Name: Isolamento delle cellule epiteliali pigmentate retiniche da occhi di porcellino dIndia (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-05-09T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 6 s
Description: Impara un metodo semplice per isolare le cellule epiteliali pigmentate retiniche da occhi di porcellino d'India. Questa tecnica fornisce campioni di alta qualità adatti per studi di biologia molecolare e analisi dell'espressione genica.

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Questo studio è supportato dalla Japan Society for the Promotion of Science Overseas Research Fellowships (S.G.), da un Loris and David Rich Postdoctoral Scholar (S.G.) e da una sovvenzione del National Eye Institute del National Institutes of Health (R01EY012392; C.F.W.).

Tutte le cure e i trattamenti degli animali utilizzati in questo studio sono conformi alla dichiarazione ARVO per l'uso degli animali nella ricerca oftalmica e visiva. I protocolli sperimentali sono stati approvati dall'Animal Care and Use Committee dell'Università della California, Berkeley.
1. Enucleazione dell'occhio di cavia
<ol><li>Eutanasia di una cavia con un'iniezione intracardiaca di pentobarbital di sodio somministrato in anestesia (isoflurano al 5% in ossigeno).</li>
	<li>Enucleare gli occhi con l'aiuto di pinze e forbici e trasferirli immediatamente in una capsula di Petri di 10 cm con soluzione salina sterile tamponata con fosfato (PBS) per il lavaggio. Trasferire gli occhi alla soluzione PBS fresca. NOTA: Si consiglia una piastra a 6 pozzetti contenente 4 ml di soluzione per pozzetto.</li>
</ol>2. Isolamento della coppa oculare posteriore dell'occhio e del complesso RPE/coroide/sclera
<ol><li>Con l'aiuto di un microscopio da dissezione, utilizzare un ago da 18 G per praticare una piccola incisione iniziale nella sclera, circa 1,0 mm dietro il confine limbare (cioè tra la cornea e la sclera) (Figura 1A); Quindi utilizzare le forbici per rimuovere il segmento anteriore, compresa la cornea, l'iride, il corpo ciliare e il cristallino.</li>
	<li>Successivamente, lavorando con la restante coppa oculare del segmento oculare, staccare la retina dal complesso RPE / coroide / sclera; utilizzare una pinza per afferrare prima e poi tirare delicatamente la zonula di Zinn e poi per staccare progressivamente la retina senza frammentazione (Figura 1B). NOTA: La retina non deve essere afferrata direttamente per evitare la frammentazione retinica e l'isolamento incompleto del tessuto retinico. L'uso di un microscopio è essenziale per questa fase di dissezione.</li>
</ol>3. Isolamento dell'RPE dalla coroide
<ol><li>Dopo che la retina è stata completamente rimossa, immergere la concia oculare posteriore rimanente, che include RPE, coroide e sclera, in un reagente di conservazione dei tessuti per 5 minuti (vedere la tabella dei materiali). NOTA: Utilizzare una piastra a 12 pozzetti con pozzetti identificati, ciascuno riempito con 2 ml del reagente di stoccaggio dei tessuti.</li>
	<li>Trasferire la concia oculare in un altro pozzetto riempito con 4 ml di PBS per 10 s prima di spostarlo in un terzo pozzetto riempito con 2 ml di PBS.</li>
	<li>Collegare un ago da 30 G a una siringa da 1 mL riempita con PBS per la fase finale di isolamento RPE. Spingere delicatamente sulla siringa per creare una corrente a getto di PBS; per prima cosa, punta questo flusso verso l'RPE per fare un piccolo strappo o un buco in esso, quindi dirigere il flusso di PBS nell'apertura creata per staccare l'RPE come un foglio dalla coroide (Figura 1C). NOTA: il distacco dell'RPE come foglio produce il campione RPE più grande. Ancora una volta, l'uso di un microscopio è essenziale per questo passaggio.</li>
	<li>Dopo aver staccato l'RPE dalla coroide (Figura 1D), raccogliere il tessuto RPE in una siringa senza ago da 1 ml, quindi trasferire il campione raccolto in una provetta da 1,5 ml.</li>
	<li>Centrifugare il tubo da 1,5 mL con l'RPE raccolto a 8.000 × g per 1 minuto per ottenere un pellet RPE (Figura 2A).</li>
	<li>Eliminare la soluzione PBS e sostituirla con 350 ml di tampone di lisi, come incluso nei kit di isolamento dell'RNA (vedere la Tabella dei materiali); pipetta 20x per miscelare e, quindi, preservare la qualità del campione. Per una conservazione e una conservazione a lungo termine, trasferire i campioni in un congelatore a -80 °C. NOTA: Il tampone di lisi è un componente proprietario del kit di isolamento dell'RNA per la lisi cellulare e tissutale prima dell'isolamento dell'RNA e dell'isolamento simultaneo di RNA/DNA/proteine. Per inattivare le RNA nel lisato, assicurarsi di aggiungere β-mercaptoetanolo al tampone di lisi (10 μL di β-mercaptoetanolo per 1 mL di tampone di lisi).</li>
</ol>4. Estrazione RPE-RNA
<ol><li>Utilizzare un kit di isolamento dell'RNA (vedere la Tabella dei materiali) per isolare e raccogliere l'RNA dai campioni RPE seguendo le istruzioni fornite dal produttore. Valutare la qualità del campione tramite elettroforesi. NOTA: Il protocollo descritto ha prodotto un prodotto di buona qualità (cioè il numero di integrità dell'RNA [RIN] superiore a 8,0).</li>
</ol>

<ol><li>Strauss, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+retinal+pigment+epithelium+in+visual+function%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Reviews%22%5BJournal%5D)">The retinal pigment epithelium in visual function.</a> Physiological Reviews. 85 (3), 845-881 (2005).</li>
<li>Amram, B., Cohen-Tayar, Y., David, A., Ashery-Padan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+retinal+pigmented+epithelium+-+from+basic+developmental+biology+research+to+translational+approaches%5BTitle%5D)+AND+%22The+International+Journal+of+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">The retinal pigmented epithelium - from basic developmental biology research to translational approaches.</a> The International Journal of Developmental Biology. 61 (3-4-5), 225-234 (2017).</li>
<li>Goto, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+retina-specific+Aldh1a1+controls+dorsal+choroidal+vascular+development+via+Sox9+expression+in+retinal+pigment+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Neural retina-specific Aldh1a1 controls dorsal choroidal vascular development via Sox9 expression in retinal pigment epithelial cells.</a> Elife. 7, 32358(2018).</li>
<li>Rymer, J., Wildsoet, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+the+retinal+pigment+epithelium+in+eye+growth+regulation+and+myopia%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Visual+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The role of the retinal pigment epithelium in eye growth regulation and myopia: A review.</a> Visual Neuroscience. 22 (3), 251-261 (2005).</li>
<li>Wallman, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Moving+the+retina%3A+Choroidal+modulation+of+refractive+state%5BTitle%5D)+AND+%22Vision+Research%22%5BJournal%5D)">Moving the retina: Choroidal modulation of refractive state.</a> Vision Research. 35 (1), 37-50 (1995).</li>
<li>Wu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scleral+hypoxia+is+a+target+for+myopia+control%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Scleral hypoxia is a target for myopia control.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 115 (30), 7091-7100 (2018).</li>
<li>Troilo, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imi+-+Report+on+experimental+models+of+emmetropization+and+myopia%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Imi - Report on experimental models of emmetropization and myopia.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 60 (3), 31-88 (2019).</li>
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<li>Zhang, Y., Wildsoet, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RPE+and+choroid+mechanisms+underlying+ocular+growth+and+myopia%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Molecular+Biology+and+Translational+Science%22%5BJournal%5D)">RPE and choroid mechanisms underlying ocular growth and myopia.</a> Progress in Molecular Biology and Translational Science. 134, 221-240 (2015).</li>
<li>Jager, R. D., Mieler, W. F., Miller, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Age-related macular degeneration.</a> New England Journal of Medicine. 358 (24), 2606-2617 (2008).</li>
<li>McLeod, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+between+RPE+and+choriocapillaris+in+age-related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Opthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Relationship between RPE and choriocapillaris in age-related macular degeneration.</a> Investigative Opthalmology and Visual Science. 50 (10), 4982(2009).</li>
<li>Bhutto, I., Lutty, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+age-related+macular+degeneration+%28AMD%29%3A+Relationships+between+the+photoreceptor%2Fretinal+pigment+epithelium%2FBruch%27s+membrane%2Fchoriocapillaris+complex%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Aspects+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Understanding age-related macular degeneration (AMD): Relationships between the photoreceptor/retinal pigment epithelium/Bruch's membrane/choriocapillaris complex.</a> Molecular Aspects of Medicine. 33 (4), 295-317 (2012).</li>
<li>Shelton, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microarray+analysis+of+choroid%2FRPE+gene+expression+in+marmoset+eyes+undergoing+changes+in+ocular+growth+and+refraction%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Vision%22%5BJournal%5D)">Microarray analysis of choroid/RPE gene expression in marmoset eyes undergoing changes in ocular growth and refraction.</a> Molecular Vision. 14, 1465-1479 (2008).</li>
<li>Wang, S., Liu, S., Mao, J., Wen, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+retinoic+acid+on+the+tight+junctions+of+the+retinal+pigment+epithelium-choroid+complex+of+guinea+pigs+with+lens-induced+myopia+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Effect of retinoic acid on the tight junctions of the retinal pigment epithelium-choroid complex of guinea pigs with lens-induced myopia in vivo.</a> International Journal of Molecular Medicine. 33 (4), 825-832 (2014).</li>
<li>He, L., Frost, M. R., Siegwart, J. T., Norton, T. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+gene+expression+in+tree+shrew+retina+and+retinal+pigment+epithelium+produced+by+short+periods+of+minus-lens+wear%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Altered gene expression in tree shrew retina and retinal pigment epithelium produced by short periods of minus-lens wear.</a> Experimental Eye Research. 168 (3), 77-88 (2018).</li>
<li>Nickla, D. L., Wallman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+multifunctional+choroid%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Retinal+and+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">The multifunctional choroid.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 29 (2), 144-168 (2010).</li>
<li>Zhang, Y., Liu, Y., Wildsoet, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bidirectional%2C+optical+sign-dependent+regulation+of+BMP2+gene+expression+in+chick+retinal+pigment+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Bidirectional, optical sign-dependent regulation of BMP2 gene expression in chick retinal pigment epithelium.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 53 (10), 6072-6080 (2012).</li>
<li>Xin-Zhao Wang, C., Zhang, K., Aredo, B., Lu, H., Ufret-Vincenty, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+method+for+the+rapid+isolation+of+RPE+cells+specifically+for+RNA+extraction+and+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Novel method for the rapid isolation of RPE cells specifically for RNA extraction and analysis.</a> Experimental Eye Research. 102 (1), 1-9 (2012).</li>
<li>Goto, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+expression+signatures+of+contact+lens-induced+myopia+in+guinea+pig+retinal+pigment+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Opthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Gene expression signatures of contact lens-induced myopia in guinea pig retinal pigment epithelium.</a> Investigative Opthalmology and Visual Science. 63 (9), 25(2022).</li>
<li>De Schaepdrijver, L., Simoens, P., Lauwers, H., De Geest, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+vascular+patterns+in+domestic+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Research+in+Veterinary+Science%22%5BJournal%5D)">Retinal vascular patterns in domestic animals.</a> Research in Veterinary Science. 47 (1), 34-42 (1989).</li>
<li>Araki, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Base-resolution+methylome+of+retinal+pigment+epithelial+cells+used+in+the+first+trial+of+human+induced+pluripotent+stem+cell-based+autologous+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Base-resolution methylome of retinal pigment epithelial cells used in the first trial of human induced pluripotent stem cell-based autologous transplantation.</a> Stem Cell Reports. 13 (4), 761-774 (2019).</li>
<li>Sonoda, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+protocol+for+the+culture+and+differentiation+of+highly+polarized+human+retinal+pigment+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">A protocol for the culture and differentiation of highly polarized human retinal pigment epithelial cells.</a> Nature Protocols. 4 (5), 662-673 (2009).</li>
<li>Fernandez-Godino, R., Garland, D. L., Pierce, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation%2C+culture+and+characterization+of+primary+mouse+RPE+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Isolation, culture and characterization of primary mouse RPE cells.</a> Nature Protocols. 11 (7), 1206-1218 (2016).</li>
</ol>

Gli autori non dichiarano interessi finanziari concorrenti.

In questo articolo, descriviamo un metodo per isolare RPE, appropriato per le analisi di espressione genica RPE, dagli occhi di giovani cavie pigmentate. I meriti di questo protocollo sono che produce campioni RPE di alta qualità che sono relativamente privi di contaminazione, con RNA adeguatamente conservato per analisi specifiche dell'RNA e, tuttavia, è relativamente semplice ed efficiente. Mentre nell'esempio fornito qui, i campioni RPE sono stati raccolti dagli occhi di una cavia giovane (2 settimane), il protocollo ...

L'RPE comprende un monostrato unico di cellule pigmentate situate tra la retina neurale e la coroide vascolare e l'RPE ha ruoli ben noti nello sviluppo e nel mantenimento della normale funzione retinica, compresa la fototrasduzione 1,2. Più recentemente, all'RPE è stato assegnato un ulteriore ruolo chiave nella regolazione della crescita oculare3 e, quindi, nello sviluppo della miopia4. Questa assegnazione si basa sulla posizione critica dell'RPE, interposta tra la retina e la coroide e sull'ormai ampia accettazione che la crescita dell'occhio e, quindi, gli errori di rifrazione sono regolati localmente5. Si ritiene che l'RPE svolga un ruolo chiave come relè di segnale, collegando la retina, la presunta fonte di segnali modulatori della crescita, alla coroide e alla sclera, i due bersagli dei segnali trasmessi 6,7,8.
L'aumento della lunghezza assiale che caratterizza la maggior parte della miopia non può essere considerato benigno, con alterazioni fisiopatologiche che coinvolgono la retina, la coroide e/o la sclera che rappresentano conseguenze inevitabili e ormai ben riconosciute di un eccessivo allungamento oculare 7,9. In questo contesto, l'RPE è forse il più vulnerabile, poiché, essendo un tessuto non mitotico, è in grado di ospitare la camera vitreale in espansione solo attraverso lo stiramento e l'assottigliamento delle singole cellule. Mentre il suo ruolo nelle patologie correlate alla miopia, come la degenerazione maculare miopica, deve ancora essere completamente compreso, l'RPE è stato implicato nella patogenesi di una serie di altre malattie della retina, tra cui l'atrofia geografica, una delle principali cause di cecità, che è associata ad anomalie documentate nella retina, RPE e coroide10,11, 12.
Il successo dell'isolamento delle cellule RPE, libere dalla contaminazione dai tessuti oculari adiacenti, apre potenzialmente molte opportunità di ricerca per ottenere nuove informazioni sui meccanismi alla base di una varietà di malattie oculari / retiniche. Tuttavia, l'isolamento dell'RPE si è dimostrato impegnativo, con molti studi pubblicati che utilizzano campioni combinati di retina / RPE o RPE / coroide per questo motivo13,14,15. Gli studi che prevedono l'isolamento riuscito dell'RPE di una qualità adatta agli studi di biologia molecolare sono stati limitati agli occhi di pulcino e topo16,17. Ad esempio, il metodo simultaneo di isolamento RPE e stabilizzazione dell'RNA (SRIRS) descritto da Wang et al.18. Isolare le cellule RPE nei topi non sembra funzionare bene negli occhi delle cavie. Il protocollo qui descritto rappresenta un perfezionamento di un approccio che è stato inizialmente prototipato con occhi di toporagno degli alberi da uno degli autori (M.F.) e ha dimostrato di produrre campioni RPE di alta qualità, appropriati per l'RNA e altre analisi di biologia molecolare, dagli occhi di giovani cavie pigmentate19.

<table><tbody><tr><td>Siringa da 1 ml con punta scorrevole</td><td>Bd Vacutainer Labware Medical</td><td>22-253-260</td><td></td></tr><tr><td>2-Mercaptoethanol</td><td>Invitrogen</td><td>21985-023</td><td></td></tr><tr><td>Piastra per coltura tissutale a 6 pozzetti con coperchio, fondo piatto,</td><td>pectrum sterile Chemical Mfg. Corp</td><td>970-95008</td><td></td></tr><tr><td>Piastra per coltura tissutale a 12 pozzetti con coperchio, individuale, sterile</td><td>Thomas Scientific LLC</td><td>1198D72</td><td></td></tr><tr><td>Bioanalizzatore Agilent 2100</td><td>Elettroforesi automatizzata per controllare la qualità dell'RNA</td>Soluzioni saline bilanciate Gibco 10010031 Bonn Micro pinze, dritto liscio, punta da 0,3 mm, 7 cm Fine Science Tools, Inc.<td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td>11083-07</td><td></td></tr><tr><td>Pinza Dumont n. 5</td><td>ROBOZ</td><td>RS-5045</td><td></td></tr><tr><td>Aghi ipodermici monouso</td><td>Exelint International, Co.</td><td>26419</td><td></td></tr><tr><td>Aghi ipodermici monouso</td><td>Exelint International, Co.</td><td>26437</td><td></td></tr><tr><td>Microcentrifughe MiniSpin</td><td>Eppendorf</td><td>540108</td><td>Velocità massima: 8.000 g</td></tr><tr><td>Soluzione di stabilizzazione RNAlater</td><td>Reagente per la conservazione dei tessuti</td><td>Invitrogen</td><td>AM7020</td> Kit</tr><tr><td>RNeasy Mini kit</td><td>Qiagen</td><td>74104</td><td>Kit di isolamento dell'RNA</td></tr><tr><td>Student Vannas Spring Scissors</td><td>Fine Science Tools, Inc.</td><td>Codice 91500-09</td><td></td></tr></tbody></table>

isolamento delle cellule epiteliali pigmentate retiniche da occhi di porcellino d'india

Isolation of Retinal Pigment Epithelial Cells from Guinea Pig Eyes

Questo protocollo descrive l'isolamento delle cellule dell'epitelio pigmentato retinico (RPE) dagli occhi di giovani cavie pigmentate per una potenziale applicazione negli studi di biologia molecolare, comprese le analisi di espressione genica. Nel contesto della regolazione della crescita oculare e della miopia, l'RPE svolge probabilmente un ruolo come relè cellulare per i segnali modulatori della crescita, poiché si trova tra la retina e le due pareti dell'occhio, come la coroide e la sclera. Mentre i protocolli per isolare l'RPE sono stati sviluppati sia per i pulcini che per i topi, questi protocolli hanno dimostrato di non essere direttamente traducibili nella cavia, che è diventata un modello di miopia di mammifero importante e ampiamente utilizzato. In questo studio, sono stati utilizzati strumenti di biologia molecolare per esaminare l'espressione di geni specifici per confermare che i campioni erano privi di contaminazione dai tessuti adiacenti. Il valore di questo protocollo è già stato dimostrato in uno studio RNA-Seq di RPE da giovani cavie pigmentate esposte a defocus ottico che induce miopia. Oltre alla regolazione della crescita oculare, questo protocollo ha altre potenziali applicazioni negli studi sulle malattie della retina, tra cui la maculopatia miopica, una delle principali cause di cecità nei miopi, in cui l'RPE è stato implicato. Il vantaggio principale di questa tecnica è che è relativamente semplice e, una volta perfezionata, produce campioni RPE di alta qualità adatti per studi di biologia molecolare, compresa l'analisi dell'RNA.

L'analisi dei campioni RPE raccolti utilizzando il protocollo di cui sopra ha mostrato RNA ben conservato (RIN &gt;8.0, Figura 2B), con 240,2 ng ± 35,1 ng per occhio (n = 8, NanoDrop, Figura 2B). Per valutare ulteriormente la qualità dei campioni RPE isolati, in particolare l'assenza di contaminanti coroideali e sclerali, abbiamo esaminato l'espressione di geni rappresentativi per ciascuno di questi ultimi tessuti nei campioni RPE19. I c...

Descriviamo un metodo semplice ed efficiente per isolare le cellule dell'epitelio pigmentato retinico (RPE) dagli occhi di giovani cavie pigmentate. Questa procedura consente studi di biologia molecolare di follow-up sull'RPE isolato, comprese le analisi di espressione genica.

Isolamento delle cellule epiteliali pigmentate retiniche da occhi di porcellino d'India

This protocol describes the isolation of cells of the retinal pigment epithelium (RPE) from the eyes of young pigmented guinea pigs for potential ...

L'epitelio pigmentato retinico o RPE è fondamentale per la salute della retina. E studiare l'RPE isolato è fondamentale per la malattia della retina. Questo metodo di isolamento RPE dalla cavia, un modello di miopia popolare, aiuta a risolvere il problema impegnativo.Il vantaggio principale di questa tecnica è che è relativamente semplice e produce campioni RPE di alta qualità adatti per gli studi molecolari biologici, compresa l'analisi RPE. Seguendo perfettamente la tecnica dimostrata e osservando come manipolare gli strumenti di dissezione, si può padroneggiare rapidamente questa procedura con un po 'di pratica. Dopo aver eutanasia umana la cavia ed enuclemangiato gli occhi dell'animale, lavare immediatamente gli occhi trasferendoli in una capsula di Petri di 10 centimetri contenente soluzione salina tamponata con fosfato sterile o PBS.Dopo il lavaggio, trasferire gli occhi alla soluzione PBS fresca. Ora lavorando al microscopio da dissezione, utilizzare un ago calibro 18 per fare una piccola apertura iniziale nella sclera di un occhio, circa un millimetro dietro il confine limbare tra la cornea e la sclera. Usando le forbici, rimuovere il segmento anteriore, compresa la cornea,

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In questo video, mostriamo una procedura per ottenere cellule epiteliali pigmentate oculari da un modello di coniglio. Le cellule sono utili nello sviluppo di strategie terapeutiche per le malattie degenerative della retina.

Isolamento delle cellule IPE e RPE: una tecnica per ottenere cellule epiteliali del pigmento oculare dall'occhio di coniglio

In questo video descriviamo una tecnica per isolare le cellule epiteliali pigmentate dell'iride e della retina dagli occhi dei suini per ottenere le loro colture primarie per studi in vivo ed ex vivo. Queste cellule pigmentate potrebbero essere geneticamente modificate per studiare approcci rigenerativi per il trattamento dei disturbi oculari.

Isolamento di cellule IPE e RPE: una tecnica per ottenere cellule epiteliali pigmentate da occhio suino isolato

Questo video mostra la procedura per isolare le cellule epiteliali pigmentate retiniche, o RPE, e le cellule epiteliali pigmentate dell'iride, o IPE, dagli occhi bovini raccolti. Le cellule isolate possono essere coltivate per studiare il loro ruolo nel trattamento delle malattie oculari.

Isolamento delle cellule RPE e IPE dall'occhio bovino: una procedura per raccogliere e coltivare cellule epiteliali pigmentate primarie bovine

Qui viene presentato un protocollo per isolare e trasfezionare le cellule epiteliali primarie dell'iride e del pigmento retinico da vari mammiferi (topi, ratti, conigli, suini e bovini). Il metodo è ideale per studiare approcci di terapia genica oculare in vari set-up per analisi ex vivo e studi in vivo trasferibili all'uomo.

Isolamento, coltura e ingegneria genetica delle cellule epiteliali pigmentate primarie dei mammiferi per la terapia genica non virale

Questo manoscritto descrive un protocollo semplificato per l'isolamento delle cellule dell'epitelio pigmentato retinico (RPE) dagli occhi dei topi in modo graduale. Il protocollo include l'enucleazione e la dissezione degli occhi di topo, seguita dall'isolamento, dalla semina e dalla coltura delle cellule RPE.

Isolamento delle cellule primarie dell'epitelio pigmentato retinico del topo

Questo protocollo delinea la procedura per ottenere e coltivare cellule epiteliali pigmentate retiniche primarie (RPE) da occhi suini di provenienza locale. Queste cellule rappresentano un'alternativa di alta qualità alle cellule staminali e sono adatte per la ricerca retinica in vitro .

Isolamento di cellule epiteliali pigmentate retiniche primarie suine per la modellazione in vitro

L'epitelio pigmentato retinico (RPE) agisce come una barriera cruciale tra la coroide e la retina, promuovendo la salute e la funzione dei tipi di cellule retiniche, come i fotorecettori. In questo articolo, descriviamo un protocollo semplice ed efficace per isolare e coltivare l'EPR murino adulto.

Un metodo semplificato per l'isolamento e la coltura di cellule epiteliali pigmentate retiniche da topi adulti

In questo video ci dimostra come isolare le cellule staminali della retina dalla epitelio ciliare dell'occhio del mouse e farle crescere in coltura per formare clonale sfere della retina. Le sfere che sono isolati possiedono le caratteristiche cardine delle cellule staminali: l'auto-rinnovamento e multipotenzialità.

Isolamento di cellule staminali della retina dalla Eye mouse

Un modo rapido, robusto di isolare vitali cellule staminali epiteliali adulte di pelle umana è descritta. Il metodo utilizza la digestione enzimatica della matrice di collagene della pelle, seguita da spiumatura dei follicoli piliferi e l'isolamento delle sospensioni singola cella o frammenti di tessuto per la coltura cellulare.

Isolamento e la coltura di cellule staminali epiteliali da pelle umana

I microRNA (miRNA) profili di staminali umane pluripotenti indotte-(iPS), cellule dell'epitelio pigmentato retinico (RPE) derivati ​​da umana indotta staminali pluripotenti (iPS) (iPS-RPE), e RPE fetale, sono stati confrontati.

MicroRNA Expression Profili di cellule iPS umane, dell&#39;epitelio pigmentato retinico derivate da iPS, e fetale dell&#39;epitelio pigmentato retinico

Impara un metodo semplice per isolare le cellule epiteliali pigmentate retiniche da occhi di porcellino d'India. Questa tecnica fornisce campioni di alta qualità adatti per studi di biologia molecolare e analisi dell'espressione genica.

Isolamento delle cellule epiteliali pigmentate retiniche da occhi di porcellino d'India

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