostata; il tumore più comunemente diagnosticato e una frequente causa di morte per cancro negli uomini.

Generazione di cancro alla prostata del paziente Derivato modelli di xenotrapianto di cellule tumorali circolanti

Il cancro alla prostata è la seconda causa più comune di decessi correlati al cancro negli Stati Uniti. Un modello di cancro ortotopico fornisce un approccio utile per comprendere la biologia del cancro alla prostata e per valutare l'efficacia dei regimi terapeutici. Questo protocollo descrive in dettaglio i passaggi necessari per stabilire un modello murino di cancro alla prostata ortotopico.

Pre-clinica ortotopico Modello murino di Human cancro alla prostata

L'obiettivo del presente protocollo è quello di dimostrare l'iniezione intra-prostatica delle cellule di carcinoma della prostata, con conseguente castrazione. Orthotopic modelli pre-clinici di carcinoma della prostata androgeno-dipendente e castrazione-resistente sono fondamentali per studiare la malattia nel contesto di un microambiente tumorale clinicamente rilevanti e un ospite immunocompetente.

Un modello murino Syngeneic Orthotopic bioluminescenti e fluorescente di carcinoma della prostata androgeno-dipendente e castrazione-resistente

I modelli PDX di metastasi del sistema nervoso centrale rappresentano le caratteristiche fenotipiche e molecolari delle metastasi umane, rendendoli modelli eccellenti per studi preclinici. Qui viene descritto come stabilire i modelli PDX e le vie di inoculazione meglio utilizzate per gli studi preclinici.

L'istituzione e l'utilizzo di modelli di xenotrapianto derivati dal paziente di metastasi del sistema nervoso centrale

Il presente protocollo descrive l'iniezione di cellule di osteosarcoma intratibia per generare modelli murini portatori di osteosarcoma ortotopico e lesioni da metastasi polmonari.

Iniezione di cellule di osteosarcoma intratibiale per generare modelli murini di osteosarcoma ortotopico e metastasi polmonari

Scopri come creare un modello murino di metastasi ossee da cancro della prostata mediante iniezione intracardiaca di cellule PC3 marcate con luciferasi. Questo metodo consente di studiare i meccanismi molecolari e testare terapie in vivo.

Iniezione intracardiaca di cellule tumorali della prostata umane per creare un modello murino di xenotrapianto di metastasi ossee (Video) | JoVE Journal

Iniezione intracardiaca di cellule tumorali della prostata umane per creare un modello murino di xenotrapianto di metastasi ossee

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