Name: Un modello di fibrillazione ventricolare a lungo termine in cuori di ratto isolati (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-02-17T14:15:00.000+00:00
Duration: 7 min 56 s
Description: Impara a sviluppare un modello di fibrillazione ventricolare a lungo termine in cuori di ratto isolati utilizzando l'apparato di Langendorff. Questo metodo semplice ed economico supporta la ricerca in elettrofisiologia cardiaca.

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Questo lavoro è stato svolto con il supporto di Cardiovascular Surgery, First Medical Center, Chinese PLA General Hospital e Laboratory Animal Center, Chinese PLA General Hospital.

Tutte le procedure sperimentali e i protocolli utilizzati in questa indagine sono stati esaminati e approvati dal Comitato per la cura e l'uso degli animali dell'ospedale generale del PLA.
1. Preparazione dell'apparecchio di Langendorff
<ol><li>Preparare il buffer Krebs-Henseleit (K-H). Per preparare il tampone K-H, aggiungere quanto segue all'acqua distillata: 118,0 mM NaCl, 4,7 mM KCl, 1,2 mM MgSO 4, 1,2 mM NaH 2 PO4, 1,8 mM CaCl2, 25,0 mM NaHCO3, 11,1 mM glucosio e 0,5 mM EDTA.</li>
	<li>Preparare il sistema di perfusione Langendorff modificato.<ol><li>Gassare continuamente il matraccio contenente tampone K-H con il 95% di O 2 + 5% di CO2 ad una pressione di circa 80 mmHg. Posizionare un'estremità del tubo di perfusione nel tampone K-H, far passare il centro del tubo di perfusione attraverso il bagno d'acqua e attaccare un ago smussato da 20 G all'altra estremità del tubo di perfusione.</li>
		<li>Sospendere l'ago su un supporto di filo. Regolare la temperatura del bagno d'acqua in modo che la temperatura del tampone K-H dall'estremità del sistema di perfusione sia di 37,0 °C ± 1,0 °C.</li>
	</ol></li>
</ol>2. Preparazione dell'hardware e del software
<ol><li>Hardware<ol><li>Utilizzare un registratore di segnali fisiologico per digitalizzare e registrare tutti i segnali analogici. Utilizzare due elettrodi ad ago in acciaio inossidabile per registrare un elettrocardiogramma bipolare (ECG) e utilizzare due elettrodi ad ago in acciaio inossidabile per la stimolazione elettrica.</li>
		<li>Collegare un'estremità dei quattro elettrodi al registratore di segnali fisiologici e l'altra estremità vicino all'area in cui verrà posizionato il cuore dopo il collegamento all'apparecchio.</li>
	</ol></li>
	<li>Software<ol><li>Utilizzare il software del laptop per riconoscere, regolare e registrare automaticamente i parametri ECG ed emodinamici bipolari. I parametri includono la differenza di pressione ventricolare sinistra (LVPD), la differenza tra la pressione ventricolare sinistra sviluppata (LVDP) e la pressione ventricolare sinistra end-diastolica (LVEDP) e la frequenza cardiaca (HR).</li>
		<li>Impostare i parametri dello stimolatore elettrico a 30 Hz AC, con il gruppo di bassa tensione che riceve 2 V e il gruppo di alta tensione che riceve 6 V.</li>
	</ol></li>
</ol>3. Preparare il cuore isolato
<ol><li>Prepara l'animale.<ol><li>Anestetizzare ratti Sprague-Dawley (SD) con isoflurano al 2% dopo iniezioni intraperitoneali di 0,05 mg/kg di buprenorfina e 1.000 UI/kg di eparina sodica. Assicurarsi che il ratto abbia smesso di rispondere al pizzico del piede.</li>
		<li>Trasferire il ratto su una piattaforma chirurgica per piccoli animali, posizionare il ratto in posizione supina e sterilizzare il torace con etanolo al 75%.</li>
	</ol></li>
	<li>Accisa il cuore.<ol><li>Con il ratto collegato a un ventilatore dopo la dissezione cervicale e l'intubazione tracheale, sollevare la pelle dal processo xifoideo con una pinza dentata e fare un'incisione trasversale di 3 cm nella pelle con forbici da tessuto. Estendere la pelle e le incisioni costali alle ascelle su entrambi i lati a forma di V.</li>
		<li>Riflettere lo sterno cranicamente con una pinza tissutale per esporre completamente il cuore e i polmoni.</li>
		<li>Isolare e sezionare senza mezzi termini il timo usando due pinze curve. Bloccare il tessuto timico e deviarlo lateralmente su entrambi i lati per esporre l'aorta e i suoi rami.</li>
		<li>Utilizzare una pinza curva per eseguire una separazione smussata dell'aorta e dell'arteria polmonare, facilitando l'uso successivo di forbici oftalmiche per rimuovere il cuore e sospendere il cuore una volta rimosso. Nota : per coloro che sono nuovi a questa procedura, il passaggio 3.2.4 può essere omesso.</li>
		<li>Utilizzare la dissezione smussata per separare il tronco brachiocefalico dal tessuto circostante. Quindi, bloccare il tronco brachiocefalico con una pinza curva per facilitare la rimozione del cuore. Tagliare rapidamente l'aorta tra il tronco brachiocefalo e l'arteria carotide comune sinistra. Il topo muore non appena il cuore viene rimosso.</li>
		<li>Tagliare il tessuto ridondante e immergere immediatamente il cuore in una capsula di Petri con tampone K-H a 0-4 °C per lavare e pompare fuori il sangue residuo. NOTA: La transezione dell'aorta tra il tronco brachiocefalico e l'arteria carotide comune sinistra è raccomandata perché la conservazione del tronco consente l'identificazione dell'aorta e la stima della profondità di incannulamento.</li>
	</ol></li>
	<li>Sospendi il cuore.<ol><li>Trasferire il cuore in una seconda capsula di Petri. Identificare l'aorta. Utilizzare due pinze oftalmiche per sollevare l'aorta e inserire l'ago smussato nell'apparato di Langendorff.</li>
		<li>Regolare la profondità aortica nella posizione appropriata. Chiedi a un assistente di legare un nodo con un filo di sutura 0. Quindi, accendere il regolatore del flusso di perfusione. NOTA: Fare attenzione ad evitare che bolle d'aria entrino nel cuore durante la procedura. Inoltre, tieni presente che il tempo dal taglio dell'aorta alla perfusione iniziale non deve superare i 2 minuti.</li>
		<li>Inserire un piccolo palloncino in lattice modificato collegato a un trasduttore di pressione nell'atrio sinistro e spingere il palloncino attraverso la valvola mitrale nel ventricolo sinistro. Riempire il palloncino con acqua distillata per ottenere una pressione diastolica finale di 5-10 mmHg.</li>
		<li>Collegare l'ECG e gli elettrodi di stimolazione elettrica al cuore. Quindi, posizionare il cuore in una camera di vetro incamiciata per mantenere una temperatura interna di 37,0 ° C ± 1,0 ° C. NOTA: utilizzare i seguenti criteri di esclusione: frequenza cardiaca <250 battiti al minuto; flusso coronarico (mL/min) <10 mL/min o >25 mL/min. Le posizioni di connessione dell'elettrodo ECG e della stimolazione elettrica sono mostrate nella Figura 1A e la camera di vetro incamiciata è mostrata nella Figura 1B.</li>
	</ol></li>
</ol>4. Perfondere e stimolare elettricamente il cuore (Figura 2)
<ol><li>Fase di equilibrio (0-30 min)<ol><li>Iniziare la perfusione e mantenere una temperatura di circa 37 °C fino a quando il cuore batte spontaneamente; Quindi, lascia che il cuore si equilibri per 20 minuti.</li>
		<li>Regolare la temperatura del bagno d'acqua per mantenere la temperatura all'interno della camera di vetro incamiciata a circa 30 °C. NOTA: L'intero processo di raffreddamento dovrebbe durare circa 10 minuti.</li>
	</ol></li>
	<li>Fase di stimolazione elettrica (30-120 min)<ol><li>Dopo che la temperatura ha raggiunto il livello desiderato, attivare l'interruttore di stimolazione elettrica sul software del laptop. NOTA: L'ECG bipolare e la pressione ventricolare sinistra (LVP) all'inizio della stimolazione elettrica sono mostrati in Figura 3A.</li>
		<li>Se l'animale fa parte del gruppo VF a lungo termine continuamente stimolato, consentire 90 minuti di stimolazione elettrica. Se l'animale si trova nel gruppo VF spontanea a lungo termine indotta, consentire 5 minuti di stimolazione elettrica, quindi spegnere la stimolazione elettrica e consentire 90 minuti per VF spontanea a lungo termine, come mostrato nella Figura 3B. NOTA: Per i cuori nel gruppo VF spontanea a lungo termine che non sviluppano VF spontanea entro 90 minuti dalla stimolazione elettrica, la stimolazione elettrica viene quindi disattivata in quanto non soddisfano i criteri di inclusione.</li>
	</ol></li>
	<li>Fase di riscaldamento, defibrillazione e battitura (120-180 min)<ol><li>Dopo 90 minuti di VF, utilizzare elettrodi per fornire 0,1 J di defibrillazione in corrente continua, come mostrato nella Figura 3C.</li>
		<li>Regolare contemporaneamente la temperatura del bagno d'acqua per consentire alla temperatura di salire lentamente all'interno della camera di vetro incamiciata a circa 37 °C. Continuare il processo di riscaldamento per circa 10 minuti.</li>
		<li>Dopo la defibrillazione, lasciare battere il cuore per 60 minuti, quindi interrompere il battito mediante perfusione lenta con KCl al 10% a circa 37 °C. Rimuovere il cuore per ulteriori analisi. NOTA: I cuori che non battono dopo la defibrillazione non soddisfano i criteri di inclusione. Inoltre, è importante raccogliere il versamento coronarico prima del raffreddamento (a 20 min), dopo la defibrillazione (a 120 min) e alla fine dell'esperimento (a 180 min).</li>
	</ol></li>
</ol>5. Esecuzione del test della creatina chinasi-MB (CK-MB) e dell'analisi istologica
<ol><li>Saggio CK-MB<ol><li>Utilizzare un analizzatore biochimico automatico e un kit di analisi CK-MB commerciale per determinare il livello di CK-MB nel liquido di versamento coronarico raccolto8.</li>
	</ol></li>
	<li>Analisi istologica<ol><li>Fissare il cuore in formalina tamponata al 10%, disidratare il cuore e incorporarlo nella paraffina.</li>
		<li>Utilizzare un microtomo per tagliare il tessuto incorporato in paraffina in sezioni da 5 μm; Quindi, montare le sezioni su vetrini e colorare con ematossilina ed eosina9.</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol><li>Kilic, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+outcomes+of+mitral+valve+reoperations+in+the+United+States%3A+An+analysis+of+the+society+of+thoracic+surgeons+national+database%5BTitle%5D)+AND+%22The+Annals+of+Thoracic+Surgery%22%5BJournal%5D)">Clinical outcomes of mitral valve reoperations in the United States: An analysis of the society of thoracic surgeons national database.</a> The Annals of Thoracic Surgery. 107 (3), 754-759 (2019).</li>
<li>Akins, C. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Risk+of+reoperative+valve+replacement+for+failed+mitral+and+aortic+bioprostheses%5BTitle%5D)+AND+%22The+Annals+of+Thoracic+Surgery%22%5BJournal%5D)">Risk of reoperative valve replacement for failed mitral and aortic bioprostheses.</a> The Annals of Thoracic Surgery. 65 (6), 1551-1542 (1998).</li>
<li>Jamieson, W. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reoperation+for+bioprosthetic+mitral+structural+failure%3A+risk+assessment%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Reoperation for bioprosthetic mitral structural failure: risk assessment.</a> Circulation. 108 (Suppl 1), 98(2003).</li>
<li>Seeburger, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimally+invasive+mitral+valve+surgery+after+previous+sternotomy%3A+Experience+in+181+patients%5BTitle%5D)+AND+%22The+Annals+of+Thoracic+Surgery%22%5BJournal%5D)">Minimally invasive mitral valve surgery after previous sternotomy: Experience in 181 patients.</a> The Annals of Thoracic Surgery. 87 (3), 709-714 (2009).</li>
<li>Arcidi, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fifteen-year+experience+with+minimally+invasive+approach+for+reoperations+involving+the+mitral+valve%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Thoracic+and+Cardiovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Fifteen-year experience with minimally invasive approach for reoperations involving the mitral valve.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 143 (5), 1062-1068 (2012).</li>
<li>Cox, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+safety+of+induced+ventricular+fibrillation+during+cardiopulmonary+bypass+in+nonhypertrophied+hearts%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Thoracic+and+Cardiovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">The safety of induced ventricular fibrillation during cardiopulmonary bypass in nonhypertrophied hearts.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 74 (3), 423-432 (1977).</li>
<li>Schraut, W., Lamberti, J. J., Kampman, K., Glagov, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ventricular+fibrillation+during+cardiopulmonary+bypass%3A+Long-term+effects+on+myocardial+morphology+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22The+Annals+of+Thoracic+Surgery%22%5BJournal%5D)">Ventricular fibrillation during cardiopulmonary bypass: Long-term effects on myocardial morphology and function.</a> The Annals of Thoracic Surgery. 27 (3), 230-234 (1979).</li>
<li>Li, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pravastatin+attenuates+cardiac+dysfunction+induced+by+lysophosphatidylcholine+in+isolated+rat+hearts%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Pravastatin attenuates cardiac dysfunction induced by lysophosphatidylcholine in isolated rat hearts.</a> European Journal of Pharmacology. 640 (1-3), 139-142 (2010).</li>
<li>Lang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CXCL10%2FIP-10+neutralization+can+ameliorate+lipopolysaccharide-induced+acute+respiratory+distress+syndrome+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">CXCL10/IP-10 neutralization can ameliorate lipopolysaccharide-induced acute respiratory distress syndrome in rats.</a> PLoS One. 12 (1), e0169100(2017).</li>
<li>Lubbe, W. F., Bricknell, O. L., Marzagao, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ventricular+fibrillation+threshold+and+vulnerable+period+in+the+isolated+perfused+rat+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Research%22%5BJournal%5D)">Ventricular fibrillation threshold and vulnerable period in the isolated perfused rat heart.</a> Cardiovascular Research. 9 (5), 613-620 (1975).</li>
<li>Hottentrott, C. E., Towers, B., Kurkji, H. J., Maloney, J. V., Buckberg, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+hazard+of+ventricular+fibrillation+in+hypertrophied+ventricles+during+cardiopulmonary+bypass%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Thoracic+and+Cardiovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">The hazard of ventricular fibrillation in hypertrophied ventricles during cardiopulmonary bypass.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 66 (5), 742-753 (1973).</li>
<li>Hottenrott, C., Maloney, J. V., Buckberg, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+of+the+effects+of+ventricular+fibrillation+on+the+adequacy+of+regional+myocardial+flow.+I.+Electrical+vs.+spontaneous+fibrillation%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Thoracic+and+Cardiovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Studies of the effects of ventricular fibrillation on the adequacy of regional myocardial flow. I. Electrical vs. spontaneous fibrillation.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 68 (4), 615-625 (1974).</li>
<li>Buckberg, G. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+of+the+effects+of+hypothermia+on+regional+myocardial+blood+flow+and+metabolism+during+cardiopulmonary+bypass.+I.+The+adequately+perfused+beating%2C+fibrillating%2C+and+arrested+heart%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Thoracic+and+Cardiovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Studies of the effects of hypothermia on regional myocardial blood flow and metabolism during cardiopulmonary bypass. I. The adequately perfused beating, fibrillating, and arrested heart.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 73 (1), 87-94 (1977).</li>
<li>Gazmuri, R. J., Berkowitz, M., Cajigas, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myocardial+effects+of+ventricular+fibrillation+in+the+isolated+rat+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Myocardial effects of ventricular fibrillation in the isolated rat heart.</a> Critical Care Medicine. 27 (8), 1542-1550 (1999).</li>
<li>Clasen, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modified+approach+for+programmed+electrical+stimulation+in+mice%3A+Inducibility+of+ventricular+arrhythmias%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A modified approach for programmed electrical stimulation in mice: Inducibility of ventricular arrhythmias.</a> PLoS One. 13 (8), e0201910(2018).</li>
<li>Diaz-Maue, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advanced+cardiac+rhythm+management+by+applying+optogenetic+multi-site+photostimulation+in+murine+hearts%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Advanced cardiac rhythm management by applying optogenetic multi-site photostimulation in murine hearts.</a> Journal of Visualized Experiments. (174), e62335(2021).</li>
<li>Jungen, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+intracardiac+neurons+on+cardiac+electrophysiology+and+arrhythmogenesis+in+an+ex+vivo+Langendorff+system%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Impact of intracardiac neurons on cardiac electrophysiology and arrhythmogenesis in an ex vivo Langendorff system.</a> Journal of Visualized Experiments. 135, e57617(2018).</li>
<li>Koretsune, Y., Marban, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+calcium+in+the+pathophysiology+of+ventricular+fibrillation+and+in+the+pathogenesis+of+postarrhythmic+contractile+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Cell calcium in the pathophysiology of ventricular fibrillation and in the pathogenesis of postarrhythmic contractile dysfunction.</a> Circulation. 80 (2), 369-379 (1989).</li>
<li>Brazier, J. R., Cooper, N., McConnell, D. H., Buckberg, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+of+the+effects+of+hypothermia+on+regional+myocardial+blood+flow+and+metabolism+during+cardiopulmonary+bypass.+III.+Effects+of+temperature%2C+time%2C+and+perfusion+pressure+in+fibrillating+hearts%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Thoracic+and+Cardiovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Studies of the effects of hypothermia on regional myocardial blood flow and metabolism during cardiopulmonary bypass. III. Effects of temperature, time, and perfusion pressure in fibrillating hearts.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 73 (1), 102-109 (1977).</li>
<li>von Planta, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiopulmonary+resuscitation+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Physiology%22%5BJournal%5D)">Cardiopulmonary resuscitation in the rat.</a> Journal of Applied Physiology. 65 (6), 2641-2647 (1988).</li>
<li>Luo, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ageing+increases+cardiac+electrical+remodelling+in+rats+and+mice+via+NOX4%2FROS%2FCaMKII-mediated+calcium+signalling%5BTitle%5D)+AND+%22Oxidative+Medicine+and+Cellular+Longevity%22%5BJournal%5D)">Ageing increases cardiac electrical remodelling in rats and mice via NOX4/ROS/CaMKII-mediated calcium signalling.</a> Oxidative Medicine and Cellular Longevity. 2022, 8538296(2022).</li>
<li>Hohnloser, S., Weirich, J., Antoni, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+direct+current+on+the+electrical+activity+of+the+heart+and+on+its+susceptibility+to+ventricular+fibrillation%5BTitle%5D)+AND+%22Basic+Research+in+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Influence of direct current on the electrical activity of the heart and on its susceptibility to ventricular fibrillation.</a> Basic Research in Cardiology. 77 (3), 237-249 (1982).</li>
<li>Xie, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-energy+defibrillation+increases+the+severity+of+postresuscitation+myocardial+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">High-energy defibrillation increases the severity of postresuscitation myocardial dysfunction.</a> Circulation. 96 (2), 683-688 (1997).</li>
<li>Manoach, M., Netz, H., Erez, M., Weinstock, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ventricular+self-defibrillation+in+mammals%3A+Age+and+drug+dependence%5BTitle%5D)+AND+%22Age+and+Ageing%22%5BJournal%5D)">Ventricular self-defibrillation in mammals: Age and drug dependence.</a> Age and Ageing. 9 (2), 112-116 (1980).</li>
<li>Filippi, S., Gizzi, A., Cherubini, C., Luther, S., Fenton, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanistic+insights+into+hypothermic+ventricular+fibrillation%3A+The+role+of+temperature+and+tissue+size%5BTitle%5D)+AND+%22Europace%22%5BJournal%5D)">Mechanistic insights into hypothermic ventricular fibrillation: The role of temperature and tissue size.</a> Europace. 16 (3), 424-434 (2014).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Questo protocollo stabilisce un modello animale di VF a lungo termine in cuori di ratto isolati che non è stato precedentemente segnalato. Inoltre, in questo studio sono state confrontate diverse condizioni di stimolazione elettrica. Questo studio fornisce un modello per gli studi relativi all'arresto della fibrillazione ventricolare durante la cardiochirurgia.
Il tasso di successo del modello è un indicatore molto importante correlato al personale, al tempo e ai costi economici. Nei modelli V...

La cardiochirurgia viene solitamente eseguita tramite toracotomia, con blocco dell'aorta e perfusione con una soluzione cardioplegica per arrestare il cuore. La chirurgia cardiaca ripetuta può essere più impegnativa dell'intervento chirurgico iniziale, con complicanze e tassi di mortalità più elevati 1,2,3. Inoltre, l'approccio convenzionale della sternotomia mediana può causare danni ai vasi ponte dietro lo sterno, all'aorta ascendente, al ventricolo destro e ad altre strutture importanti. Sanguinamento esteso dovuto alla separazione del tessuto connettivo, infezione della ferita sternale e osteomielite sternale dovuta a sternotomia sono tutte possibili complicanze. La dissezione estesa aumenta il rischio di lesioni ed emorragie nelle strutture cardiache vitali.
Con lo sviluppo della cardiochirurgia minimamente invasiva, le incisioni sono diventate più piccole e l'arresto cardiaco è talvolta difficile da raggiungere. La chirurgia cardiaca ripetuta sotto fibrillazione ventricolare (VF)4,5 è sicura, fattibile e può fornire una migliore protezione miocardica. Pertanto, questo protocollo introduce il metodo di arresto cardiaco VF in chirurgia con circolazione extracorporea minimamente invasiva. Il cuore perde una contrazione efficace durante la VF e, quindi, non è necessario suturare e bloccare l'aorta ascendente durante l'intervento chirurgico, il che semplifica la procedura. Tuttavia, anche se il cuore è continuamente perfuso, VF a lungo termine può ancora essere dannoso per il cuore.
Man mano che questo metodo diventa più ampiamente utilizzato, la questione di come proteggere il cuore durante la VF diventa sempre più rilevante. Ciò richiederà studi approfonditi e approfonditi utilizzando modelli animali di VF a lungo termine. In passato, la ricerca in questo campo ha utilizzato principalmente animali di grossa taglia6,7 e ha richiesto la cooperazione tra chirurghi, anestesisti, perfusionisti e altri ricercatori. Questi studi hanno richiesto troppo tempo, le dimensioni del campione erano spesso piccole e gli studi si sono generalmente concentrati sulla funzione cardiaca e meno sulle valutazioni meccanicistiche e molecolari. Ad oggi, nessuno studio ha riportato un protocollo dettagliato per stabilire un modello VF a lungo termine.
Questo protocollo, quindi, fornisce i dettagli necessari per sviluppare un modello di ratto VF a lungo termine utilizzando l'apparato di Langendorff. Il protocollo è semplice, economico, ripetibile e stabile.

<table><tbody><tr><td>0 Sutura non assorbibile</td><td>Ethicon, Inc.</td><td></td><td>Preparazione del cuore isolato</td></tr><tr><td>95% O2 + 5% CO2</td><td>Beijing BeiYang United Gas Co., Ltd.</td><td></td><td>tampone K-H</td></tr><tr><td>Software AcqKnowledge</td><td>BIOPAC Systems Inc.</td><td>Versione 4.2.1</td><td>Software</td></tr><tr><td>Analizzatore biochimico automatico</td><td>Rayto Life and Analytical Sciences Co., Ltd.</td>Saggio <td>Chemray 800</td><td>CK-MB</td></tr><tr><td>Sistemi di ricerca BIOPAC BIOPAC</td><td>Systems Inc.</td><td>MP150</td><td>Hardware</td></tr><tr><td>Ago smussato (20 G, TWLB)</td><td>Tianjin Hanaco MEDICAL Co., Ltd.</td><td>H-113AP-S</td><td>Sistema di perfusione Langendorff modificato</td></tr><tr><td>Cloruro di calcio</td><td>Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd</td><td>10005861</td> Kit di test CK-MB <td>tampone K-H</td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>Fornitore verificato - Changchun Huili Biotech Co., Ltd.</td><td>Saggio C060</td><td>CK-MB</td></tr><tr><td>Pinza curva</td><td>Shanghai Medical Instrument (Group) Co., Ltd.</td><td></td><td>Preparazione del cuore isolato</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd</td><td>10009717</td><td>tampone K-H</td></tr><tr><td>Stimolatore elettrico</td><td>BIOPAC Systems Inc.</td><td>Filtro hardware</td> <td>STEMISOC</td></tr><tr><td></td><td>Tianjin Hanaco MEDICAL Co., Ltd.</td><td>H-113AP-S</td><td></td></tr><tr><td>Glucosio</td><td>Sinopharm Reagente Chimico Co., Ltd</td><td>63005518</td><td>K-H tampone</td></tr><tr><td>Eparina sodica</td><td>Tianjin Biochem Pharmaceutical Co., Ltd.</td><td>H120200505</td><td>Preparazione del cuore isolato</td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>RWD Life Science Co., LTD</td><td>21082201</td><td>Preparazione del cuore isolato</td></tr><tr><td>Solfato di magnesio</td><td>Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd</td><td>20025118</td><td>K-H</td></tr><tr><td>tampone Elettrodi ad ago</td><td>BIOPAC Systems Inc.</td><td>EL452</td><td></td></tr><tr><td>Morsetto oftalmico</td> hardware <td>Shanghai Medical Instrument (Group) Co., Ltd.</td><td></td><td>Preparazione del cuore isolato</td></tr><tr><td>Pinze oftalmiche</td><td>Shanghai Medical Instrument (Group) Co., Ltd.</td><td></td><td>Preparazione del cuore isolato</td></tr><tr><td>Forbici oftalmiche</td><td>Shanghai Medical Instrument (Group) Co., Ltd.</td><td></td><td>Preparazione del tubo di perfusione cardiaco isolato</td></tr><tr><td></td><td>Tianjin Hanaco MEDICAL Co., Ltd.</td><td>H-113AP-S Sistema di</td><td>perfusione di Langendorff modificato</td></tr><tr><td>Cloruro di potassio</td><td>Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd</td><td>10016318</td><td>tampone K-H</td></tr><tr><td>Bicarbonato di sodio</td><td>Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd</td><td>10018960</td><td>tampone K-H</td></tr><tr><td>Cloruro di sodio</td><td>Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd</td><td>10019318</td><td>tampone K-H</td></tr><tr><td>Diidrogeno fosfato di sodio diidrato</td><td>Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd</td><td>20040718</td><td>tampone K-H</td></tr><tr><td>Sprague-Dawley (SD) ratti</td><td>SPF (Beijing) biotechnology Co., Ltd.</td><td>Maschio, 300-350g</td><td>Preparazione del termometro a cuore isolato</td></tr><tr><td></td><td>Jiangsu Jingchuang Electronics Co., Ltd.</td><td>GSP-6</td><td>Sistema di perfusione Langendorff modificato</td></tr><tr><td>Tissueforceps</td><td>Shanghai Medical Instrument (Group) Co., Ltd.</td><td></td><td>Preparazione del cuore isolato</td></tr><tr><td>Forbici tissutali</td><td>Shanghai Medical Instrument (Group) Co., Ltd.</td><td></td><td>Preparazione del cuore isolato</td></tr><tr><td>Pinze dentate</td><td>Shanghai Medical Instrument (Group) Co., Ltd.</td><td></td><td>Preparazione del cuore isolato</td></tr><tr><td>Ventilatore</td><td>Chengdu Instrument Factory</td><td>DKX-150</td><td>Preparazione del cuore isolato</td></tr><tr><td>Bagno d'acqua1</td><td>Ningbo Scientz Biotechnology Co., Ltd.</td><td>SC-15</td><td>Sistema di perfusione Langendorff modificato</td></tr><tr><td>Bagno d'acqua2</td><td>Shanghai Yiheng Technology Instrument Co., Ltd.</td><td>DK-8D</td><td>Sistema di perfusione Langendorff modificato</td></tr></tbody></table>

un modello di fibrillazione ventricolare a lungo termine in cuori di ratto isolati

A Model of Long-Term Ventricular Fibrillation in Isolated Rat Hearts

La fibrillazione ventricolare (VF) è un'aritmia fatale con un'alta incidenza nei pazienti cardiaci, ma l'arresto VF sotto perfusione è un metodo trascurato di arresto intraoperatorio nel campo della cardiochirurgia. Con i recenti progressi nella cardiochirurgia, la domanda di studi VF prolungati sotto perfusione è aumentata. Tuttavia, il campo manca di modelli animali semplici, affidabili e riproducibili di fibrillazione ventricolare cronica. Questo protocollo induce VF a lungo termine attraverso la stimolazione elettrica a corrente alternata (AC) dell'epicardio. Diverse condizioni sono state utilizzate per indurre VF, tra cui la stimolazione continua con una bassa o alta tensione per indurre VF a lungo termine e la stimolazione per 5 minuti con una bassa o alta tensione per indurre VF spontanea a lungo termine. Sono stati confrontati i tassi di successo delle diverse condizioni, nonché i tassi di lesioni miocardiche e recupero della funzione cardiaca. I risultati hanno mostrato che la stimolazione continua a bassa tensione ha indotto VF a lungo termine e che 5 minuti di stimolazione a bassa tensione hanno indotto VF spontanea a lungo termine con lieve danno miocardico e un alto tasso di recupero della funzione cardiaca. Tuttavia, il modello VF a bassa tensione, continuamente stimolato a lungo termine, ha avuto un tasso di successo più elevato. La stimolazione ad alta tensione ha fornito un più alto tasso di induzione VF, ma ha mostrato un basso tasso di successo della defibrillazione, scarso recupero della funzione cardiaca e gravi lesioni del miocardio. Sulla base di questi risultati, la stimolazione epicardica AC continua a bassa tensione è raccomandata per il suo alto tasso di successo, stabilità, affidabilità, riproducibilità, basso impatto sulla funzione cardiaca e lieve danno miocardico.

Un totale di 57 ratti sono stati utilizzati negli esperimenti, di cui 30 hanno soddisfatto i criteri di inclusione. Gli animali inclusi sono stati divisi in cinque gruppi, con sei animali in ciascun gruppo: il gruppo di controllo (Gruppo C), il gruppo VF a lungo termine continuamente stimolato a bassa tensione (Gruppo LC), il gruppo VF a lungo termine stimolato continuamente ad alta tensione (Gruppo HC), il gruppo VF spontaneo a lungo termine indotto da bassa tensione (Gruppo LI) e il gruppo VF spontaneo a lungo termine ...

Questo protocollo presenta un modello di fibrillazione ventricolare a lungo termine nei cuori di ratto indotta dalla stimolazione continua con corrente alternata a bassa tensione. Questo modello ha un alto tasso di successo, è stabile, affidabile e riproducibile, ha un basso impatto sulla funzione cardiaca e causa solo lievi lesioni miocardiche.

Un modello di fibrillazione ventricolare a lungo termine in cuori di ratto isolati

Ventricular fibrillation (VF) is a fatal arrhythmia with a high incidence in cardiac patients, but VF arrest under perfusion is a neglected method of ...

Questo protocollo fornisce una necessità dettagliata di sviluppare un modello di ratto di fibrillazione ventricolare a lungo termine utilizzando l'apparato di Langendorff. Riempie il divario della fibrillazione ventricolare a lungo termine nel modello di piccolo animale. Il tecnico è semplice, economico, ripetibile e stabile.Questa tecnica può essere utilizzata nello studio dell'arresto della fibrillazione ventricolare sotto perfusione che viene eseguito in determinate situazioni cliniche nel campo delle sessioni e delle operazioni di cardiochirurgia. Per iniziare, preparare il tampone Krebs-Henseleit o KH aggiungendo 118 millimolari di cloruro di sodio, 4,7 millimolari di cloruro di potassio, 1,2 millimolare di cloruro di magnesio, 1,2 millimolare di sodio diidrogeno fosfato, 1,8 millimolare di cloruro di calcio, 25 millimolare di bicarbonato di sodio, 11,1 millimolare di glucosio e 0,5 millimolare EDTA in acqua distillata. Quindi preparare il sistema di perfusione Langendorff modificato.Gassare continuamente il pallone contenente tampone KH con il 95% di ossigeno e il 5% di anidride carbonica ad una pressione di circa 80 millimetri di mercurio. Posizionare un'estremità del tubo d

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Il modello di topo di infarto miocardico acuto (AMI) è utile per studiare la conseguenza di un infarto miocardico sulla funzione cardiaca fisiopatologici e fisiologici.

Infarto acuto del miocardio in topi

Questo articolo descrive un modello di ratto di fibrillazione ventricolare indotta elettricamente e rianimazione mediante compressione toracica, ventilazione e somministrazione di scosse elettriche che simula un episodio di arresto cardiaco improvviso e rianimazione cardiopolmonare convenzionale. Il modello consente di raccogliere informazioni sulla fisiopatologia dell'arresto cardiaco e di esplorare nuove strategie di rianimazione.

Un modello di ratto di fibrillazione ventricolare e Rianimazione dal convenzionale chiuso petto Tecnica

L'obiettivo di questo protocollo è valutare lo stordimento miocardico a seguito di arresto cardioplegico ischemico nei roditori.

Murino Isolato Cuore modello di infarto stordimento associati con arresto cardioplegica

Qui, descriviamo una procedura basata su Langendorff, ottimizzata per l'isolamento di singole cellule cardiomiociti atriali da un modello del ratto di metabolico sindrome-relativo infarto con la frazione conservata di espulsione. Una regolazione manuale della pressione intraluminale delle cavità cardiache è implementata per rendere funzionalmente intatto miociti adatto per studi di accoppiamento eccitazione-contrazione.

Isolamento dei cardiomiociti atriali da un modello del ratto di metabolico sindrome-relativo infarto con la frazione conservata di espulsione

Il modello di ischemia-riperfusione miocardica del cuore di ratto viene migliorato utilizzando un riavvolgitore autoprodotto, un tubo di cloruro di polivinile e un metodo di annodatura unico. L'elettrocardiogramma, il cloruro di trifeniltetrazolio e la colorazione istologica e i risultati dell'analisi percentuale di sopravvivenza hanno mostrato che il gruppo modello migliorato ha tassi di successo e sopravvivenza più elevati rispetto al gruppo modello già esistente.

Modello di roditore migliorato di ischemia miocardica e danno da riperfusione

Il presente lavoro descrive un protocollo sperimentale di stimolazione dello scoppio atriale transesofageo per un'induzione efficiente della fibrillazione atriale (AF) nei ratti. Il protocollo può essere utilizzato in ratti con cuori sani o rimodellati, consentendo lo studio della fisiopatologia della fibrillazione atriale, l'identificazione di nuovi bersagli terapeutici e la valutazione di nuove strategie terapeutiche.

Stimolazione atriale transesofagea per l'induzione della fibrillazione atriale nei ratti

Il presente protocollo descrive i metodi per l'espressione transgenica nei cuori di ratto e topo mediante iniezione intramiocardica diretta del virus sotto guida ecocardiografica. Qui vengono spiegati anche i metodi per la valutazione della suscettibilità dei cuori alle aritmie ventricolari mediante la stimolazione elettrica programmata di cuori isolati perfusi da Langendorff.

Espressione del transgene virale nei cuori dei roditori e valutazione del rischio di aritmia cardiaca

L'insufficienza cardiaca destra (RHF) è caratterizzata da dilatazione cardiaca destra e ipertrofia, che porta a disfunzione ventricolare e atriale. Le condizioni cardiopolmonari associate all'RHF sono accompagnate da un aumento del rischio di aritmie cardiache. Questo articolo descrive un modello standardizzato di RHF indotta da bande arteriose polmonari associata a un aumento dell'aritmogenesi ventricolare e atriale.

Modello di ratto di rimodellamento cardiaco destro e aritmia mediante bande arteriose polmonari

Questo protocollo dimostra l'uso di un cardioverter-defibrillatore (ICD) impiantabile per indurre in modo affidabile aritmie ventricolari, eseguire cardioversione interna e ottenere registrazioni ECG intracardiache in un modello suino.

Modello di arresto cardiaco suino con defibrillatore impiantabile

Langendorff-mode perfusione cuore isolato, in collaborazione...

Valutazione della funzione cardiaca e Energetica nel Cuori mouse isolato mediante 31 P spettroscopia NMR

Impara a sviluppare un modello di fibrillazione ventricolare a lungo termine in cuori di ratto isolati utilizzando l'apparato di Langendorff. Questo metodo semplice ed economico supporta la ricerca in elettrofisiologia cardiaca.

Un modello di fibrillazione ventricolare a lungo termine in cuori di ratto isolati

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