Di seguito viene presentato un protocollo per misurare la cinetica del tessuto adiposo in vivo nell'uomo utilizzando il metodo di marcatura con deuterio (2H).
È richiesta un abbonamento a JoVE per visualizzare questo contenuto. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Articolo metodologico
Di seguito viene presentato un protocollo per misurare la cinetica del tessuto adiposo in vivo nell'uomo utilizzando il metodo di marcatura con deuterio (2H).
Il tessuto adiposo bianco è un organo altamente plastico necessario per mantenere l'omeostasi energetica di tutto il corpo. La massa del tessuto adiposo e i cambiamenti nella massa o distribuzione del grasso sono regolati da cambiamenti nella sintesi e nella scomposizione (cioè nel turnover) delle cellule adipose e dei triacilgliceroli. L'evidenza suggerisce che il modo e l'entità dell'espansione del tessuto adiposo sottocutaneo (cioè ipertrofia vs. iperplasia) e il turnover possono influenzare la salute metabolica, poiché l'adipogenesi è stata implicata nella patogenesi dell'obesità e delle malattie correlate. Nonostante il potenziale ruolo del turnover adiposo nella salute umana, c'è una mancanza di conoscenza sulla cinetica in vivo delle cellule adipose. Ciò è dovuto, in parte, al lento tasso di turnover delle cellule nel tessuto adiposo e alla complessità pratica di marcare direttamente i loro precursori metabolici in vivo. In questo articolo, descriviamo i metodi per misurare la cinetica adiposa in vivo e i tassi di turnover nell'uomo attraverso il consumo di acqua marcata con deuterio (2H). L'incorporazione di 2H nelle frazioni desossiribonucleotidiche del DNA nei pre-adipociti e negli adipociti fornisce una misura accurata della formazione e della morte cellulare (turnover adiposo). Nel complesso, si tratta di un approccio innovativo alla misurazione della cinetica adiposa in vivo e rappresenta un sostanziale allontanamento da altre valutazioni in vitro .
L'obesità è una malattia caratterizzata da un eccesso di tessuto adiposo bianco (AT) ed è un fattore di rischio significativo per lo sviluppo del diabete di tipo II e delle malattie cardiovascolari1. L'AT bianco è un organo altamente plastico che immagazzina energia sotto forma di trigliceridi (TG) ed è essenziale per l'omeostasi metabolica2. L'AT bianco mantiene la capacità di espandersi, ridursi e rimodellarsi durante l'età adulta3 e la massa dell'AT è determinata da cambiamenti dinamici nel volume degli adipociti (tramite sintesi e degradazione dei TG)....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
L'Institutional Review Board (IRB) del Pennington Biomedical Research Center ha approvato tutte le procedure (#10039-PBRC) e tutti i soggetti umani hanno dato il consenso informato scritto.
1. Otto settimane 2ore2O-marcature
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Il protocollo di marcatura 2H2O (sezione 1) mantiene l'arricchimento nell'acqua corporea vicino al plateau 2H nell'intervallo 1,0%-2,5% per la durata del periodo di marcatura di 8 settimane10, come mostrato nella Figura 2. Uno studio precedente ha utilizzato il protocollo di marcatura 2H2O per valutare la cinetica adiposa attraverso l'incorporazione di 2H nel DNA delle cellule adipose, come des.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Le valutazioni in vivo sono necessarie per fornire nuove conoscenze sulle dinamiche del turnover dell'AT bianco e sul suo ruolo nell'obesità e nelle malattie metaboliche correlate, poiché le valutazioni in vitro non comprendono l'ambiente naturale dell'AT. Sebbene l'uso della datazione retrospettiva al radiocarbonio per valutare la dinamica adiposa sia stato informativo 7,25, questo approccio non è adatto per ca.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Gli autori non hanno conflitti di interesse da dichiarare.
Gli autori ringraziano il Mass Spectrometry Core presso il Pennington Biomedical Research Center.
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| 1-metilimidazolo | MilliporeSigma | 336092 | |
| 2H2O | Sigma Aldrich | ||
| Anidride acetica | Aldridge | 539996 | |
| ACK Lysing Buffer (tampone di lisi eritrocitaria) | Quality Biological Inc (VWR) | 10128-802 | |
| Agilent 6890/5973 GC/MS | Agilent | ||
| Anti-umano CD31 (PECAM-1) Biotina | Invitrogen | 13-0319-82 | |
| Anti-umano CD34 Biotina | Invitrogen | 13-0349-82 | |
| Anti-umano CD45 | BioLegend | 304004 | |
| Soluzione antibiotica antimicotica | MilliporeSigma | A5955 | |
| Collagenasi di tipo 1 | Worthington Biochemical Corporation | LS004196 | |
| Desossiribosio (2-deossi d-ribosio) | MilliporeSigma | 31170 | |
| Ossido di deuterio | MilliporeColonna Sigma | 756822 | |
| DB-225 (30m, 0.25mm, 0.25um) | J& W Scientific | 122-2232 | |
| Diclorometano (DCM) | MilliporeSigma | 34856 | |
| DNA standard (DNA del timo di vitello) | MilliporeSigma | D4764 | |
| Dneasy Blood and Tissue Kit (kit di estrazione del DNA) | Qiagen | 69504 | |
| Easy Sep Kit di biotina umana | Tecnologie delle cellule staminali | 17663 | |
| EasySep Human CD14 Selezione positiva Cocktail | Stem Cell Technologies | 18058C | |
| Acetato di etile | Fisher | EX0241-1 | |
| Falcon 5 mL Provetta in polistirene a fondo tondo | VWR | 60819-295 | |
| Ficoll-Paque Plus | MilliporeSigma | GE17-1440-02 | |
| Fiale GC (2 mL) | Fisher | C-4011-1W | |
| Inserti per fiale GC | Fisher | C-4011-631; C-4012-530 | |
| Acido acetico glaciale | Fisher | AC14893-0010 | |
| Provette di vetro (per idrolisi) | Fisher | 14-959-35AA | |
| Tampone HEPES | ThermoFisher | 15630080 | |
| Hyclone Water, grado di biologia molecolare | Thomas Scientific | SH30538.02 | |
| MEM alpha | Fisher Scientific | 32561-037 | |
| PFBHA (o-(2, 3, 4, 5, 6)-penatfluorobenzilidrossilamina cloridrato) | MilliporeStrisce indicatrici di pH Sigma | 194484 | |
| 987618 | |||
| Acido fosfatasi | Calbiochem (VWR) | 80602-592 | |
| S1 nucleasi (da Aspergillus oryzae) | MilliporeSigma | N5661 | |
| Solfato di sodio | MilliporeSigma | 23913 |
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Questo articolo è stato pubblicato
Video in arrivo