Analisi comportamentali e di farmacologia di rete per la medicina tradizionale mongola Zadi-5 in un modello di ratto di depressione

L'efficacia terapeutica di Zadi-5 nel trattamento della depressione può essere stabilita attraverso test comportamentali, mentre la farmacologia di rete può prevedere i potenziali meccanismi che sono alla base della sua potenza. La farmacologia di rete può supportare l'esplorazione di farmaci tradizionali che mostrano intricati meccanismi d'azione e ridurre ulteriormente il tempo e le spese necessarie per l'indagine. Test come il test in campo aperto, il test del consumo di saccarosio e il Morris Water Maze sono il gold standard per valutare l'appetito, i livelli di motivazione, la capacità di apprendimento e la memoria, in modelli animali di disturbi neurologici.

Questi test sono metodi di valutazione semplici, oggettivi e ragionevoli. La creazione di un modello animale è fondamentale per comprendere i meccanismi patologici e gli effetti di un nuovo farmaco in uno studio sul disturbo depressivo. Per stabilire un buon modello di depressione, i ricercatori devono sequenziare e regolare in modo appropriato l'intensità degli stimoli.

Per iniziare, applicare gli stimoli depressivi selezionati, combinati con l'isolamento, per 28 giorni a tutti i ratti, ad eccezione dei controlli, e allevare i ratti in gabbie individuali. Per eseguire il test in campo aperto, dividere una scatola nera in nove regioni quadrate di uguale area. Dotare la scatola di un sistema di analisi del tracciamento video.

Un giorno dopo l'ultima gavage, posiziona il topo nel quadrato centrale e registra le sue attività orizzontali e verticali per tre minuti. Quindi segna il numero di caselle attraversate con tutte le pause come attività orizzontale e segna la posizione eretta e la toelettatura come attività verticale. Dopo ogni test, pulire la scatola con alcol al 75% per rimuovere l'odore del ratto per i test successivi.

Successivamente, eseguire il test del consumo di saccarosio pesando le rispettive bottiglie prima e dopo il consumo. E calcola i tassi di preferenza per il saccarosio a 60 minuti nei giorni zero, sette, 14, 21 e 28 usando questa equazione. Per eseguire il test del labirinto d'acqua di Morris, dividi la piscina in quattro quadranti.

Ordina i quadranti da uno a quattro e posiziona la piattaforma nascosta nel terzo quadrante, un centimetro sotto la superficie dell'acqua. Aggiungi il latte alla piscina per un certo livello di opacità. Quindi posiziona il soggetto ratto nel labirinto in diversi quadranti per cercare la piattaforma per 120 secondi.

E registra il tempo di latenza utilizzando il sistema di analisi delle tracce video Morris Water Maze. Posizionare il soggetto ratto in una posizione fissa nella piscina. Se il soggetto non riesce a trovare la piattaforma nascosta entro 120 secondi, registrare la latenza come 120 secondi.

Quindi, sposta la piattaforma, posiziona il ratto in acqua e registra il numero di attraversamenti di zona per 120 secondi. Sfoglia la pagina web di farmacologia del sistema di medicina tradizionale cinese e inserisci semi di sperma myristicae, radici di al-glandia-radiks e piperis longi fructus nella sezione dei nomi delle erbe per ottenere i nomi delle sostanze chimiche. Impostare l'indice farmacocinetico di biodisponibilità orale, o OB, su un valore superiore al 30% e l'indice simile a un farmaco su un valore superiore a 0,18.

Cerca i componenti attivi nella farmacopea della medicina cinese per identificare i nomi chimici di ciascun componente. Quindi, cerca i nomi chimici identificati in Pub Chem per trovare i sorrisi isomerici o l'inchiostro. Identifica le proteine bersaglio dei componenti attivi utilizzando la previsione del bersaglio SEA, Batman e Swiss con sorrisi isomerici o inchiostri e trova le proteine sovrapposte.

Copiare i dati in un file Excel. Successivamente, cerca e identifica i potenziali bersagli proteici per la depressione utilizzando le parole chiave depressione e disturbo depressivo in GeneCards, DisGeNET e DrugBank. Copiare i dati in un file Excel.

Sfoglia il diagramma di Venn e carica gli obiettivi della depressione nell'elenco uno. Quindi carica gli obiettivi per i componenti attivi di Zadi-5 nell'elenco due e inviali. Ottenere il diagramma di Venn e filtrare i candidati target sovrapposti.

Costruisci un foglio di calcolo, chiamato rete. Costruisci anche un foglio di calcolo, chiamato tipo. Esporta il foglio in Cytoscape per costruire la rete, Zadi-5 bersagli di malattie degli ingredienti delle erbe.

Impostare le destinazioni comuni nel database delle stringhe per analizzarne le interazioni. Impostare il tipo di proteina come homosapiens. Impostare il valore della soglia di interazione su 0,9 per selezionare solo i tipi verificati sperimentalmente e non visualizzare i nodi dell'isola solitaria.

Apri lo strumento DAVID e incolla gli 86 potenziali bersagli antidepressivi di Zadi-5 nella parentesi di analisi iniziale per studiare le relative vie di segnalazione. Scarica il documento sul percorso del fusto. Selezionare i geni nel percorso PI3k-AKT dall'analisi di arricchimento e incollarli sul foglio di calcolo per costruire un tipo e un documento di rete.

Esportare il tipo di documento di rete in Cytoscape per generare la rete di percorsi di target composti visualizzati PI3K-AKT. Il gruppo di animali testato non ha mostrato differenze significative prima dello stress lieve cronico imprevisto o della stimolazione CUMS. Dopo aver stabilito il modello CUMS, i punteggi verticali e orizzontali del gruppo erano inferiori a quelli del controllo.

Rispetto al gruppo modello, i punteggi verticali e orizzontali dei gruppi di controllo positivo e Zadi-5 erano significativamente più alti. Il giorno zero, i gruppi testati non avevano differenze significative nel consumo di saccarosio. I gruppi Zadi-5 e di controllo positivo erano più alti del gruppo modello il giorno 28.

Nel labirinto d'acqua di Morris, la latenza del gruppo di modelli per trovare la piattaforma era significativamente più alta rispetto al controllo. La latenza dei gruppi di controllo positivo e Zadi-5 è risultata inferiore rispetto al gruppo modello. Per quanto riguarda il conteggio degli attraversamenti di zona, il gruppo di modelli ha mostrato un numero inferiore di attraversamenti rispetto al controllo.

I gruppi di controllo positivo e Zadi-5 hanno mostrato più incroci rispetto al gruppo modello. L'analisi del diagramma di Venn ha rivelato 86 bersagli sovrapposti come bersagli critici correlati alla depressione di Zadi-5 dei 1000 bersagli proteici correlati alla depressione. Sulla base di questi risultati, sono stati costruiti gli obiettivi della malattia degli ingredienti a base di erbe Zadi-5 e un'analisi della rete di interazione proteina-proteina dei candidati bersaglio.

Secondo l'analisi della via KEG, la via di segnalazione PI3K-AKT si è classificata al settimo posto. È stato associato a molte vie di segnalazione. Di conseguenza, la via PI3K-AKT è stata considerata relativamente più importante delle altre vie di arricchimento.

Durante il tentativo di questa procedura, è fondamentale astenersi dal ripetere lo stesso tipo di stimoli per giorni consecutivi. A seguito delle analisi dei componenti di Zadi-5 nelle banche dati online, la qualità della validazione può essere assicurata dalla cromatografia liquida, dalla spettrometria di massa e dalla spettroscopia di risonanza magnetica nucleare.