Generazione e imaging di organoidi epiteliali di topo e umani da tessuto mammario normale e tumorale senza passaggio

Questo protocollo è significativo per la produzione di organoidi epiteliali di memoria che vengono generati senza passaggio. Il principale vantaggio di questa tecnica è che gli organoidi possono essere isolati dal seno umano e di topo e dal tessuto di memoria dopo la digestione enzimatica. Eseguiamo una serie di fasi di centrifugazione differenziale che isolano gli organoidi epiteliali senza dover far passare le cellule.

Un individuo che esegue questa tecnica può affrontare sfide quando incorpora i tessuti nel collagene o nella matrice e li placca all'interno di una piastra a 96 pozzetti. Inoltre, l'uso di collagene correttamente polimerizzato e cupole stabili di placcatura è la chiave per vedere l'invasione. Per iniziare, raccogli il tessuto mammario di un topo eutanasia allargando gli arti del topo e usando quattro aghi calibro 19, blocca il topo per le zampe su una tavola coperta da un cuscinetto assorbente con il lato ventrale rivolto verso l'alto.