Name: Ablazione del gambo oculare per aumentare la maturazione ovarica nei granchi del fango (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-03-31T13:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 28 s
Description: Impara l'ablazione del gambo oculare per stimolare la maturazione ovarica nei granchi del fango femmine. Questa tecnica aumenta significativamente il tasso di maturazione senza compromettere la sopravvivenza degli animali.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Questo studio è stato sostenuto dal Ministero della Pubblica Istruzione, Malesia, nell'ambito del programma Higher Institution Centre of Excellence (HICoE), Malesia, accreditato presso l'Istituto di acquacoltura tropicale e pesca, Universiti Malaysia Terengganu (Vot No. 63933 & Vot No. 56048). Riconosciamo il sostegno di Universiti Malaysia Terengganu e Sayap Jaya Sdn. Bhd. attraverso il Private Partnership Research Grant (Vot. No. 55377). Viene inoltre riconosciuta una posizione di Academic Fellow aggiunto da Universiti Sains Malaysia a Khor Waiho e Hanafiah Fazhan.

Questo protocollo segue il Codice di condotta malese per la cura e l'uso di animali per scopi scientifici delineato dalla Laboratory Animal Science Association of Malaysia. Il sacrificio dei campioni sperimentali è stato fatto secondo la National Institutes of Health Guide for the Care and Use of Laboratory Animals (NIH Publications No. 8023, revised 1978). Granchi del fango femmina sessualmente prematuri (granchio del fango arancione S. olivacea) sono stati raccolti dal mercato locale (5 ° 66 ′ 62 ′ N, 102 ° 72 ′ 33 ′ E) nelle zone umide di Setiu in Malesia. La specie di granchio del fango è stata identificata in base alle caratteristiche morfologiche1.
1. Raccolta e disinfezione dei campioni
<ol><li>Raccogliere granchi del fango femmina sani, attivi e prematuri (Figura 1). NOTA: I granchi femmina prematuri hanno lembi addominali triangolari e di colore chiaro insieme a una gamma CW di 80-85 mm.</li>
	<li>Lavare i granchi con acqua di rubinetto clorata (acqua dolce) per rimuovere detriti e parassiti osmofili.</li>
	<li>Immergere i granchi in 150 ppm di formaldeide con 20 ppt di salinità per 30 min.</li>
	<li>Mantenere un'aerazione continua e delicata con airstones durante il trattamento con formaldeide. La fonte di aerazione può provenire da una linea di aerazione centrale o da una pompa di aerazione per acquari.</li>
	<li>Lavare i granchi con acqua di mare corrente per rimuovere eventuali residui di formaldeide.</li>
</ol><img alt="Confronto tra la morfologia del granchio femmina prematura e quella matura; Riferimento scala taglie incluso; biologia marina." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65039/65039fig01.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 1"> Figura 1: Morfologia addominale delle femmine di granchi del fango utilizzate per identificare le fasi di maturazione sessuale. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65039/65039fig01large.jpg" target="_blank">Fare clic qui per visualizzare una versione ingrandita di questa figura.</a>
2. Acclimatazione
<ol><li>Trasferire ogni femmina disinfettata in un serbatoio circolare separato da 32 litri.</li>
	<li>Allevare le femmine per 3 giorni in 20 ppt di salinità e continuare a nutrirsi due volte al giorno (mattina 09:00 e sera 20:00) con pesce marino tritato a circa il 4%-5% del peso corporeo del granchio.</li>
	<li>Rimuovere il mangime in eccesso e non consumato sifonando prima della poppata mattutina.</li>
	<li>Scambia il 10% dell'acqua di mare che alleva granchi (20 ppt) al giorno.</li>
</ol>3. Muta indotta per la maturità sessuale
<ol><li>Tagliare tutte le gambe tranne le gambe da nuoto usando forbici sterilizzate.<ol><li>Prendi il granchio con una rete a paletta e tieni il granchio con cura. Tagliare prima entrambi i chelipedi e poi le gambe che camminano alla seconda articolazione usando le forbici. Il granchio automatizzerà automaticamente le appendici danneggiate. L'anestesia non è richiesta per l'autotomia degli arti.</li>
	</ol></li>
	<li>Lavare il granchio in acqua dolce subito dopo l'autotomia degli arti.</li>
	<li>Trasferire singolarmente i granchi autotomizzati in cesti di plastica perforati (28 cm L x 22 cm L x 7 cm A) e metterli in una vasca in fibra di vetro (305 cm L x 120 cm L x 60 cm A). NOTA: Due cestini possono essere legati e agganciati insieme. Il cesto superiore viene utilizzato come copertura in modo che il granchio non possa fuoriuscire dal cesto.</li>
	<li>Utilizzare un sistema di acquacoltura a ricircolo (RAS) con salinità di 20 ppt e una profondità dell'acqua di almeno 10 cm per garantire che l'intero cestello di plastica sia immerso.</li>
	<li>Continuare a nutrire il granchio femmina autotomizzato con pesce marino tritato due volte al giorno al 5% -7% del peso corporeo del granchio.</li>
	<li>Allevare i granchi fino a quando non maturano sessualmente attraverso la muta (35 giorni). NOTA: La muta indotta può essere saltata per la maturazione ovarica commerciale e la produzione di semi con granchi del fango femmina maturi selvatici. Le femmine mature raccolte in natura devono essere acclimatate e sottoposte direttamente all'anestesia da shock freddo e alla successiva ablazione del gambo oculare.</li>
</ol>4. Anestesia
<ol><li>Seleziona femmine sessualmente mature con un lembo addominale di forma ovale di colore scuro con un CW &gt;86 mm (Figura 1).</li>
	<li>Prendi i granchi con una rete a paletta e tienili individualmente in piccoli acquari per l'anestesia.</li>
	<li>Dopo 5 minuti di periodo di acclimatazione, aggiungere 2-fenossietanolo (2-PE) a 2 ml / L in ciascun acquario e consentire 15 minuti di trattamento anestesiologico.</li>
	<li>Assicurati che i granchi siano completamente anestetizzati dalla mancanza di movimento spontaneo.</li>
</ol>5. Ablazione del gambo oculare
<ol><li>Tecnica di cauterizzazione<ol><li>Eseguire tutte le procedure sopra un tavolo e in un'area aperta.</li>
		<li>Prendi un'asta di metallo nichel-acciaio a testa piatta (ad esempio, un cacciavite) con un manico di legno o plastica e copri il manico con un asciugamano di cotone bagnato.</li>
		<li>Sterilizzare due pinze chirurgiche in acciaio inossidabile in autoclave.</li>
		<li>Preparare il 70% di etanolo in un flacone spray e tenerlo lontano da qualsiasi fonte legata al fuoco, come la fiamma ossidrica e il cacciavite rovente. Avere carta velina pronta per l'uso. NOTA: L'etanolo è altamente infiammabile. Mantenere una distanza di sicurezza dalle fonti di fuoco.</li>
		<li>Collegare saldamente una fiamma ossidrica a una bombola di gas (butano). ATTENZIONE: Seguire le istruzioni riportate sulla fiamma ossidrica e sulla bombola del gas. Assicurarsi che la fiamma ossidrica sia spenta quando si collega con la bombola del gas. Leggere e seguire tutte le precauzioni di sicurezza antincendio menzionate sulla bombola del gas.</li>
		<li>Indossare guanti di cotone spessi per evitare lesioni da oggetti caldi.</li>
		<li>Sottoporre la punta dell'asta metallica al fuoco della fiamma ossidrica fino a quando l'asta metallica è rosso vivo.</li>
		<li>Coprire il granchio anestetizzato con un asciugamano di cotone bagnato. NOTA: Coprire le antenne del granchio per evitare danni inutili.</li>
		<li>Tieni un occhio del granchio con una pinza sterilizzata. NOTA: Sterilizzare la pinza in autoclave per il primo utilizzo e disinfettare utilizzando etanolo al 70% per l'uso successivo su altri granchi.</li>
		<li>Tenere la punta piatta di metallo rovente sull'occhio del granchio e premere leggermente per circa 10-15 s fino a quando il gambo oculare diventa di colore arancione o rosso-arancio. Fare attenzione quando si esegue questo passaggio per evitare danni alle strutture adiacenti. NOTA: Sono necessarie due persone per eseguire l'ablazione del gambo oculare seguendo il metodo di cauterizzazione: una per tenere il granchio e un'altra per eseguire la procedura di ablazione.</li>
		<li>Disinfettare la pinza con spray etanolo al 70% per garantire che non vi sia contaminazione incrociata tra i granchi. NOTA: eseguire questo passaggio solo attendendo almeno 5 minuti dopo la procedura di ablazione del peduncolo oculare per assicurarsi che le pinze siano raffreddate prima della disinfezione utilizzando etanolo al 70% per prevenire potenziali rischi di incendio.</li>
		<li>Dopo aver eseguito l'ablazione del gambo oculare su tutti i granchi, immergere l'asta metallica calda in acciaio nichelato (cacciavite) nell'acqua del rubinetto.</li>
		<li>Disinfettare l'asciugamano prima del riutilizzo. È possibile utilizzare più asciugamani per risparmiare tempo. NOTA: Lavare l'asciugamano con acqua del rubinetto e immergerlo in 30 ppm di acqua clorata per 5 minuti. Quindi, lavare nuovamente l'asciugamano con acqua di rubinetto e immergerlo in una soluzione di tiosolfato di sodio da 1 g / L.</li>
		<li>Tenere la fiamma ossidrica in un luogo sicuro dopo averla spenta e attendere che ritorni alla temperatura ambientale (circa 30 minuti) prima di scollegarla.</li>
	</ol></li>
	<li>Tecnica chirurgica<ol><li>Eseguire la procedura in un'area ben ventilata.</li>
		<li>Sterilizzare due forbici chirurgiche e pinze in autoclave.</li>
		<li>Versare 50 ml di etanolo al 70% in un becher di vetro da 100 ml.</li>
		<li>Indossare guanti di cotone spessi.</li>
		<li>Tenere il granchio anestetizzato e coprirlo con un asciugamano di cotone bagnato.</li>
		<li>Tieni un occhio del granchio con una pinza sterilizzata.</li>
		<li>Tagliare rapidamente il gambo oculare usando forbici chirurgiche sterilizzate. NOTA: L'emolinfa può essere persa dalla parte ferita del granchio.</li>
		<li>Immergere le forbici e le pinze in etanolo al 70% dopo ogni utilizzo e asciugarle con carta velina prima di riutilizzarle.</li>
	</ol></li>
</ol>6. Cura post-anestesia
<ol><li>Preparare 20 ppt di acqua di mare filtrata e conservare in un serbatoio sopraelevato con aerazione continua.</li>
	<li>Collegare un tubo flessibile con il serbatoio aereo per il flusso d'acqua gravitazionale.</li>
	<li>Subito dopo l'ablazione del gambo oculare, posizionare il granchio nel cestello e sottoporlo all'acqua di mare corrente (temperatura dell'acqua ambiente: 28 °C) dalla vasca sopraelevata.</li>
	<li>Mantenere l'acqua di mare che scorre e monitorare il granchio fino a quando non può muoversi spontaneamente, il che indica il recupero dall'anestesia. NOTA: l'acqua di mare può essere preparata in un serbatoio di terra e una pompa dell'acqua sommergibile può essere utilizzata per il flusso d'acqua.</li>
	<li>Tenere i granchi singolarmente in 20 ppt di acqua di mare con aerazione in un acquario per 30 minuti per ulteriori osservazioni. NOTA: I granchi recuperati saranno coltivati individualmente nel successivo processo di coltura dei riproduttori.</li>
</ol>7. Osservazione della maturazione ovarica
<ol><li>Allevamento di riproduttori<ol><li>Trasferire i granchi maturi in singole vasche circolari da 32 litri.</li>
		<li>Continuare a nutrirsi con pesce marino tritato (congelato a -20 °C) due volte al giorno (mattina 09:00 e sera 20:00) e rimuovere il mangime non consumato prima della poppata mattutina.</li>
		<li>Allevare i riproduttori singolarmente per 30 giorni con una salinità di 20 ppt.</li>
		<li>Rimuovere le feci e scambiare il 10% dell'acqua di mare (20 ppt) al giorno.</li>
	</ol></li>
	<li>Dissezione<ol><li>Pulire un vassoio da dissezione, forbici e pinze con etanolo al 70%.</li>
		<li>Anestetizzare le femmine individualmente con il metodo di anestesia ad immersione 2-PE.</li>
		<li>Seleziona casualmente le femmine appena mature (dopo la muta delle femmine premature) che non hanno subito l'ablazione oculare per confermare i loro stadi gonadici.</li>
		<li>Sacrificare individualmente tutte le femmine sperimentali ablate dagli occhi e identificare gli stadi di maturazione delle gonadi. Distruggi i gangli toracici del granchio usando un punteruolo sterile affilato. Rimuovere prima il carapace superiore e poi l'epatopancreas per rendere visibile l'ovaio. Osservare il colore dell'ovaio e identificare lo stadio di maturazione ovarica (Figura 2).</li>
	</ol></li>
	<li>Identificazione delle fasi di maturazione ovarica<ol><li>Osservare il colore dell'ovaio ad occhio nudo o sotto uno stereomicroscopio.</li>
		<li>Identificare le fasi di maturazione ovarica in base alla colorazione30: l'immaturo (stadio-1) mostra un colore bianco traslucido o crema; la maturazione precoce (stadio-2) mostra un colore da pallido a giallastro chiaro; iii) la prestagionatura (fase 3) presenta un colore da giallo ad arancio chiaro; e (iv) il completamente maturo (stadio-4) mostra un colore da arancione scuro a rossastro.</li>
	</ol></li>
</ol>

Nessuno degli autori ha conflitti di interesse.

Questo protocollo è stato sviluppato per l'ablazione del peduncolo oculare del granchio del fango, Scylla spp., e può essere applicato come metodo efficace per indurre la maturazione delle gonadi. Questo protocollo può essere facilmente replicato per la maturazione ovarica commerciale dei granchi del fango e può essere implementato per ridurre il periodo di latenza (tempo da una deposizione all'altra) nella produzione di semi di granchio del fango.
L'ablazione del gambo oculare dei cr...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/65039">Eyestalk Ablation to Increase Ovarian Maturation in Mud Crabs</a>. The Introduction, Protocol, Discussion and References were&#160;updated.

Erratum: Eyestalk Ablation to Increase Ovarian Maturation in Mud Crabs

Tutte e quattro le specie di granchio del fango appartenenti al genere Scylla sono specie di crostacei commercialmente importanti in acquacoltura 1,2. La crescita dei crostacei, compresi i granchi del fango, e la loro trasformazione dalla fase prematura (sub-adulta o pubertale) alla fase sessualmente matura (adulta) avviene attraverso un processo di muta che comporta lo spargimento periodico di esoscheletri più vecchi e più piccoli. La larghezza del carapace (CW), i chelipedi e le morfologie dei lembo addominale sono ampiamente utilizzati per determinare la maturità sessuale di Scylla spp. 3,4,5. Il processo di muta è regolato dall'azione di vari ormoni e richiede un'enorme quantità di energia6. Oltre al normale processo di muta, la perdita degli arti, volontariamente o indotta da fattori esterni, accelera la muta dei granchi senza influire sul loro tasso di sopravvivenza 7,8,9. Pertanto, l'autotomia degli arti è comunemente usata per l'induzione della muta nell'industria dell'allevamento di granchi di fango a guscio molle 7,9.
L'ablazione unilaterale o bilaterale del gambo oculare è per lo più popolare nei gamberi d'acqua dolce e nei gamberetti marini per la maturazione delle gonadi e la produzione di semi10,11,12,13. Le tecniche comuni di ablazione del gambo oculare nei crostacei includono quanto segue: (i) legatura alla base del gambo oculare usando una corda14,15; ii) cauterizzazione del peduncolo oculare mediante pinze calde o dispositivi di elettrocauterizzazione16; iii) rimozione o pizzicamento diretto del gambo oculare per lasciare una ferita aperta12; e (iv) rimozione del contenuto del gambo oculare attraverso l'incisione dopo aver tagliato la porzione distale dell'occhio con un rasoio17. Gli organi X del gambo oculare sono importanti organi endocrini nei crostacei in quanto regolano gli ormoni iperglicemici dei crostacei (CHH), gli ormoni che inibiscono la muta (MIH) e gli ormoni inibitori della vitellogenesi (VIH)6,18,19,20,21,22. Gli organi X del gambo oculare (o il complesso della ghiandola del seno) sintetizzano e rilasciano ormoni che inibiscono le gonadi (GIH), noti anche come ormoni che inibiscono la vitellogenesi (VIH), appartenenti alla famiglia degli ormoni neuropeptidici6. L'ablazione unilaterale o bilaterale del parlato oculare riduce la sintesi di GIH, determinando la dominanza degli ormoni stimolanti (cioè gli ormoni stimolanti le gonadi, GSH) e l'accelerazione del processo di maturazione ovarica nei crostacei23,24,25,26. Senza l'influenza di GIH dopo l'ablazione del gambo oculare, le femmine di crostaceo dedicano la loro energia allo sviluppo ovarico27. È stato riscontrato che l'ablazione unilaterale del gambo oculare è sufficiente per l'induzione della maturazione ovarica nei crostacei11 e che il gambo oculare ablato di gamberetti e granchi può rigenerarsi dopo diverse mute28. Ci sono quattro stadi di sviluppo ovarico registrati in Scylla spp.: i) immaturo (stadio-1), ii) maturazione precoce (stadio-2), iii) pre-maturazione (stadio-3) e iv) completamente maturo (stadio-4)29,30. Lo stadio ovarico immaturo si trova nelle femmine immature. Dopo la muta puberale e l'accoppiamento, l'ovaio immaturo inizia a svilupparsi e infine matura (stadio-4) prima di deporre leuova 31.
Un protocollo di ablazione del gambo oculare è essenziale per lo sviluppo dei riproduttori di granchi del fango e la produzione di semi. Nel mercato alimentare globale, i granchi di fango maturi con ovaie completamente mature (stadio-4) piuttosto che granchi con un contenuto muscolare più elevato sono preferiti dai consumatori e, quindi, hanno un valore commerciale più elevato, persino superiore ai maschi di grandi dimensioni. Non esiste un protocollo completo per l'ablazione del gambo oculare dei granchi del fango. Il protocollo di ablazione del gambo oculare in questo lavoro riduce al minimo lo stress utilizzando granchi completamente anestetizzati e riduce al minimo le lesioni fisiche al personale da morsi di granchio. Questo protocollo è facile ed economico. Qui presentiamo un protocollo per l'ablazione del peduncolo oculare di Scylla spp. che può indurre la maturazione della gonade. Sono state testate due tecniche di ablazione del peduncolo oculare (cauterizzazione e chirurgia) e le loro efficienze sono state confrontate in base al tasso di sviluppo gonadico delle femmine di granchi del fango.

<table><tbody><tr><td>Tubo di aerazione&nbsp;</td><td>Ming Yu Tre</td><td>N/A</td><td>acquario e negozio di animali</td></tr><tr><td>Airstone</td><td>Ming Yu Tre</td><td>N/A</td><td>acquario e negozio di animali</td></tr><tr><td>Macchina per autoclave</td><td>HIRAYAMA MANUFACTURING CORPORATION</td><td>N/A</td><td>MADE IN JAPAN</td></tr><tr><td>Polvere sbiancante (Hi-Chlon 70%)</td><td>Nippon Soda Co.Ltd, Giappone</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Fiamma ossidrica&nbsp;</td><td>MR D.I.Y. Group Berhad</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Serbatoio circolare (32L)</td><td>BEST PLASTIC INDUSTRY SDN. BHD.</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Guanti in cotone (spessi)&nbsp;</td><td>MR D.I.Y. Group Berhad</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Asciugamano in cotone</td><td>MR D.I.Y. Group Berhad</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Termometro digitale</td><td>Hanna Instrument</td><td>HI9814</td><td>Hanna&nbsp; Strumenti&nbsp; GroLine Idroponica Impermeabile pH / EC / TDS / Temp. Misuratore portatile HI9814</td></tr><tr><td>Calibro a corsoio digitale</td><td>INSIZE Co., Ltd.</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Vassoio di dissezione</td><td>Hatcheri AKUATROP&nbsp;</td><td>N / A</td><td>Centro di ricerca dell'Università della Malesia Terengganu</td></tr><tr><td>Flacone contagocce / Pipette di plastica</td><td>Contagocce Shopee Malesia</td><td>N / A</td><td>N / A</td></tr><tr><td>Etanolo 70%</td> <td>Thermo Scientific Chemicals</td><td>033361.M1</td><td>Diluito al 70% utilizzando acqua distillata doppia</td></tr><tr><td>Serbatoio in fibra di vetro (1 tonnellata)</td> <td>Hatcheri AKUATROP&nbsp;</td><td>N/A</td><td>Centro di ricerca dell'Università della Malesia Terengganu</td></tr><tr><td>Sabbia fine</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>raccolta dalla spiaggia del mare dell'Università della Malesia Terengganu Kit di</td></tr><tr><td>pronto soccorso</td><td>Watsons Malesia</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Barra metallica in acciaio al nichel a testa piatta (cacciavite)</td> <td>MR D.I.Y. Group Berhad</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Formaldeide</td><td>Thermo Scientific Chemicals</td><td>119690010</td><td></td></tr><tr><td>Bombola di gas (gas butano) per cannello</td><td>MR D.I.Y. Group Berhad</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Pistola accendigas (testa lunga)</td><td>MR D.I.Y. Group Berhad</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Bicchiere di vetro (100 mL))</td><td>Corning Life Sciences</td><td>1000-100</td><td></td></tr><tr><td>Borsa per il ghiaccio&nbsp;</td><td>Watsons Malaysia</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Cestini in plastica perforata&nbsp;</td><td>Eco-Shop Marketing Sdn. Bhd.</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Tubo in PVC 15mm</td><td>Bina Plastic Industries Sdn Bhd (HQ)</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Rifrattometro</td><td>ATAGO CO.,LTD.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Frigorifero</td><td>Sharp Corporation Giappone</td><td>N/A</td><td>Congelatore a pozzetto SHARP 110L - SJC 118</td></tr><tr><td>Scoop net</td><td>MR D.I.Y. Group Berhad</td><td></td><td>N/A</td></tr><tr><td>Seawater</td><td>Hatcheri AKUATROP&nbsp;</td><td>N / A</td><td>Centro di ricerca dell'Università della Malesia Terengganu</td></tr><tr><td>Tubo di sifone</td><td>MR D.I.Y. Group Berhad</td><td>N / A</td><td>N / A</td></tr><tr><td>Flacone spray</td><td>Mr. DIY Sdn Bhd</td><td>N / A</td><td>N / A</td></tr><tr><td>Pinza chirurgica in acciaio inossidabile</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Forbici chirurgiche in acciaio inox&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Pompa dell'acqua sommergibile&nbsp;</td><td>Modello AS</td><td>N/A</td><td>: Astro 4000</td></tr><tr><td>Tintura di soluzione di iodio&nbsp; (Iodio Povidone)</td><td>Farmasi Fajr Sdn Bhd</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Carta velina&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Acquario in plastica trasparente</td><td>Ming Yu Three</td><td>N/A</td><td>acquario e negozio di animali</td></tr><tr><td>Tavolo impermeabile</td><td>Hatcheri AKUATROP&nbsp;</td><td>N/A</td><td>Centro di Ricerca dell'Università della Malesia Terengganu</td></tr></tbody></table>

ablazione del gambo oculare per aumentare la maturazione ovarica nei granchi del fango

Eyestalk Ablation to Increase Ovarian Maturation in Mud Crabs

I granchi del fango (Scylla spp.) sono specie di crostacei commercialmente importanti che possono essere trovati in tutta la regione del Pacifico indo-occidentale. Durante la coltura, l'induzione della maturazione ovarica è importante per soddisfare la domanda dei consumatori di granchi di fango maturi e accelerare la produzione di semi. L'ablazione del gambo oculare è uno strumento efficace per migliorare la maturazione ovarica nei granchi del fango. Tuttavia, non esiste un protocollo standard per l'ablazione del gambo oculare dei granchi del fango. In questo studio vengono descritte due tecniche di ablazione del gambo oculare: cauterizzazione (l'uso di metallo caldo per ablare il gambo oculare di un granchio anestetizzato) e chirurgia (la rimozione del gambo oculare usando forbici chirurgiche). Prima dell'ablazione del peduncolo oculare, le femmine sessualmente mature (CW > 86 mm) sono state anestetizzate usando una borsa del ghiaccio (-20 ° C) con acqua di mare. Quando la temperatura dell'acqua ha raggiunto i 4 °C, la borsa del ghiaccio è stata rimossa dall'acqua. L'acqua di mare corrente (temperatura ambiente: 28 °C) è stata utilizzata per il recupero dall'anestesia immediatamente dopo l'ablazione del peduncolo oculare. La mortalità non si è verificata durante o dopo il processo di ablazione del peduncolo oculare. Il protocollo di ablazione del gambo oculare qui presentato ha accelerato la maturazione ovarica dei granchi del fango.

Maturazione delle gonadi Tessuti ovarici bianco crema (ovaie immature, stadio 1) sono stati trovati nel 100% delle femmine sezionate (n = 6) prima di eseguire l'ablazione del gambo oculare (Figura 2). Il tasso di maturazione delle gonadi dei granchi femmina ablati con gambo oculare (n = 63; 31 femmine con la tecnica di cauterizzazione e 32 femmine con la tecnica chirurgica) era più alto rispetto ai granchi femmina che non sono stati sottoposti ad ablazione del gambo ocula...

Due protocolli di ablazione del peduncolo oculare (cioè approcci di cauterizzazione e chirurgia) sono stati eseguiti su granchi femmina anestetizzata. L'ablazione del gambo oculare dei granchi del fango ha accelerato la maturazione delle ovaie senza diminuire il tasso di sopravvivenza.

Ablazione del gambo oculare per aumentare la maturazione ovarica nei granchi del fango

Mud crabs (Scylla spp.) are commercially important crustacean species that can be found throughout the Indo-West Pacific region. During culture, the ...

Il protocollo descritto riduce al minimo lo stress durante l'ablazione del gambo oculare dei granchi del fango, riducendo così l'insorgenza di mortalità dovuta all'ablazione del peduncolo oculare. L'efficienza temporale è la chiave per ridurre al minimo lo stress per gli animali. Assicurati che tutto sia pronto prima di eseguire la procedura.Inizia lavando i granchi del fango femmina sani, attivi e prematuri con acqua di rubinetto clorata per rimuovere eventuali detriti e parassiti. Immergere i granchi nella formaldeide per 30 minuti. Garantire un'aerazione continua e delicata con pietre d'aria durante il trattamento con formaldeide.Quindi, utilizzare acqua di mare corrente per lavare i granchi per rimuovere qualsiasi residuo di formaldeide. Per eseguire la cauterizzazione del gambo dell'occhio del granchio, iniziare riscaldando la punta di un'asta di metallo con una fiamma ossidrica fino a quando l'asta è rosso vivo. Coprire un granchio anestetizzato con un asciugamano di cotone bagnato e tenere un occhio del granchio con una pinza sterilizzata.Premere la punta di metallo rovente sull'occhio del granchio per circa 10-15 secondi fino a quando il gambo oculare diventa di colore arancione o arancione rossastro. Disinfettare le pinze con etanolo al 70% e pulirle con carta velina sterile per garantire che non vi siano contaminazioni incrociate tra i granchi. Dopo aver eseguito l'ablazione su tutti i granchi, immergere l'asta di metallo nell'acqua del rubinetto.Per eseguire l'ablazione chirurgica, tenere il granchio anestetizzato usando spessi guanti di cotone e coprirlo con un asciugamano di cotone bagnato. Usa una pinza sterile per tenere un occhio del granchio e taglia rapidamente il gambo oculare con le forbici chirurgiche. Dopo l'intervento chirurgico, preparare un serbatoio sopraelevato con 20 parti per mille acqua di mare filtrata con aerazione continua.Collegare un tubo flessibile con il serbatoio per il flusso di acqua gravitazionale. Metti il granchio in un cesto e sottoponilo all'acqua di mare corrente dal serbatoio sopraelevato. Monitorare il granchio sotto l'acqua di mare che scorre fino a quando non può muoversi spontaneamente.Metti i granchi individualmente in un altro acquario con acqua di mare per 30 minuti per ulteriori osservazioni. Seleziona casualmente le femmine appena mature che non hanno subito l'ablazione del peduncolo oculare. Dopo aver rimosso il carapace superiore e l'epatopancreas, osservare e identificare la fase di maturazione dell'ovaio di granchio.Le fasi di maturazione ovarica possono essere identificate in base alla loro colorazione, con la fase immatura uno traslucida o bianco crema, la fase due di maturazione precoce da pallida a giallo chiaro, la fase tre pre-maturazione da giallo a arancione chiaro e la fase quattro completamente matura da arancione scuro a rossastro. Il tasso di maturazione delle gonadi era più alto nelle femmine ablate con gli occhi rispetto a quelle che non erano ablate. La più alta percentuale di ovaie al terzo stadio è stata trovata nei granchi femmina ablati negli occhi.L'analisi unidirezionale della varianza ha mostrato differenze significative tra le fasi sperimentali di maturazione ovarica dei granchi femmina. Il gruppo di controllo aveva una maggiore prevalenza di granchi femmina immaturi rispetto ai gruppi ablati. Solo i gruppi ablati sono stati in grado di produrre granchi femmina di stadio quattro da uno stadio immaturo 30 giorni dopo il trattamento.È importante assicurarsi che il gambo oculare della granceola del fango sia stato completamente ablato dopo la cauterizzazione o la tecnica chirurgica. L'ablazione del gambo oculare consente agli allevatori di crostacei di indurre facilmente la maturazione ovarica e la muta. Consente inoltre ai ricercatori di studiare ulteriormente il ruolo del gambo oculare nella regolazione della riproduzione del granchio del fango.

eyestalk-ablation-to-increase-ovarian-maturation-in-mud-crabs

Research

Ricerca

JoVE Journal

Biology

Biologia

Fertilizzazione Ovociti di Xenopus Utilizzando il metodo di trasferimento Host

Il hawaiensis anfipode Parhyale è un organismo modello promettente per studi di embriologia crostacei e sviluppo artropodi comparativa e l'evoluzione. Questo protocollo descrive un metodo per la rimozione manuale dei singoli blastomeri da embrioni precoci stadio di clivaggio Parhyale.

Ablazione di una singola cella da otto cellule embrioni dei crostacei anfipodi<em&gt; Parhyale hawaiensis</em

Descriviamo i metodi di manipolazione degli ovociti immaturi di Xenopus laevis, la maturazione in vitro degli ovociti in ovuli e l'iniezione intracitoplasmatica di spermatozoi. Questo protocollo consente la degradazione di alcune proteine materne e la sovraespressione di geni di interesse alla fecondazione, e quindi è prezioso per studiare il ruolo di fattori specifici nello sviluppo embrionale precoce.

Manipolazione e<em&gt; In Vitro</em&gt; Maturazione di<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; ovociti, seguito da Iniezione intracitoplasmatica di spermatozoi, per studiare lo sviluppo embrionale

Descriviamo un sistema di ovociti e cappucci animali di Xenopus per il clonaggio dell'espressione di geni in grado di indurre una risposta in un ectoderma competente, e discutiamo le tecniche per la successiva analisi di tali geni. Questo sistema è utile nell'identificazione funzionale di un'ampia gamma di prodotti genici.

Clonazione funzionale utilizzando un<em&gt; Xenopus</em&gt; Ovociti Expression System

Lo studio della biologia anfibia fornisce preziose informazioni sui processi riproduttivi, fisiologici, embrionali e di sviluppo che guidano organismi di molti gruppi tassonomici. Qui, presentiamo una guida completa su diverse metodologie che possono essere utilizzate per studiare il controllo ovarico e il monitoraggio negli anfibi.

Tecniche riproduttive per il monitoraggio e il controllo ovarico negli anfibi

Questo protocollo descrive gli approcci per il rilevamento e la quantificazione di grandi estrusioni aggregate e/o organelle (4 m) prodotte dalle cellule C. elegans sotto forma di esopher legati alla membrana. Descriviamo i ceppi, le condizioni di crescita, i criteri di punteggio, i tempi e le considerazioni di microscopia necessarie per facilitare la dissezione di questo meccanismo di espulsione dei detriti.

Approcci quantitativi per il punteggio in vivo Neuronal Aggregate e Organelle Extrusion in Grandi Vesicles esopher in C. elegans

Questo protocollo descrive la costruzione di un sistema di microiniezione a basso costo, il suo impianto stereotassico in strutture cerebrali profonde e la procedura per microiniezioni tempori di tetrodotossina in ratti svegli e sfrenati. L'obiettivo è quello di rivelare la partecipazione delle strutture ipotalamiche nella regolazione dell'ovulazione inibendo la loro attività neurale.

Svelare il ruolo delle aree discrete del cervello del ratto nella regolazione dell'ovulazione attraverso l'inattivazione reversibile da microiniezioni di tetrodotossine

Viene presentato un protocollo ottimizzato che consente l'esaurimento dei centri di organizzazione dei microtubuli citoplasmatici negli ovociti di topo durante la metafase I utilizzando un laser a femtosecondi nel vicino infrarosso.

Ablazione laser multi-fotone di centri di organizzazione di microtubuli citoplasmatici in ovociti di topo

Il protocollo dimostra un metodo di dissezione semplice e facile, adatto per gli insetti femmina migratori di tipo selvatico catturati con trappole a proiettori. Questa tecnica può chiarire in modo significativo la stessa specie confrontando entrambi i tessuti riproduttivi, vale a dire il sacco di accoppiamento e lo sviluppo ovarico degli insetti femmina wild-type.

Dissezione e classificazione dello sviluppo ovarico in insetti femmina wild-type

Questo protocollo stabilisce metodi per estrarre e quantificare le risposte al feromone sessuale volatile in C. elegans, fornendo strumenti per studiare la comunicazione chimica e la traiettoria di navigazione.

Estrazione di feromoni sessuali volatili e test di chemioattrazione in Caenorhabditis elegans

Qui, presentiamo protocolli e strumenti per visualizzare il calcio durante la fecondazione e l'embriogenesi precoce utilizzando un reporter di calcio geneticamente codificato espresso nella linea germinale del nematode modello C. elegans.

Visualizzazione in vivo dei transitori di calcio durante la fecondazione e lo sviluppo precoce in C. elegans

Impara l'ablazione del gambo oculare per stimolare la maturazione ovarica nei granchi del fango femmine. Questa tecnica aumenta significativamente il tasso di maturazione senza compromettere la sopravvivenza degli animali.

Ablazione del gambo oculare per aumentare la maturazione ovarica nei granchi del fango

Esplora altri video