Name: Induzione della stenosi uretrale seguita da uretroplastica dellinnesto della mucosa buccale in un modello di ratto (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-04-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 9 s
Description: Scopri l'induzione di stenosi uretrale e l'uretroplastica con innesto di mucosa buccale nel ratto Wistar. Questo modello animale consente di studiare terapie innovative per la rigenerazione urologica.

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Ringraziamo João Leitão, capo del dipartimento di Radiologia del Centro Hospitalar Universitário Lisboa Norte, e Catia Fernandes, tecnico del dipartimento di Radiologia del Centro Hospitalar Universitário Lisboa Norte, per la loro collaborazione nella realizzazione degli uretrogrammi.

Tutte le procedure sugli animali sono state eseguite in conformità alla direttiva 2010/63/UE. Le procedure sono state approvate dall'Ente istituzionale per il benessere degli animali, autorizzato dalla DGAV, l'autorità portoghese competente per la protezione degli animali (numero di licenza 0421/000/000/2021). Per il presente studio sono stati utilizzati ratti maschi Wistar Han IGS (Crl:WI(Han) (400-500 g) a 12-14 settimane di età. Gli animali sono stati ottenuti da una fonte commerciale (vedi Tabella dei materiali).
1. Preparazione delle soluzioni
<ol><li>Soluzione anestetica<ol><li>Riempire una siringa da 3 mL con 2,3 mL di medetomidina (1 mg/mL; 0,715 mg/kg di peso corporeo) e trasferire in una provetta da centrifuga da 15 mL.</li>
		<li>Riempire una siringa da 3 mL con 1,55 mL di fentanil (0,05 mg/mL; 0,02 mg/kg di peso corporeo) e trasferire nella stessa provetta da centrifuga da 15 mL.</li>
		<li>Riempire una siringa da 10 mL con 6,15 mL di midazolam (5 mg/mL; 9,5 mg/kg di peso corporeo) e trasferire nella stessa provetta da centrifuga da 15 mL, ottenendo così una soluzione anestetica da 10 mL.</li>
		<li>Etichettare la provetta e conservarla a 4 °C al buio. NOTA: Questa combinazione di anestetici (medetomidina, fentanil e midazolam) fornisce una finestra chirurgica anestetica fino a 3 ore. La somministrazione di atipamezolo e flumazenil può invertire l'effetto.</li>
	</ol></li>
	<li>Soluzione anti-sedativa<ol><li>Riempire una siringa da 1 mL con 0,7 mL di atipamezolo (5 mg/mL; 3,72 mg/kg di peso corporeo) e trasferire in una provetta da centrifuga da 15 mL.</li>
		<li>Riempire una siringa da 10 mL con 9,3 mL di flumazenil (0,1 mg/mL; 1,56 mg/kg di peso corporeo) e trasferire nella stessa provetta da centrifuga da 15 mL, ottenendo così una soluzione antisedativa da 10 mL.</li>
		<li>Etichettare la provetta e conservarla a 4 °C al buio.</li>
	</ol></li>
	<li>Soluzioni per l'analgesia postoperatoria<ol><li>Riempire una siringa da 1 mL con 0,5 mL di carprofene (50 mg/mL; 5 mg/kg di peso corporeo) e trasferire in una provetta da centrifuga da 15 mL.</li>
		<li>Aggiungere 9,5 mL di soluzione di NaCl (0,9%), ottenendo una soluzione di 10 mL di carprofene.</li>
		<li>Riempire una siringa da 1 mL con 1 mL di buprenorfina (0,3 mg/mL; 0,01-0,05 mg/kg di peso corporeo) e trasferire in una provetta da centrifuga da 15 mL.</li>
		<li>Aggiungere 9 mL di soluzione di NaCl (0,9%), ottenendo una soluzione di buprenorfina da 10 mL.</li>
		<li>Etichettare le provette e conservarle al buio a 4 °C.</li>
	</ol></li>
	<li>Antibiotico perioperatorio<ol><li>Riempire una siringa da 2,5 mL con 2,5 mL di enrofloxacina (25 mg/mL; 10 mg/kg di peso corporeo) e trasferire in una provetta da centrifuga da 15 mL.</li>
		<li>Aggiungere 7,5 mL di soluzione di NaCl (0,9%), ottenendo una soluzione di enrofloxacina da 10 mL.</li>
		<li>Etichettare la provetta e conservarla a 4 °C al buio. NOTA: I dettagli di tutti i reagenti per preparare le soluzioni di cui sopra sono elencati nella Tabella dei materiali.</li>
	</ol></li>
</ol>2. Induzione chirurgica della stenosi uretrale
NOTA: Le procedure chirurgiche sono state eseguite utilizzando uno stereomicroscopio (10x) (vedi Tabella dei materiali).
<ol><li>Sterilizzare tutti gli strumenti chirurgici prima dell'uso: lama del bisturi (numero 11), pinza appuntita, forbici a molla, pinza chirurgica, porta aghi oftalmici, forbici chirurgiche e un porta aghi. Utilizzare batuffoli di cotone sterili per pulire il campo operatorio.</li>
	<li>Caricare la siringa con la soluzione anestetica prima di tenere in braccio il ratto.</li>
	<li>Trattieni l'animale usando un tubo o un asciugamano e solleva la coda per esporre l'addome.</li>
	<li>Tenere l'animale trattenuto ed eseguire un'iniezione intraperitoneale della soluzione anestetica (preparata al punto 1.1).</li>
	<li>Testare i riflessi di ritiro del pedale del ratto per valutare l'anestesia.</li>
	<li>Applicare il gel protettivo per gli occhi in entrambi gli occhi dell'animale. Eseguire un'iniezione sottocutanea della soluzione antibiotica (preparata al punto 1.1), a 10 mg/kg di peso corporeo.</li>
	<li>Posizionare il ratto in posizione di decubito dorsale su un cuscinetto riscaldato e utilizzare un microscopio da dissezione con ingrandimento 10x o 20x per eseguire la procedura chirurgica.</li>
	<li>Pulire il pene e la pelle addominale circostante con iodio povidone (100 mg/ml).</li>
	<li>Ritrarre manualmente il prepuzio e posizionare una sutura superficiale (sutura 7.0; vedere la tabella dei materiali) nella faccia dorsale del glande del pene per applicare trazione al pene, lasciando il supporto dell'ago in posizione per mantenere il pene retratto.</li>
	<li>Posizionare un catetere venoso da 22 G nell'uretra per il cateterismo utilizzando un gel lubrificante.</li>
	<li>Utilizzando una lama di bisturi chirurgico (numero 11), eseguire un'incisione ventrale longitudinale di 1 cm nella pelle del pene.</li>
	<li>Usando la pinza appuntita e le forbici a molla, sezionare gli strati di tessuto del pene fino a esporre l'uretra a livello dell'asta centrale.</li>
	<li>Con un dispositivo di elettrocauterizzazione (vedi Tabella dei materiali), applicare una corrente con 10 W, per 1 s, negli aspetti laterali dell'uretra (in un punto su ciascun lato), ventralmente a livello dell'asta mediana del pene.</li>
	<li>Chiudere l'incisione con una sutura da corsa riassorbibile 6.0 (vedi Tabella dei materiali).</li>
	<li>Rimuovere il catetere uretrale. Rimuovere la sutura di trazione del pene.</li>
	<li>Eseguire l'iniezione sottocutanea di analgesia: Carprofene a 5 mg/kg di peso corporeo e buprenorfina a 0,03 mg/kg di peso corporeo.</li>
	<li>Caricare la siringa con la soluzione antisedativa (preparata al punto 1.2) e, con l'animale in decubito ventrale, tendere la pelle flaccida per somministrare un'iniezione sottocutanea della soluzione antisedativa.</li>
</ol>3. Procedura chirurgica di uretroplastica con innesto di mucosa vestibolare
NOTA: Le procedure chirurgiche sono state eseguite utilizzando uno stereomicroscopio (10x) (vedi Tabella dei materiali).
<ol><li>Sterilizzare tutti gli strumenti chirurgici necessari per questo intervento: pinza appuntita, forbici a molla, porta aghi oftalmici, forbici chirurgiche, porta aghi, tre pinze per zanzare e una lama per bisturi (numero 11). Utilizzare piccole spugne per pulire il campo operatorio.</li>
	<li>Somministrare l'anestetico, l'antibiotico, il trattenimento e posizionare l'animale come descritto in precedenza (passaggi 2.2-2.8).</li>
	<li>Pulire la mucosa buccale del labbro inferiore, il pene e la pelle addominale circostante con iodio povidone (100 mg/ml).</li>
	<li>Posizionare tre punti di sutura (7.0 suture) nel labbro inferiore, su entrambi i lati e al centro, e lasciare una zanzara in ciascuno di essi per ritrarre il labbro inferiore ed esporre la mucosa interna.</li>
	<li>Utilizzando forbici a molla e pinze appuntite, prelevare un innesto di 4 mm di diametro della mucosa buccale interna del labbro inferiore e posizionarlo in un piccolo recipiente con soluzione fisiologica sterile (0,9% NaCl).</li>
	<li>Applicare la compressione nell'area donatrice con una spugna per l'emostasi.</li>
	<li>Rimuovere i punti di sutura del labbro inferiore.</li>
	<li>Esporre il pene come descritto in precedenza (passaggio 2.9).</li>
	<li>Posizionare un catetere venoso da 22 G nell'uretra per il cateterismo utilizzando un gel lubrificante.</li>
	<li>Usando le forbici a molla, eseguire un'incisione circonferenziale sub-coronale e deglove il pene alla base.</li>
	<li>Usando la pinza appuntita e le forbici a molla, sezionare gli strati rimanenti ed esporre l'uretra.</li>
	<li>Utilizzando una lama di bisturi chirurgico (numero 11) e forbici a molla, eseguire un'incisione ventrale longitudinale, partendo da 3 mm distale al solco coronale in un'estensione di 4 mm, spatolando l'uretra a livello della stenosi precedentemente indotta (fase 2).</li>
	<li>Posizionare due suture di materiale 7.0, una su ciascun lato della spatolazione, e lasciare una zanzara in ciascuna di esse per ritrarre l'uretra.</li>
	<li>Posizionare due punti di sutura 7.0 non assorbibili, uno a ciascuna estremità della spatola.</li>
	<li>Posizionare l'innesto di mucosa vestibolare in modo onlay ventrale con il lato della mucosa rivolto verso il lume uretrale.</li>
	<li>Passare una delle suture attraverso l'estremità dell'innesto ed eseguire una mezza ellisse con una sutura corrente.</li>
	<li>Ripetere i passaggi 3.15 e 3.16 con l'altra sutura sull'altro lato dell'innesto.</li>
	<li>Rimuovere il catetere uretrale. Riposizionare la pelle del pene.</li>
	<li>Chiudere l'incisione circonferenziale sub-coronale con una sutura interrotta riassorbibile 6.0.</li>
	<li>Rimuovere la sutura di trazione del pene.</li>
	<li>Somministrare l'analgesia seguita dalla soluzione antisedativa, come descritto nei passaggi 2.16-2.17.</li>
</ol>4. Monitoraggio postoperatorio
<ol><li>Osserva i ratti tre o quattro volte ogni ora, confermando il loro recupero dall'anestesia. Monitora la respirazione e valuta i riflessi dei pedali e degli occhi.</li>
	<li>Iniettare analgesia per via sottocutanea ogni 12 ore per 48 ore. NOTA: Il carprofene è stato somministrato a 1 ml/500 mg di peso corporeo e la buprenorfina è stata somministrata a 0,5 ml/500 mg di peso corporeo (vedere Tabella dei materiali).</li>
	<li>Somministrare cibo morbido per 48 ore dopo ogni procedura e acqua ad libitum.</li>
	<li>Monitorare i ratti quotidianamente dopo l'intervento chirurgico e registrare il loro stato di salute e l'aspetto del sito operatorio. I segni valutati includono l'espressione facciale, la vocalizzazione, lo stato di attività, qualsiasi segno di dolore, l'ingestione di cibo e bevande, lo svuotamento e il sanguinamento.</li>
</ol>5. Valutazione della perfusione sanguigna
NOTA: Il flusso sanguigno viene misurato immediatamente prima dell'induzione della stenosi, immediatamente prima dell'uretroplastica e immediatamente dopo l'uretroplastica.
<ol><li>Eseguire l'imaging di perfusione laser Doppler.<ol><li>Anestetizzare i ratti usando la soluzione anestetica (passaggio 1.1).</li>
		<li>Mettere il ratto in posizione supina su un termoforo a 37 °C con trazione peniena, come descritto al punto 2.9.</li>
		<li>Avviare l'imager di perfusione laser Doppler (vedere la tabella dei materiali) per ottenere i dati. Preimpostare l'area di interesse che deve essere letta dal raggio laser.</li>
		<li>Applicare la soluzione antisedativa (passaggio 1.2) per invertire l'anestesia.</li>
		<li>Utilizzando il software di analisi delle immagini, disegna la regione di interesse (ROI) intorno all'area del pene e registra i valori di flusso nel tempo.</li>
	</ol></li>
</ol>6. Valutazione radiografica
NOTA: La conferma dell'induzione della stenosi e la risoluzione della stenosi dopo l'uretroplastica sono confermate con un uretrogramma retrogrado. Questa valutazione viene eseguita 1 settimana dopo l'induzione della stenosi (prima dell'uretroplastica) e 2 settimane dopo l'uretroplastica.
<ol><li>Eseguire un uretrogramma utilizzando un sistema angiografico monopiano (vedere la tabella dei materiali).<ol><li>Anestetizzare i ratti usando la soluzione anestetica.</li>
		<li>Posizionare l'animale sul materasso dell'angiografia in un decubito obliquo destro, con trazione peniena, come descritto al punto 2.9.</li>
		<li>Focalizzare il fascio conico sull'area pelvica dell'animale, compreso il pene.</li>
		<li>Posizionare un catetere venoso da 22 G avanzato di 2 mm nell'uretra distale.</li>
		<li>Iniziare a instillare 1 mL di mezzo di contrasto radiografico allo iodio (rapporto 1:1 di 623 mg/mL di soluzione di iopromide e 0,9% di NaCl) nell'uretra.</li>
		<li>Contemporaneamente, eseguire una radiografia semplice per identificare il contrasto radiografico che soddisfa il lume uretrale e valutare il diametro uretrale.</li>
		<li>Al termine dell'imaging, invertire l'anestesia con la soluzione antisedativa.</li>
	</ol></li>
</ol>7. Eutanasia
NOTA: L'eutanasia viene eseguita 3 settimane dopo l'uretroplastica (4 settimane dopo l'induzione della stenosi), immediatamente dopo l'ultima valutazione della perfusione.
<ol><li>Riempire una siringa da 2,5 mL con 2 mL/kg di pentobarbital sodico (400 mg/mL).</li>
	<li>Eseguire un'iniezione intraperitoneale della soluzione per l'eutanasia dell'animale.</li>
</ol>

<ol><li>Souza, G. F., Calado, A. A., Delcelo, R., Ortiz, V., Macedo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histopathological+evaluation+of+urethroplasty+with+dorsal+buccal+mucosa%3A+an+experimental+study+in+rabbits%5BTitle%5D)+AND+%22International+Brazilian+Journal+of+Urology%22%5BJournal%5D)">Histopathological evaluation of urethroplasty with dorsal buccal mucosa: an experimental study in rabbits.</a> International Brazilian Journal of Urology. 34 (3), 345-354 (2008).</li>
<li>Andrich, D. E., Mundy, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Urethral+strictures+and+their+surgical+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+International%22%5BJournal%5D)">Urethral strictures and their surgical treatment.</a> BJU International. 86 (5), 571-580 (2000).</li>
<li>Bhargava, S., Chapple, C. R., Bullock, A. J., Layton, C., MacNeil, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-engineered+buccal+mucosa+for+substitution+urethroplasty%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+International%22%5BJournal%5D)">Tissue-engineered buccal mucosa for substitution urethroplasty.</a> BJU International. 93 (6), 807-811 (2004).</li>
<li>Fu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Substitution+urethroplasty+for+anterior+urethral+stricture+repair%3A+comparison+between+lingual+mucosa+graft+and+pedicled+skin+flap%5BTitle%5D)+AND+%22Scandinavian+Journal+of+Urology%22%5BJournal%5D)">Substitution urethroplasty for anterior urethral stricture repair: comparison between lingual mucosa graft and pedicled skin flap.</a> Scandinavian Journal of Urology. 51 (6), 479-483 (2017).</li>
<li>Blain, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+grafts+in+the+rat+model%3A+an+anatomic+study%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Vascular grafts in the rat model: an anatomic study.</a> Microsurgery. 21 (3), 80-83 (2001).</li>
<li>Schmauss, D., Weinzierl, A., Schmauss, V., Harder, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Common+rodent+flap+models+in+experimental+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22European+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">Common rodent flap models in experimental surgery.</a> European Surgical Research. 59 (3-4), 255-264 (2018).</li>
<li>You, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rat+orthotopic+renal+transplantation+model+for+renal+allograft+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">A rat orthotopic renal transplantation model for renal allograft rejection.</a> Journal of Visualized Experiments. (180), e63464(2022).</li>
<li>Park, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Balloon-expandable+biodegradable+stents+versus+self-expandable+metallic+stents%3A+a+comparison+study+of+stent-induced+tissue+hyperplasia+in+the+rat+urethra%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+and+Interventional+Radiology%22%5BJournal%5D)">Balloon-expandable biodegradable stents versus self-expandable metallic stents: a comparison study of stent-induced tissue hyperplasia in the rat urethra.</a> Cardiovascular and Interventional Radiology. 42 (9), 1343-1351 (2019).</li>
<li>Martín-Cano, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histological+and+immunohistochemical+changes+in+the+rat+oral+mucosa+used+as+an+autologous+urethral+graft%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pediatric+Surgery%22%5BJournal%5D)">Histological and immunohistochemical changes in the rat oral mucosa used as an autologous urethral graft.</a> Journal of Pediatric Surgery. 48 (7), 1557-1564 (2013).</li>
<li>Hofer, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+primary+urethral+wound+healing+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Urology%22%5BJournal%5D)">Analysis of primary urethral wound healing in the rat.</a> Urology. 84 (1), e1-7 (2014).</li>
<li>Tavukcu, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effect+of+platelet-rich+plasma+on+urethral+injury+model+of+male+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neurourology+and+Urodynamics%22%5BJournal%5D)">Protective effect of platelet-rich plasma on urethral injury model of male rats.</a> Neurourology and Urodynamics. 37 (4), 1286-1293 (2018).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

L'uretroplastica con innesti di mucosa vestibolare è una pietra miliare nella ricostruzione uretrale. Tuttavia, dovrebbero essere sviluppate procedure innovative per ottimizzare quelle già descritte e stabilirne di nuove, come i materiali di ingegneria tissutale e gli innesti biologici, per ridurre le complicanze e la morbilità. Sono state pubblicate diverse procedure per stabilire modelli preclinici e definire le tecniche chirurgiche. Souza et al.1 hanno condotto uno studio su 12 conigli neozelan...

La ricostruzione uretrale è una delle principali sfide per i chirurghi urologici nella gestione delle lesioni uretrali nel contesto di stenosi, traumi o difetti congeniti1. Con intento curativo, l'uretroplastica è il trattamento di scelta per la maggior parte dei pazienti, con difetti uretrali lunghi (>2 cm) e anteriori che richiedono una qualche forma di uretroplastica sostitutiva2. Molti tessuti sono stati utilizzati come sostituti uretrali, tra cui innesti cutanei a pieno spessore o a spessore diviso di aree genitali o extragenitali, mucosa della parete vescicale o della mucosa vestibolare diffusa2. Gli innesti di mucosa buccale presentano diversi vantaggi, come la provenire da un ambiente umido e glabro, la facilità di raccolta, la resistenza alle infezioni, un epitelio spesso, una ridotta probabilità di formazione di pseudo-diverticolo e una lamina sottile, che consente l'imbibizione e l'inosculazione precoce3. A differenza dei lembi, gli innesti non hanno afflusso di sangue, a seconda del letto vascolare del ricevente per sopravvivere4.
I modelli animali di innesti o lembi sono stati ampiamente utilizzati per sviluppare o perfezionare tecniche chirurgiche, studiare e comprendere la fisiologia dei tessuti, i meccanismi sottostanti e le cause di fallimento e valutare strategie di trattamento innovative 5,6. Sebbene gli animali più grandi facilitino l'esecuzione tecnica, i roditori, in particolare ratti e topi, sono più facili da maneggiare e mantenere, resistenti alle malattie, più convenienti e, soprattutto, con gli strumenti per studiare i meccanismi molecolari, cruciali per testare terapie innovative 5,6. Diversi modelli di lembi e innesti sono stati descritti nei ratti utilizzando diversi tessuti, vale a dire pelle, ossa, muscoli6, vasi 5 e persino organi solidi7. Tuttavia, c'è scarsa ricerca nei modelli murini sugli innesti per la ricostruzione uretrale o l'ingegneria tissutale.
Ciononostante, i progressi della scienza traslazionale dipendono da modelli animali che imitano la malattia. Finora, l'ambiente fisiopatologico locale non è stato affrontato, poiché la ricostruzione uretrale viene eseguita immediatamente dopo la sua stenosi. In questo studio, questo studio si propone di eseguire una ricostruzione uretrale utilizzando un innesto di mucosa vestibolare in un ambiente fisiopatologico locale. Con questo obiettivo, la stenosi uretrale è stata indotta 1 settimana prima della sua ricostruzione. Questo modello sperimentale, eseguito sui ratti, permette di testare terapie innovative e di studiarne in futuro i meccanismi molecolari e i vantaggi clinici.

<table><tbody><tr><td>Atipamezolo</td><td>OrionPharma</td><td></td><td>L'ANTISEDANO (atipamezolo) è indicato per l'inversione degli effetti sedativi e analgesici.</td></tr><tr><td>Buprenorfina</td><td>RichterPharma</td><td></td><td>La buprenorfina è un derivato dell'alcaloide oppioide tebaina, un analgesico più potente (25-40 volte) e di lunga durata rispetto alla morfina.</td></tr><tr><td>Carl Zeiss Opmi-1 FC Microscopio Chirurgico Stereo</td><td>Microscopia Carl Zeiss, Germania</td><td></td><td>OPMI 1 FC di ZEISS simboleggia qualità, precisione e affidabilità. Il sistema manuale è facile da usare e offre immagini ad alta fedeltà con le leggendarie ottiche ZEISS.</td></tr><tr><td>Carprofen</td><td>Zoetis</td><td></td><td>Il carprofene è un farmaco antinfiammatorio (FANS) non steroideo appartenente alla classe dell'acido propionico.</td></tr><tr><td>Catetere 22 G. x 1''</td><td>B Braun</td><td>Introcan Safety</td><td>Catetere IV di etilene propilene fluorurato (FEP) con costruzione più solida per accesso arterioso.</td></tr><tr><td>Enrofloxacina</td><td>Bayer</td><td></td><td>L'enrofloxacina è un antibiotico fluorochinolonico.</td></tr><tr><td>Fentanil</td><td>Braun</td><td>3644960</td><td>Il fentanyl è un potente analgesico oppioide sintetico.</td></tr><tr><td>Flumazenil</td><td>Fresenius Kabi</td><td></td><td>L'antagonista benzodiazepino è utilizzato per l'inversione completa o parziale degli effetti sedativi causati dalle benzodiazepine.</td></tr><tr><td>Cauterizzazione ad alta temperatura</td><td>Fiab</td><td>F7244</td><td>Cauteri usa e getta, sterili, alta temperatura (1200 °C; C), punta fine da 28 mm.</td></tr><tr><td>Gel Instillagel</td><td>Farco-pharma</td><td></td><td>Lubrificante a base di cellulosa con proprietà anestetiche locali e disinfettanti.</td></tr><tr><td>Iopromide</td><td>Bayer</td><td></td><td>Mezzo di contrasto iniettabile non ionico, con iodio.</td></tr><tr><td>Sistema di imaging laser Doppler (imager a perfusione moorLDI2-HIR e software dedicato)</td><td>MoorLDI-V6.0, Moor Instruments Ltd, Axminster, Regno Unito</td><td>5710</td><td>I modelli di angiogenesi utilizzano immagini Doppler laser per valutare la perfusione sanguigna negli arti posteriori, uno dei quali è legato chirurgicamente. Un software dedicato alla misurazione e al confronto consente di definire le regioni di interesse per la valutazione del flusso sanguigno sull'arto ischemico rispetto a quello non ischemico, stabilendo un "rapporto di reperfusione" che può essere valutato tutte le volte che necessario e per diversi giorni sullo stesso soggetto.</td></tr><tr><td>Gel Occhi Lubrithal</td><td>Dechra</td><td></td><td>Gel per gli occhi usato negli animali per prevenire la secchezza oculare durante l'anestesia. Azione lubrificante e idratante su cornea e congiuntiva.</td></tr><tr><td>Maschi di ratti Wistar Han IGS (Crl:WI(Han))</td><td>Charles River Laboratories, Spagna</td><td></td><td>Dodici o quattordici settimane</td></tr><tr><td>Metedomidina</td><td>Virbac</td><td>037/01/07RFVPT</td><td>La medetomidina è un farmaco sintetico utilizzato come anestetico chirurgico.</td></tr><tr><td>Midazolam</td><td>Labesfal</td><td></td><td>I farmaci a base di benzodiazepini vengono utilizzati per l'anestesia e la sedazione procedurale.</td></tr><tr><td>Sistema di Angiografia Monoplan</td><td>Philips Medical Systems</td><td>Azurion 7 M20</td><td>Un sistema radiografico fluoroscopico diagnostico stazionario progettato specificamente per ottimizzare la capacità degli utenti di valutare visivamente e quantitativamente l'anatomia e la funzione dei vasi sanguigni del cuore, del cervello e di altri organi, nonché del sistema linfatico.</td></tr><tr><td>Pinze per zanzare</td><td>Henry Schein</td><td>102-4346</td><td>Pinza emostatica Hartman-Mosquito in acciaio inossidabile curva da 3-1/2"</td></tr><tr><td>Portaago</td><td>Henry Schein</td><td>100-2570</td><td>Portaago Mayo-Hegar, acciaio inox, 14 cm</td></tr><tr><td>Portaago per aghi oftalmici</td><td>Asico</td><td>AE-6143</td><td>Barranquero portaago più delicato senza bloccaggio</td></tr><tr><td>Pentobarbital Sodio</td><td>Ecuphar</td><td></td><td>Il sodio pentobarbitale è il sale di sodio del pentobarbital utilizzato per l'eutanasia.</td></tr><tr><td>Pinze appuntite</td><td>Esculap</td><td>BD335R</td><td>Microforceps, punta da 0,30 mm</td></tr><tr><td>Polysorb 6.0</td><td>Medtronic (Covidien)</td><td>UL-101</td><td>Sutura Assorbibile Sintetica Rivestita mirava a ridurre la reazione infiammatoria nei tessuti, seguita da un incapsulamento graduale della sutura tramite tessuto connettivo fibroso.</td></tr><tr><td>Providone-Iodio</td><td>Mylan</td><td></td><td>Povidone-iodio 10% è un farmaco antisettico, usato come disinfettante prima e dopo l'intervento.</td></tr><tr><td>Scalpell Blade n&ordm; 11</td><td>B Braun</td><td>BB511</td><td>Acciaio al carbonio, sterile</td></tr><tr><td>Forbici a Molla</td><td>Henry Schein</td><td>600-4826</td><td>Forbici chirurgiche 31 castroviejo</td></tr><tr><td>Pinze chirurgiche</td><td>Esculap</td><td>BD33R</td><td>Microforceps, punta da 0,20mm</td></tr><tr><td>Forbici chirurgiche</td><td>Esculap</td><td>MA873R</td><td>Forbici Micro Iris, punte curve per schegge</td></tr><tr><td>SurgiPro 7.0</td><td>Medtronic (Coviden)</td><td>VP-702-X</td><td>Sutura monofilamento non assorbibile in polipropilene indicata per l'uso nella legatura generale dei tessuti molli.</td></tr></tbody></table>

induzione della stenosi uretrale seguita da uretroplastica dell'innesto della mucosa buccale in un modello di ratto

Urethral Stricture Induction Followed by Buccal Mucosa Graft Urethroplasty in a Rat Model

La ricostruzione uretrale è un'importante area di competenza per gli urologi. La mucosa vestibolare è considerata l'opzione migliore quando è necessario l'innesto uretrale, anche se in alcuni casi è inappropriata o deve essere ottimizzata per riparare una determinata stenosi. Pertanto, lo sviluppo di procedure innovative e la valutazione del loro presunto successo in modelli sperimentali è fondamentale per soddisfare le esigenze cliniche. Con questo obiettivo, questo studio descrive un protocollo in cui la stenosi uretrale è stata indotta dall'elettrocauterizzazione nei ratti Wistar. La ricostruzione uretrale è stata eseguita 1 settimana dopo con un innesto di mucosa vestibolare, prelevato dal labbro inferiore e posizionato in modo onlay ventrale. Un uretrogramma ha mostrato un miglioramento significativo del diametro uretrale dopo l'uretroplastica rispetto al rispettivo valore dopo l'induzione della stenosi. Inoltre, il posizionamento dell'innesto è stato valutato mediante analisi di perfusione sanguigna utilizzando laser Doppler. Come previsto, un'area blu scuro corrispondeva all'innesto di mucosa buccale non vascolarizzata. Questa procedura può simulare con successo il normale processo fisiopatologico di lesione uretrale e modulazione tissutale, nonché la ricostruzione uretrale utilizzando un innesto di mucosa vestibolare in modo riproducibile e fungere da base per la ricerca futura basata sull'ingegneria tissutale o sugli innesti uretrali.

Un totale di 12 ratti Wistar maschi, del peso di 400-500 g e di 12-14 settimane, sono stati utilizzati per l'induzione della stenosi uretrale. Un uretrogramma retrogrado (RUG1) è stato eseguito 1 settimana dopo8, confermando il successo della tecnica. Il diametro uretrale è stato misurato in millimetri a livello dell'induzione della stenosi. Successivamente, è stata eseguita un'uretroplastica con innesto di mucosa vestibolare nella faccia ventrale dell'uretra di ratto. Gli stessi ratti sono stati ...

Nel presente protocollo, è stata sviluppata un'induzione della stenosi uretrale nei ratti Wistar, seguita da una ricostruzione uretrale con un innesto di mucosa vestibolare. Sono stati eseguiti un uretrogramma retrogrado e una valutazione laser Doppler, convalidando la ricostruzione uretrale (dopo la formazione della stenosi) e il posizionamento dell'innesto.

Induzione della stenosi uretrale seguita da uretroplastica dell'innesto della mucosa buccale in un modello di ratto

Urethral reconstruction is an important area of expertise for urologists. The buccal mucosa is considered the best option when urethral grafting is ...

In questo protocollo, la ricostruzione uretrale utilizzando un innesto di mucosa vestibolare viene sviluppata per la prima volta in un ambiente fisiopatologico locale, che è fondamentale per simulare la malattia. Questa tecnica ci permette di sviluppare terapie innovative e di studiarne i meccanismi molecolari e i vantaggi clinici in modo traslazionale. Per iniziare, applicare un gel protettivo per gli occhi su entrambi gli occhi del ratto anestetizzato.Posizionare l'animale in posizione di decubito dorsale su un termoforo e posizionare un microscopio da dissezione sul ratto per la procedura chirurgica. Dopo aver ritirato il prepuzio del pene, posizionare dorsalmente una sutura superficiale a sette zeri sulle ghiandole del pene. Lasciare un supporto per aghi in posizione per mantenere il pene retratto.Posizionare un catetere venoso calibro 22 nell'uretra per il cateterismo utilizzando gel lubrificante. Fai un'incisione ventrale lunga un centimetro nella pelle del pene con una lama di bisturi chirurgica. Sezionare gli strati di tessuto del pene con una pinza e una forbice a molla fino a quando l'uretra non è esposta a livello dell'asta centrale.Applicare corrente con un dispositivo di elettrocauterizzazione su un lato laterale dell'uretra e ventralmente sull'asta centrale del pene. Chiudere l'incisione con una sutura a sei zeri riassorbibile. Rimuovere il catetere uretrale e la sutura di trazione peniena.Posizionare il ratto in posizione di decubito ventrale e somministrare un'iniezione sottocutanea della soluzione antisedativa. Pulisci il labbro inferiore, la mucosa buccale, il pene e la pelle addominale di un ratto anestetizzato con iodio povidone. Posiziona tre punti di sutura a sette zeri su entrambi i lati e al centro del labbro inferiore.Metti una zanzara in ciascuno per ritrarre il labbro ed esporre la mucosa interna. Usando forbici a molla e pinze appuntite, prelevare un innesto di quattro millimetri dalla mucosa buccale interna del labbro inferiore. Posizionare l'innesto in un piccolo recipiente con soluzione fisiologica sterile allo 0,9%.Comprimere l'area donatrice con una spugna. Rimuovere le suture di soggiorno precedentemente posizionate del labbro inferiore ed esporre il pene. Posizionare un catetere venoso calibro 22 nell'uretra per la cauterizzazione utilizzando un gel lubrificante.Usando le forbici a molla, fai un'incisione subcoronale circonferenziale e deglove il pene alla base. Sezionare gli strati rimanenti per esporre l'uretra. Praticare un'incisione ventrale longitudinale di quattro millimetri a circa tre millimetri distale dal solco coronale, spatolando l'uretra a livello della stenosi.Posizionare due punti di sutura a sette zeri su ciascun lato della spatola. Lascia una zanzara in ciascuno per ritrarre l'uretra. Posizionare due suture seven-oh non assorbibili a ciascuna estremità della spatolazione.Posizionare l'innesto di mucosa vestibolare in modo onlay ventrale con il lato della mucosa rivolto verso il lume uretrale. Passare una delle suture attraverso l'innesto ed eseguire una mezza ellisse con una sutura corrente. Rimuovere il catetere uretrale e riposizionare la pelle del pene.Chiudere l'incisione sottocoronale circonferenziale con una sutura interrotta riassorbibile a sei zeri. Rimuovere la sutura di trazione del pene, quindi somministrare la soluzione antisedativa come dimostrato in precedenza. Il ratto sottoposto a induzione stenosi ha mostrato un diametro dell'uretere di 0,92 millimetri, che è migliorato a 1,59 millimetri due settimane dopo l'uretroplastica dell'innesto.Il flusso sanguigno medio è stato significativamente ridotto dopo l'uretroplastica rispetto agli animali pre-uretroplastica. Troppa corrente può comportare il rischio di chiusura uretrale. L'innesto deve essere posizionato con la mucosa rivolta verso il lume uretrale con una sutura a tenuta stagna per evitare fistole.Si può eseguire qualsiasi tipo di uretroplastica con innesti, si possono valutare diversi tipi di innesti. Questo modello sperimentale ci permette di ottimizzare l'uso degli innesti e di esplorare nuove strategie terapeutiche, come i materiali di ingegneria tissutale con un impatto sulla ricerca traslazionale per soddisfare le esigenze cliniche.

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Il modello murino di ostruzione ureterale unilaterale irreversibile (UUO) viene presentato insieme al modello di UUO reversibile in cui l'ostruzione ureterale viene alleviata dall'anastomosi dell'uretere reciso nella vescica. Questi modelli consentono lo studio dell'infiammazione renale e delle cicatrici, nonché del rimodellamento dei tessuti.

Un modello murino di irreversibile e reversibile unilaterale Ureteric Ostruzione

Qui, presentiamo un protocollo elaborato ed efficace per trattare le stenosi uretrali isolate breve bulbare o posteriore con la nave-con parsimonia l'asportazione e l'anastomosi primaria.

Nave-con parsimonia l'asportazione e l'anastomosi primaria

Questo articolo introduce un metodo chirurgico che utilizza una tunica vaginale peduncolare per trattare la stenosi uretrale del segmento lungo derivante dal lichen sclerosus. La tunica vaginale è un eccellente sostituto dell'uretra, che porta a un rapido recupero postoperatorio per i pazienti.

Uretroplastica con tunica vaginale peduncolare per il trattamento della stenosi uretrale anteriore del segmento lungo causata dal lichen sclerosus del glande

Gli impianti di ingegneria tissutale per la chirurgia ricostruttiva raramente progrediscono oltre gli studi preclinici a causa della laboriosa coltura ex vivo , che include componenti di scaffold complessi e costosi. Qui, presentiamo una procedura in un'unica fase progettata per la diversione urinaria con un'impalcatura tubulare accessibile a base di collagene contenente microinnesti autologhi.

Modello chirurgico per tubi uroteliali di ingegneria tissutale a stadio singolo in minipig

Il presente protocollo descrive un modello passo-passo riproducibile di ostruzione ureterale unilaterale.

Un modello murino immaturo di ostruzione ureterale unilaterale reversibile

Questo articolo spiega un nuovo modello animale progettato per testare i materiali dell'innesto suburetrale. In questo modello, un nastro a rete viene impiantato attraverso un'incisione vaginale nelle pecore e gli animali vengono osservati per un periodo di tre mesi. Questo modello è essenziale in quanto pone le basi per la ricerca sperimentale sugli innesti.

Una nuova tecnica chirurgica in un modello di pecora per l'impianto di innesto suburetrale

Questo protocollo dimostra l'ablazione laser transvesical Ho:YAG per creare un modello riproducibile su ratto della fibrosi del collo vescicale, per studiare il rimodellamento fibrotico indotto da lesioni termiche e interventi terapeutici.

Induzione assistita da laser Holmium:YAG della contrattura del collo della vescica in un modello ratto

Un seno cancro al cervello metastasi modello del mouse viene stabilito con ecografia guidata iniezione intracardiaca delle cellule MDA-MB231/Br-GFP. Sviluppo delle metastasi intracraniche multifocali è stato monitorato longitudinalmente utilizzando ad alta risoluzione di 9.4 T MRI.

Ultrasound Imaging guidata intracardiaca iniezione di sviluppare un modello murino di Breast Cancer metastasi cerebrali Seguito da longitudinale MRI

Trauma acuto cerebrale è una lesione grave che non ha alcun trattamento adeguato ad oggi. La microscopia multiphoton permette lo studio longitudinalmente il processo di sviluppo acuto trauma cerebrale e sondando strategie terapeutiche nei roditori. Due modelli di trauma cerebrale acuto studiato con in vivo a due fotoni di imaging del cervello sono dimostrate in questo protocollo.

Acuta cerebrale Trauma nei topi Seguito By longitudinale a due fotoni di imaging

Per migliorare la nostra conoscenza della formazione neotissue cellulare e molecolare, un modello murino della TEVG è stata sviluppata di recente. Gli innesti sono stati impiantati come infrarenali innesti vena cava interposizione di C57BL / 6 topi. Questo modello raggiunge risultati simili a quelli ottenuti nella nostra ricerca clinica, ma nel corso di un time-course di gran lunga ridotto.

L&#39;impianto di Vena cava inferiore Interposizione Graft in modello murino

Scopri l'induzione di stenosi uretrale e l'uretroplastica con innesto di mucosa buccale nel ratto Wistar. Questo modello animale consente di studiare terapie innovative per la rigenerazione urologica.

Induzione della stenosi uretrale seguita da uretroplastica dell'innesto della mucosa buccale in un modello di ratto

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