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DOI: 10.3791/64775-v
Pavan S. Krishnan1,2, Fernando T. Zamuner1,3, Carolyn M. Jenks1, Johnny Y. Xie4, Lisa Zhang5, Mohammed Lehar1, Neal S. Fedarko6, Mariana Brait1,3, John P. Carey1
1Department of Otolaryngology-Head & Neck Surgery,Johns Hopkins University School of Medicine, 2Virginia Commonwealth University School of Medicine, 3Department of Oncology, The Sidney Kimmel Comprehensive Cancer Center,Johns Hopkins University School of Medicine, 4Department of Otolaryngology-Head and Neck Surgery,University of Michigan Medical School, 5Department of Otolaryngology-Head and Neck Surgery,The Ohio State University College of Medicine, 6ICTR Clinical Research Core Laboratory,Johns Hopkins University School of Medicine
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
I dati pubblicati relativi alle concentrazioni di peptidi correlati al gene della calcitonina (CGRP) nel plasma umano sono incoerenti. Queste incongruenze possono essere dovute alla mancanza di una metodologia standardizzata e convalidata per quantificare questo neuropeptide. Qui, descriviamo un protocollo ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) convalidato per purificare e quantificare CGRP nel plasma umano.
Questo protocollo ELISA modificato consente la purificazione e la quantificazione accurata del CGRP nel plasma umano. È stato sottoposto ai necessari esperimenti di convalida e può servire a standardizzare le future metodologie di quantificazione. Questo protocollo offre i vantaggi di includere l'elaborazione del campione prima di una significativa degradazione della proteasi, la purificazione tramite estrazione in fase solida e la limitazione del legame non specifico mediante l'applicazione di tampone bloccante alle piastre di microtitolazione.
CGRP svolge un ruolo punitivo nella fisiopatologia dell'emicrania e forse un candidato per lo status di biomarcatore. È stato anche implicato nei processi patologici cardiologici, dermatologici, virali e persino correlati a COVID-19. Per iniziare, raccogliere 5 millilitri di sangue intero dalla vena antecubitale attraverso metodi di venipuntura standard in un tubo di EDTA vacutainer da 6 millilitri.
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