Name: Impianto e valutazione del melanoma nella coroide murina mediante tomografia a coerenza ottica (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-12-02T14:10:00.000+00:00
Duration: 5 min 46 s
Description: Impara a impiantare e valutare il melanoma coroideo murino mediante tomografia a coerenza ottica. Questo metodo consente l'imaging in vivo della crescita tumorale per studi oncologici avanzati.

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Questo studio è stato sostenuto in parte dalla sovvenzione 1304/20 della Israel Science Foundation (ISF), Israele, per Arie Marcovich. Ringraziamo Shahar Ish-Shalom e Ady Yosipovich, del Dipartimento di Patologia, Kaplan Medical Center, Rehovot, Israele, per l'analisi istologica.

Gli esperimenti nel protocollo sono stati approvati dal Consiglio nazionale israeliano sulla sperimentazione animale e sono conformi alla dichiarazione ARVO per l'utilizzo di animali nella ricerca oftalmica e visiva. Topi femmina C57BL/6, di età compresa tra 8-10 settimane, sono stati utilizzati per il presente studio e sono stati esposti a cicli luce-buio di 12/12 ore. Gli animali sono stati ottenuti da una fonte commerciale (vedi Tabella dei materiali).
1. Coltura cellulare
<ol><li>Coltura di cellule B16LS9 in terreno RPMI 1640, integrate con siero bovino fetale al 10%, 2 mM di L-glutammina, 1 mM di piruvato di sodio, 25 mM HEPES, miscela vitaminica essenziale all'1%, 200 U / mL di penicillina e 200 mg / ml di streptomicina (vedi tabella dei materiali), in un incubatore umidificato a 37 °C con il 5% di CO2.</li>
	<li>Raccogliere le cellule per iniezione al 70% -80% di confluenza.</li>
</ol>2. Preparazione degli animali
<ol><li>Preparare una miscela anestetica di ketamina (75 mg/kg di peso corporeo) e medetomidina (0,5 mg/kg di peso corporeo). Anestetizzare i topi iniettando la miscela anestetica per via intraperitoneale in una singola iniezione.</li>
	<li>Applicare l'anestetico oftalmico topico ossibuprocaina (0,4%) su entrambi gli occhi.</li>
	<li>Dilatare le pupille del topo applicando topicamente tropicamide (0,5%).</li>
</ol>3. Creazione di una peritomia congiuntivale e di un tratto sclerale nello spazio sub-coroideale
<ol><li>Applicare idrossietilcellulosa all'1,4% (vedere la tabella dei materiali) come lubrificante su entrambi gli occhi per evitare l'essiccazione. Applicare lo 0,5% di tropicamide sull'occhio destro.</li>
	<li>Osservare l'occhio operato del topo al microscopio operatorio (vedere Tabella dei materiali). Tenere le palpebre aperte con una pinza intraoculare sterile.</li>
	<li>Usando una pinza intraoculare, tenere la congiuntiva limbare supero-temporale e tirare verso una posizione infranasale22. Assicuratevi questa posizione mantenendola per tutta la durata della procedura (Figura 1A).</li>
	<li>Utilizzando una punta dell'ago da 30 G, eseguire una piccola peritomia congiuntivale (1-2 mm) nell'area dorsale-temporale, circa 1-2 mm posteriormente al limbus. NOTA: L'uso di aghi più sottili può prevenire una puntura eccessiva e consentire una migliore precisione della posizione del tumore.</li>
	<li>Rimuovere la capsula di Tenon in eccesso dall'apertura della peritomia. NOTA: La capsula di Tenon è uno strato di tessuto connettivo denso che circonda il globo dell'occhio22.</li>
	<li>In questa posizione, inserire la punta dell'ago per penetrare attraverso la sclera. Fare un'escissione per creare un tratto nello spazio sub-coroideale fino a quando il colore marrone della coroide appare attraverso la sostanza bianca esposta della sclera (Figura 1B).</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64632/64632fig01.jpg"> Figura 1: Inoculazione delle cellule tumorali . (A) La congiuntiva limbare supero-temporale viene tenuta usando una pinza intraoculare e tirata verso una posizione infranasale. (B) La punta di un ago da 30 G viene inserita per penetrare attraverso la sclera e l'escissione viene effettuata per creare una traccia nello spazio sub-coroideale. (C) Una siringa caricata con cellule e montata con un ago da 32 G viene inserita nel binario e le cellule vengono iniettate. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64632/64632fig01large.jpg" target="_blank">Fare clic qui per visualizzare una versione ingrandita di questa figura.</a>
4. Inoculazione di cellule di melanoma
<ol><li>Risospendere 70.000 cellule B16LS9 in 2 μL di PBS. Questa quantità è stimata per occhio.</li>
	<li>Caricare le celle in una siringa Hamilton sterile in vetro da 10 μL (vedere la tabella dei materiali) montata con un ago smussato da 32 G attorcigliato con un angolo di 45°.</li>
	<li>Inserire l'ago della siringa caricato di circa 2 mm nella traccia creata al punto 3.</li>
	<li>Iniettare 2 μL di sospensione cellulare.</li>
	<li>Tenere l'ago in posizione dopo l'iniezione per 2-3 s fino a quando tutto il liquido non si è eliminato.</li>
	<li>Rimuovere l'ago estraendolo delicatamente e lentamente per evitare perdite dal binario (Figura 1C). NOTE: La regolazione della velocità e della forza di iniezione può influenzare il modello di sviluppo del tumore. Si suggerisce che questi parametri siano calibrati da individui che sperimentano per identificare la giusta forza e velocità applicata. Un totale di 70.000 cellule è stato determinato in esperimenti preliminari. Tuttavia, poiché possono verificarsi variazioni nei tipi o nei lotti di colture cellulari o tra ceppi murini, è necessaria la calibrazione di questo numero.</li>
</ol>5. Valutazione della posizione dell'iniezione
<ol><li>Osservare l'occhio iniettato mediante scansioni OCT immediatamente dopo l'inoculazione delle cellule di melanoma per identificare la comparsa di distacco di retina (RD), danno retinico e / o cellule al vitreo23. NOTE: Riapplicare tropicamide, ossibuprocaina ed etilcellulosa secondo necessità.</li>
	<li>Sulla base delle scansioni OCT del passaggio 5.1, classificare i modelli RD21 in base a: (1) sito RD-one locale di RD; (2) fuoriuscita nel materiale cellulare vitreo di osservazione nel vitreo; (3) siti RD-multipli estesi di RD.</li>
	<li>Prevedere la localizzazione del tumore in base a: (1) tumori coroideali locali RD-attesi; (2) fuoriuscita nei tumori vitreali-attesi nel vitreo; (3) tumori variabili e dispersi estesi attesi da RD (Figura 2). NOTA: Solo i topi con RD locale (circa il 50%) dovrebbero sviluppare tumori limitati alla coroide.</li>
</ol>6. Prevedere le dimensioni del tumore in base all'altezza RD
<ol><li>Misurare l'altezza della RD locale nelle scansioni OCT utilizzando un software di segmentazione/analisi OCT (vedi Tabella dei materiali) e classificare secondo i seguenti gruppi: piccolo = &lt;300 μm; medio = 300-400 μm; grande = &gt;400 μm.</li>
	<li>Valutare il volume che i tumori dovrebbero raggiungere entro 5 giorni dall'iniezione secondo i seguenti criteri: Una piccola altezza RD è tipicamente osservata nei tumori di piccole dimensioni (volume tumorale compreso tra 0,0059 mm 3 e 0,07 mm 3 con un volume medio di 0,027 ± 0,005 mm3). Un'altezza RD media si trova sia nei tumori di piccole che di medie dimensioni (volume tumorale compreso tra 0,015 mm 3 e 0,15 mm 3 con un volume medio di 0,056 ± 0,016 mm3). Una grande altezza RD è associata a una vasta gamma di volumi tumorali fino a 0,36 mm3. NOTA: La gamma di dimensioni tumorali attese è stata ottenuta dai risultati precedenti e divisa in tre gruppi di tumori piccoli, medi e grandi.</li>
</ol>7. Procedure postoperatorie
<ol><li>Applicare ofloxacina oftalmica 0,3% topicamente.</li>
	<li>Invertire l'anestesia iniettando atipamezolo cloridrato (3 mg/kg) per via sottocutanea.</li>
	<li>Iniettare per via sottocutanea buprenorfina (0,05 mg/kg di peso corporeo) due volte al giorno per 3 giorni per ridurre il dolore e la sofferenza degli animali.</li>
	<li>A 5 giorni dopo l'iniezione di cellule di melanoma, valutare le dimensioni del tumore seguendo i passaggi seguenti.<ol><li>Anestetizzare i topi come descritto al punto 2.1. Applicare tropicamide (0,5%).</li>
		<li>Esaminare gli occhi mediante scansioni OCT longitudinali e sagittali e utilizzare il software di segmentazione/analisi OCT per misurare il volume e la localizzazione del tumore.</li>
		<li>Calcola il volume del tumore usando la formula24: V = a * b * c * 6 / π (a, b e c = lunghezza, larghezza e altezza, rispettivamente).</li>
		<li>Esaminare le dimensioni del tumore ogni 2-3 giorni come descritto nei passaggi 7.4.1-7.4.3. NOTA: la procedura deve essere ottimizzata se si utilizzano diversi ceppi di topo o linee cellulari.</li>
	</ol></li>
</ol>

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Marcovich A.L.: Steba Biotech (P), Yeda Weizmann (P), EyeYon Medical (C, P), Mor Isum (P). (c) = consulente; (P) = Brevetto. Tutti gli altri autori non hanno interessi concorrenti.

Il melanoma uveale è una malattia devastante per la quale sono estremamente necessari nuovi approcci terapeutici. Tuttavia, la ricerca sul melanoma uveale e sui potenziali trattamenti è limitata dalle sfide tecniche dei modelli animali di melanoma uveale 1,25. I tumori oculari, che sono indotti dall'iniezione intraoculare di cellule tumorali, sono altamente variabili sia nella localizzazione che nelle dimensioni, probabilmente a causa delle piccole dimensioni del...

Il melanoma uveale (UM) è la neoplasia primaria intraoculare più frequente negli adulti. Circa il 90% dei melanomi oculari proviene da melanociti nella regione coroidea del tratto uveale1. La UM è una delle principali cause di morbilità e mortalità, poiché si stima che quasi il 50% dei pazienti sviluppi la malattia metastatica, con il fegato che è il sito principale delle metastasi2. Il trattamento precoce delle lesioni primarie può ridurre la possibilità di metastasi, ma nessun trattamento efficace previene la formazione di metastasi3.
Il trattamento standard del melanoma uveale comprende la terapia con irradiazione, che è associata alla perdita della vista a causa di neuropatia ottica, retinopatia, sindrome dell'occhio secco e cataratta. La resezione chirurgica è tipicamente ritardata fino a quando la crescita della lesione è riconosciuta e caratterizzata. Tuttavia, tale ritardo può consentire lo sviluppo di malattia metastatica4. In alcuni casi, è necessaria un'enucleazione futile. Naturalmente, questa procedura radicale compromette la visione e provoca un drammatico deterioramento estetico.
Ci sono stati molti sforzi dedicati allo sviluppo di modelli sperimentali per studiare il melanoma uveale. I modelli animali preclinici che consentono una valutazione accurata di questa neoplasia sono fondamentali per studiare nuove strategie diagnostiche e terapeutiche per il melanoma uveale. I modelli animali sperimentali di melanoma oculare si basano principalmente sull'inoculazione di cellule tumorali in topi, ratti e conigli 5,6. I modelli murini sono economici e ampiamente utilizzati per gli studi sul melanoma a causa del loro rapido tasso di riproduzione e dell'elevata somiglianza del genoma con gli esseri umani. La linea cellulare di melanoma cutaneo murino B16 è comunemente utilizzata per inoculare topi C57BL6 e indurre tumori singeneici. Quando si utilizza questo modello per indurre il melanoma uveale, gli occhi portatori di tumore in genere devono essere enucleati 7-14 giorni dopo l'inoculazione. Inoltre, B16 è un modello altamente invasivo. La natura immuno-privilegiata dell'occhio supporta le metastasi e le metastasi possono essere rilevate in genere 3-4 settimane dopo l'inoculazione delle cellule tumorali. Le sottoculture della linea B16 originale mostrano proprietà metastatiche distinte6. Ad esempio, la linea di melanoma Queens ha un alto tasso metastatico 7,8. La linea cellulare B16LS9 ha morfologia cellulare dendritica ed è stata derivata da metastasi epatiche di topi C57BL/6 iniettati con la linea di melanoma cutaneo parentale B16F19. Quando iniettate nel compartimento posteriore dell'occhio, queste cellule hanno dimostrato di formare tumori intraoculari, che istologicamente assomigliano al melanoma uveale umano e formano metastasi specifiche del fegato in C57BL / 6, ma non Balb / C, topi10,11,12. Geneticamente, le cellule sono caratterizzate da una maggiore espressione del proto-oncogene c-met, che agisce come recettore cellulare per il fattore di crescita degli epatociti13. Al contrario, B16F10, il decimopassaggio del B16 parentale, metastatizza principalmente ai polmoni quando inoculato per via intraoculare14. Sia B16F10 che B16LS9 sono pigmentati12.
Diverse sfide chiave limitano il successo dei modelli di melanoma uveale murino. In primo luogo, il reflusso delle cellule tumorali può portare al melanoma extraoculare o subcongiuntivale. In secondo luogo, la crescita tumorale dopo l'inoculazione intraoculare delle cellule di melanoma è spesso molto variabile, ponendo difficoltà nella valutazione del trattamento e dei progressi. Un'altra grande difficoltà è la limitata capacità di seguire la crescita tumorale in vivo. Mentre l'imaging bioluminescente, come i tumori che esprimono luciferasi, è comunemente usato per monitorare la crescita del tumore oculare15,16, non può fornire informazioni sulla posizione intraoculare del tumore. Pertanto, la valutazione del tumore viene tipicamente eseguita dopo l'enucleazione dell'occhio10,17. Ciò limita notevolmente la capacità di caratterizzare ampiamente la progressione del tumore e la risposta ai trattamenti. Un altro ostacolo importante nello studio del melanoma uveale è la difficoltà nel monitorare le lesioni nei topi pigmentati. Sono necessari nuovi approcci, che superino queste difficoltà, per promuovere la ricerca del melanoma uveale in modelli animali.
La tomografia a coerenza ottica (OCT) fornisce capacità distintive per l'immagine in profondità nelle diverse sezioni dell'occhio in alta risoluzione, che non ha eguali con altre metodologie, tra cui l'ecografia18,19. L'imaging OCT è stato utilizzato in modelli animali per studiare varie malattie oculari20. Recentemente, l'imaging OCT è stato dimostrato come mezzo non invasivo per valutare la crescita tumorale intraoculare21. Il protocollo qui descritto descrive l'impianto di cellule di melanoma nella coroide murina e l'utilizzo di OCT per prevedere la localizzazione e le dimensioni del tumore intraoculare al momento dell'inoculazione cellulare.

<table><tbody><tr><td>10 &mu; L siringa di vetro (Hamilton Co., Bonaduz, Svizzera)</td><td>Hamilton</td><td>721711</td><td></td></tr><tr><td>aghi da 30 G</td><td>BD Microbalance</td><td>2025-01</td><td></td></tr><tr><td>Atipamezole cloridrato</td><td>Orion Phrma</td><td></td><td></td></tr><tr><td>B16LS9 cellule</td><td>da Hans Grossniklaus USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Buprenorfina&nbsp;</td><td>richter pharma</td><td>102047</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6 topi femmina</td><td>Envigo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Miscela vitaminica essenziale</td><td>satorius</td><td>01-025-1A</td><td></td></tr><tr><td>Renio fetale bovino sierico</td><td></td><td>10270106</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>satorius</td><td>03-025-1B</td><td></td></tr><tr><td>Idrossietilcellulosa 1,4% collirio</td><td>Fisher Pharmaceutical</td><td>390862</td><td></td></tr><tr><td>Software di segmentazione OCT InSight&nbsp;</td><td>Phoenix Micron, Inc&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ketamina</td><td>bremer pharma GMBH (medimarket)</td><td>17889</td><td></td></tr><tr><td>L-glutammina</td><td>satorius</td><td>03-020-1B</td><td></td></tr><tr><td>Medetomidina&nbsp;</td><td>zoetis (vetmarket)</td><td>102532</td><td></td></tr><tr><td>Ofloxacina 0,3% collirio</td><td>allergan</td><td>E92170</td><td></td></tr><tr><td>Tomografia a coerenza ottica&nbsp;</td><td>Phoenix Micron, Inc&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ossibuprocaina 0,4%</td><td>Fisher Pharmaceutical</td><td>393050</td><td></td></tr><tr><td>Penicillina-streptomicina-amfoteracina</td><td>satorius</td><td>03-033-1B</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina tamponata con fosfato (PBS)&nbsp;</td><td>satorius</td><td>02-023-1A</td><td></td></tr><tr><td>Terreni cellulari RPMI</td><td>satorius</td><td>01-104-1A</td><td></td></tr><tr><td>Piruvato di sodio</td><td>satorius</td><td>03-042-1B</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio</td><td>operatorio Zeiss</td><td>OPMI-6 CFC</td><td></td></tr><tr><td>Tropicamide 0,5%</td><td>Fisher Pharmaceutical</td><td>390723</td><td></td></tr></tbody></table>

impianto e valutazione del melanoma nella coroide murina mediante tomografia a coerenza ottica

Implantation and Evaluation of Melanoma in the Murine Choroid via Optical Coherence Tomography

Stabilire modelli sperimentali di melanoma coroideale è impegnativo in termini di capacità di indurre tumori alla corretta localizzazione. Inoltre, le difficoltà nell'osservazione del melanoma coroideale posteriore in vivo limitano la localizzazione del tumore e la valutazione della crescita in tempo reale. L'approccio qui descritto ottimizza le tecniche per stabilire il melanoma coroideale nei topi attraverso una procedura di iniezione di cellule sub-coroideali B16LS9 in più fasi. Per consentire la precisione nell'iniezione nelle piccole dimensioni dell'uvea del topo, la procedura completa viene eseguita al microscopio. In primo luogo, si forma una peritomia congiuntivale nell'area dorsale-temporale dell'occhio. Quindi, viene creato un tratto nello spazio sub-coroideale inserendo un ago attraverso la sclera esposta. Questo è seguito dall'inserimento di un ago smussato nel tratto e l'iniezione di cellule di melanoma nella coroide. Immediatamente dopo l'iniezione, viene utilizzata la tomografia a coerenza ottica non invasiva (OCT) per determinare la posizione e il progresso del tumore. Il distacco di retina viene valutato come predittore del sito e delle dimensioni del tumore. Il metodo presentato consente l'induzione riproducibile del melanoma localizzato dalla coroide nei topi e l'imaging dal vivo della valutazione della crescita tumorale. Come tale, fornisce uno strumento prezioso per lo studio dei tumori intraoculari.

Gli occhi sono stati esaminati tramite OCT immediatamente dopo l'iniezione delle cellule B16LS9. Dopo l'iniezione è stato osservato distacco locale della retina. I topi hanno mostrato tre modelli di RD: focale (Figura 2, pannello superiore), perdita al vitreo (Figura 2, pannello centrale) e RD esteso (Figura 2, pannello inferiore). La RD estesa è probabilmente causata da danni causati dall'iniezione. C'era un'associazione t...

Il presente protocollo descrive l'impianto e la valutazione del melanoma nella coroide murina utilizzando la tomografia a coerenza ottica.

Impianto e valutazione del melanoma nella coroide murina mediante tomografia a coerenza ottica

Establishing experimental choroidal melanoma models is challenging in terms of the ability to induce tumors at the correct localization. In addition, ...

Stabilire tumori come parte posteriore dell'occhio è impegnativo. Questo metodo consente l'induzione di tumori riproducibili del melanoma coroideale nei topi e l'imaging dal vivo della crescita tumorale per la valutazione. Questo protocollo utilizza l'imaging live OCT per valutare la posizione dei tumori già al momento dell'inoculazione delle cellule tumorali e per seguire la crescita del tumore negli animali vivi.Il melanoma uveale è una malattia devastante con un tasso vicino al 50% di metastasi. Lo sviluppo di modelli sperimentali è la chiave per far progredire la ricerca finalizzata a nuove possibilità terapeutiche. Un vantaggio di questo metodo è che la valutazione immediata del successo dell'iniezione consente di raggiungere gruppi di studio con tumori omogenei e seguirli continuamente tramite imaging dal vivo.Per esaminare la progressione del tumore. L'iniezione negli occhi del piccolo topo richiede pratica. La capacità di visualizzare le cellule iniettate consente di valutare immediatamente il successo e ripetere con più topi, se necessario.A dimostrare la procedura sarà il Dr.Dimitri Gaber del Laboratorio di Ricerca Oftalmologica presso il Kaplan Medical Center. Per iniziare, applicare 0,4% anestetico oftalmico topico, ossibuprocaina su entrambi gli occhi del topo anestetizzato. Quindi applicare localmente 0,5% Tropicamide su entrambi gli occhi per dilatare le pupille, seguito da 1,4% idrossietilcellulosa come lubrificante per evitare l'essiccazione degli occhi.Osserva un occhio del mouse sotto un microscopio operatorio. Tenere le palpebre aperte con una pinza intraoculare sterile. Quindi tenere il limbo-congiuntiva temporale superiore e tirare verso una posizione infranasale.Proteggi questa posizione tenendo il limbo-congiuntiva durante tutta la procedura. Utilizzando una punta dell'ago di calibro 30 fare una piccola peritomia congiuntivale nell'area temporale dorsale a circa uno o due millimetri posteriormente al limbus. Rimuovere la capsula dei tendini in eccesso dall'apertura della peritomia.Inserire la punta dell'ago per penetrare nella sclera creando una traccia nello spazio subcoroideale fino a quando il colore marrone della coroide appare attraverso la sostanza bianca esposta della sclera. Caricare le celle in una siringa Hamilton sterile in vetro da 10 microlitri montata con un ago smussato calibro 32 attorcigliato con un angolo di 45 gradi. Inserire l'ago della siringa caricata di circa due millimetri nel tratto creato e iniettare due microlitri della sospensione cellulare.Tenga l'ago in posizione dopo l'iniezione per due o tre secondi fino a quando tutto il liquido non si è eliminato. Rimuovere l'ago estraendolo delicatamente per evitare perdite dal tratto. Immediatamente dopo l'inoculazione delle cellule di melanoma, osservare l'occhio iniettato dell'animale mediante scansioni OCT.Sulla base delle scansioni, classificare il distacco di retina o i modelli RD secondo tre categorie RD locali, Leakage Into The Vitreous o Extended RD. Aprire un software di analisi della segmentazione OCT per prevedere le dimensioni del tumore in base all'altezza RD. Misurare l'altezza della RD locale nelle scansioni dello Strumento di personalizzazione di Office e classificarle in tre gruppi. Nella fase postoperatoria, applicare 0,3% di Ofloxacina per via topica.La previsione basata sull'OCT della crescita tumorale dopo iniezione di cellule subcoroidali è rappresentata in questa figura. I topi hanno mostrato tre modelli di RD, Focal, Leakage To The Vitreous e Extended RD. C'era un'associazione tra il modello di RD immediatamente dopo l'iniezione e la localizzazione dei tumori cinque giorni dopo l'iniezione. La RD focale era associata alla crescita delle cellule tumorali che era limitata alla coroide.Tuttavia, l'osservazione delle cellule nel vitreo dopo l'iniezione in animali che mostravano RD focale ha indicato la crescita tumorale nella cavità vitreale e nella coroide. quando è stata osservata una RD estesa dopo l'iniezione, i tumori sono stati dispersi in tutta la coroide e vitrei dopo cinque giorni. La gamma di dimensioni tumorali indotte in questo modello può essere suddivisa in piccola, media e grande.Qui sono mostrate immagini rappresentative della misurazione OCT dell'altezza RD dopo l'iniezione e l'immagine del fondo oculare corrispondente, una scansione OCT orizzontale dell'altezza e della larghezza del tumore il quinto giorno dopo l'iniezione e la sua immagine del fondo oculare corrispondente e la corrispondente sezione oculare colorata H & E che dimostra misurazioni tumorali comparabili. Qui vengono presentate le misurazioni del volume tumorale di topi che hanno presentato RD piccola, media o grande immediatamente dopo l'iniezione cellulare. La regolazione della forza di iniezione può influenzare le dimensioni e la posizione del tumore.È importante calibrare questo e valutare il modello di distacco di retina indotto da OCT dopo l'iniezione. L'imaging dal vivo dei tumori coroideali è un importante strumento sperimentale che consente di esaminare l'effetto di diversi fattori o potenziali terapie sulla progressione del tumore.

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Questo video dimostra una tecnica di imaging in vivo per rilevare e quantificare l'infiammazione oculare in un modello murino di uveite post-infettiva. La tecnica, nota come tomografia a coerenza ottica (OCT), genera immagini in sezione trasversale ad alta risoluzione dell'occhio per valutare la progressione della malattia.

Imaging con tomografia a coerenza ottica per la valutazione dell'uveite in un modello murino

Fonte: Jagodzinska, J., et. al., Tomografia a coerenza ottica: imaging delle cellule gangliari retiniche del topo In Vivo. J. Vis. Exp. (2017) &lt;br /&gt; In questo video, dimostriamo l'uso della tomografia a coerenza ottica del dominio spettrale (SD-OCT) per visualizzare gli strati retinici e valutare i cambiamenti strutturali in un modello murino geneticamente modificato con neuropatia ottica.

Imaging in vivo della retina di topo mediante tomografia a coerenza ottica

Abbiamo stabilito un modello glioblastoma ortotopico corticale nei topi per intravital microscopia a due fotoni che ricapitola i vincoli biofisici normalmente in gioco durante la crescita del tumore. Una finestra di vetro cronica sostituzione del cranio sopra il tumore consente il seguito della progressione tumorale nel tempo mediante microscopia a due fotoni.

Un ortotopico Glioblastoma modello di mouse mantenimento di vincoli Cervello parenchimale fisiche e adatto per intravitale due fotoni Microscopia

Descriviamo una piattaforma di imaging animale non invasiva che consente il rilevamento, la quantificazione e il monitoraggio della crescita e della recidiva del cancro ovarico. Questo modello di xenotrapianto intraperitoneale imita il profilo clinico delle pazienti con carcinoma ovarico.

Modello murino per l&#39;imaging non invasivo per rilevare e monitorare Ovarian Cancer Ricorrenza

Questo manoscritto descrive un protocollo per l'imaging in vivo della retina di topo con tomografia a coerenza ottica ad alta risoluzione spettrale dominio (SD-OCT). Si concentra sulle cellule retiniche del ganglio (RGC) nella regione peripapillare, con diverse analisi e quantificazione approcci descritti.

Tomografia a coerenza ottica: Imaging Mouse ganglionari cellule In Vivo

Qui, presentiamo l'utilità di longitudinale in vivo imaging nel follow-up dei cambiamenti morfologici del neovascularization coroidico laser-indotta in topi.

In Vivo Imaging multimodale e l'analisi di Mouse indotta da Laser modello di Neovascularization coroidico

La seguente procedura descrive un metodo per il controllo spaziale e temporale dell'iniziazione tumorale melanocitica nella pelle dorsali murina, utilizzando un modello di topo geneticamente modificato. Questo protocollo descrive l'iniziazione macroscopica e microscopica del melanoma cutaneo.

Controllo spaziale e temporale dell'iniziazione del melanoma murino dalle cellule staminali di melanociti mutanti

Qui, descriviamo una tecnica di imaging in vivo che utilizza la tomografia a coerenza ottica per facilitare la diagnosi e la misurazione quantitativa della retinopatia nei topi.

Applicazione della tomografia a coerenza ottica a un modello murino di retinopatia

Il presente protocollo delinea i passaggi per l'allineamento in vivo delle immagini in fibra di tomografia a coerenza ottica a luce visibile (vis-OCTF) con le immagini confocali ex vivo della stessa retina murina allo scopo di verificare la morfologia osservata del fascio assonale delle cellule gangliari retiniche nelle immagini in vivo .

Allineamento di fibrogrammi per tomografia a coerenza ottica a luce visibile con immagini confocali della stessa retina murina

Descriviamo un metodo che utilizza irraggiamento periferico mirati per indurre comportamento a fatica, come nei topi. La dose di irradiazione non letale selezionati porta ad una riduzione di una settimana in attività di ruote in esecuzione volontaria.

Un modello murino di fatica indotta da irradiazione Peripheral

Impara a impiantare e valutare il melanoma coroideo murino mediante tomografia a coerenza ottica. Questo metodo consente l'imaging in vivo della crescita tumorale per studi oncologici avanzati.

Impianto e valutazione del melanoma nella coroide murina mediante tomografia a coerenza ottica

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