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DOI: 10.3791/64804-v
Erin Crawford*1, Heather L. Mentrup*2,3, Elizabeth A. Novak2,3, Kevin P. Mollen2,3
1Division of Pediatric Gastroenterology, Hepatology and Nutrition,UPMC Children’s Hospital of Pittsburgh, 2Division of Pediatric Surgery,UPMC Children’s Hospital of Pittsburgh, 3Department of Surgery,University of Pittsburgh School of Medicine
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This study presents a protocol for isolating murine colonic crypts to develop 3-dimensional colonoids, which can be differentiated to mimic the intestinal epithelium. This approach enables the investigation of intestinal physiology and barrier function in diseased states, particularly inflammatory bowel disease.
Descriviamo un protocollo che descrive in dettaglio l'isolamento delle cripte del colon murino per lo sviluppo di colonoidi tridimensionali. I colonoidi stabiliti possono quindi essere differenziati terminalmente per riflettere la composizione cellulare dell'epitelio ospite prima di ricevere una sfida infiammatoria o di essere diretti a stabilire un monostrato epiteliale.
Attraverso la nostra ricerca, ci proponiamo di esplorare come i colonoidi murini potrebbero essere modificati da un sistema di coltura di colonoidi convenzionale, per studiare alcuni aspetti della fisiologia intestinale e la loro alterazione in presenza di uno stato di malattia infiammato. Lo studio della funzione barriera e della fisiologia intestinale in stati patologici come la malattia infiammatoria intestinale è limitato quando si utilizza un sistema di coltura di colonoidi murini tradizionale che riflette solo la fisiologia delle cellule staminali. Il nostro protocollo è vantaggioso in quanto fornisce al lettore molteplici tecniche per studiare come i mediatori infiammatori influenzano l'epitelio intestinale, differenziandoli terminalmente o creando un sistema monostrato 2D.
In futuro, il nostro laboratorio si concentrerà sulla comprensione di come il sistema di coltura di colonidi umani possa essere alterato per studiare diversi aspetti della fisiologia intestinale e delle malattie, in particolare la malattia infiammatoria intestinale.
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