Instillazione di lipopolisaccaridi intratracheali non invasivi nei topi

Il nostro protocollo propone un nuovo metodo di somministrazione non invasivo di LPS dalla trachea al polmone, in modo più accurato. Le persone che stanno provando questo metodo per la prima volta dovrebbero fare molti sforzi per trovare la posizione della trachea. Per preparare la piattaforma di intubazione, passare la corda attraverso i due fori e legare le sue estremità alle piccole sporgenze nella parte superiore del montante.

Quindi, attaccare due elastici a ciascuna estremità della graffetta e fissarli sul retro del montante. Infine, fissare il riser alla base con un angolo di 90 gradi. Montare la cannula su una penna cannula e accendere la luce della penna.

Quindi, disinfettare le piccole pinze chirurgiche e la pipetta Pasteur usando il 70% di alcol. Per preparare la soluzione composta in esame, aggiungere tre milligrammi di lipopolisaccaride, o LPS, in un millilitro di pH 7,2 PBS. Quindi, sciogliere 10 milligrammi di pentobarbital sodico in un millilitro di soluzione salina normale e filtrare la soluzione utilizzando un filtro a siringa da 0,45 micrometri.

Posizionare il topo anestetizzato sulla piattaforma di intubazione. Quindi fissare i denti anteriori superiori con la corda e i due avampiedi con gli elastici. Usando una pinzetta, estrai la lingua e tienila.

Spingere lentamente la cannula lungo la bocca fino all'epiglottide mandibolare. Individuare la trachea con la luce della penna cannula e inserire lentamente la cannula al suo interno. Quindi ritirare la penna per intubazione, lasciando la cannula all'interno.

Inserire la pipetta Pasteur nel giunto della cannula e premere la testa. Dopo il successo dell'intubazione endotracheale, utilizzando una microsiringa a testa piatta, instillare la soluzione LPS preparata a tre milligrammi per dose di chilogrammo attraverso la cannula. Una volta terminato, estrarre la microsiringa e la cannula.

Rimuovere il mouse dalla piattaforma di intubazione e metterlo in una gabbia separata per recuperare. Osservare lo stato respiratorio del topo fino a quando non recupera e riprende conoscenza. A 12 ore dall'instillazione tracheale di LPS, l'espressione di una citochina infiammatoria, TNF-alfa, e il rapporto peso secco e umido polmonare sono stati valutati e confrontati con altri metodi di instillazione.

I livelli sierici di TNF-alfa nel gruppo di intubazione orofaringea non invasiva sono aumentati significativamente rispetto al gruppo di controllo in bianco. Anche il rapporto polmone secco-umido è stato aumentato, raggiungendo lo stesso livello del gruppo di intubazione tracheale chirurgica. È importante non graffiare la trachea nel processo di ricerca della posizione della trachea.

La tecnica potrebbe anche essere utilizzata per somministrare altri farmaci che devono raggiungere il polmone in modo non invasivo.