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DOI: 10.3791/64633-v
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Il presente protocollo descrive le capacità e le modalità di coltura essenziali dell'Open-Top Organ-Chip per il successo della creazione e della maturazione di colture organo-on-chip a tutto spessore di tessuti primari (pelle, alveolo, vie aeree e intestino), fornendo l'opportunità di indagare diversi aspetti funzionali dell'interfaccia di nicchia epiteliale/mesenchimale e vascolare umana in vitro.
I metodi tradizionali di coltura diffusa spesso non riescono a ricapitolare il complesso ambiente degli organi viventi, portando alla perdita di marcatori e funzioni tessuto-specifici. Abbiamo sviluppato un chip open-top che combina coltura diffusa e principio microfluidico per imitare da vicino il microambiente dei tessuti epiteliali. Includendo segnali biochimici e biomeccanici che sono naturalmente presenti negli organi viventi ma spesso trascurati dai tradizionali modelli in vitro, il chip open-top rappresenta un'alternativa migliore tra i sistemi chiusi.
A dimostrare la procedura sarà oggi Adya Panchal, una studentessa di ricerca nel mio laboratorio. Per iniziare, portare i reagenti necessari sotto l'armadio di biosicurezza sul ghiaccio. Coltura di cellule mesenchimali tessuto-specifiche per ottenere dall'80% al 90% di confluenza e quindi dissociare le cellule usando tripsina o altri metodi secondo le raccomandazioni del produttore.
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