Un protocollo per la costruzione di un modello di ferita di ratto del diabete di tipo 1

Molti dettagli del processo di modellazione della ferita del diabete di tipo 1 sono soggetti a errori. È una sfida difficile per i ricercatori esperti. Di conseguenza, è necessario utilizzare questo protocollo.

Nel modo più semplice possibile, questa tecnica può replicare efficacemente alcune caratteristiche delle ferite diabetiche croniche come l'assenza di guarigione delle ferite, la riepitelizzazione ritardata e la ridotta angiogenesi. La soluzione di streptozotocina deve essere utilizzata immediatamente dopo la preparazione. Quando crei la ferita, guarda che la dimensione e la posizione della ferita devono essere regolate.

Iniziare sciogliendo la polvere di streptozotocina in una quantità appropriata di 0,1 moli per litro di tampone citrato di sodio per ottenere una concentrazione dell'1% e agitarla per 30 secondi usando un oscillatore di droga prima di metterla in una bella scatola. Per l'iniezione intraperitoneale di soluzione di streptozotocina all'1%, afferrare il ratto ed esporre la pelle addominale nel sito di iniezione. Disinfettare il sito di iniezione due volte usando un batuffolo di cotone imbevuto di alcool al 75% e posizionare la testa del topo sotto l'addome.

Inserire l'ago parallelamente alla linea mediana addominale a 45 gradi. Quindi ridurre l'angolo dell'ago a 30 gradi e inserire da due a tre millimetri. Tirare delicatamente il tappo dell'ago, iniettare la soluzione di streptozotocina ed estrarre l'ago prima di applicare un batuffolo di cotone.

Per misurare i livelli causali di glucosio nel sangue alle 9:00 del giorno 3 e del giorno 7, trova la posizione della vena caudale. Disinfettare la coda di ratto due volte usando il 75% di alcol prima di perforare la vena caudale per indurre sanguinamento e misurare la glicemia usando un glucometro. Una volta fatto, fermare l'emorragia con un batuffolo di cotone.

Rasare l'area di 5 per 5 centimetri sul lato dorsale del ratto con un rasoio elettrico un giorno prima della modellazione della ferita. Pulire l'area rasata con un batuffolo di cotone salino normale caldo e lasciarlo asciugare per applicare la crema depilatoria per cinque minuti. Pulire la zona con una garza e lavare eventuali residui di crema depilatoria con soluzione salina normale calda.

Quindi disinfettare la pelle dorsale due volte usando batuffoli di cotone imbevuti di iodio e alcol al 75% nei turni alternativi. Dopo l'essiccazione, tagliare la pelle con un punch bioptico circolare di 20 millimetri di diametro. Tendere la pelle con una pinza e quindi utilizzare forbici chirurgiche per rimuovere l'intero spessore della pelle lungo i segni di taglio del punzone.

Una volta fatto, fermare l'emorragia con un normale batuffolo di cotone salino. Coprire la ferita con una garza di vaselina. Il diabete è stato indotto in tutti i ratti dopo tre giorni di iniezione di streptozotocina, con un livello di glucosio nel sangue superiore a 16,7 millimoli per litro.

Il livello di glucosio è stato stabilizzato cinque settimane dopo l'induzione. Il peso del gruppo diabetico è aumentato gradualmente dopo l'iniezione di streptozotocina. Il peso è diminuito nella settimana 3 e lentamente è aumentato di nuovo dalla settimana 4.

Al contrario, il peso del ratto di gruppo normale è aumentato costantemente. Il loro peso medio dopo i tre giorni di induzione del diabete era superiore al gruppo diabetico. L'analisi macroscopica eseguita nei giorni 7 e 14 dopo il ferimento ha rivelato che la riepitelizzazione era più pronunciata nei ratti nel gruppo normale rispetto al gruppo diabetico.

I risultati quantitativi del giorno 7 e del giorno 14 hanno rivelato che il tasso di guarigione delle ferite era significativamente inferiore nel gruppo diabetico rispetto al gruppo normale. Tuttavia, il giorno 14, il tasso di guarigione delle ferite era superiore al 90% nel gruppo diabetico. Le ferite diabetiche hanno mostrato una perdita parziale dei follicoli piliferi e delle ghiandole sebacee con meno capillari visibili.

Nell'angiogenesi della ferita analizzata mediante immunocolorazione CD31, la densità ottica media dell'espressione di CD31 ha mostrato che l'angiogenesi nel sito della ferita era significativamente più alta nel gruppo normale rispetto al gruppo diabetico. Quando si modella la ferita, assicurarsi che la pelle dello spessore anteriore venga rimossa, compresa l'epidermide, il derma e il tessuto sottocutaneo.