Name: Valutazione della risposta immunitaria di un vaccino adiuvante nanoemulsione contro linfezione da Staphylococcus aureus resistente alla meticillina (MRSA) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-09-01T12:40:00.000+00:00
Duration: 7 min 32 s
Description: Scopri la preparazione di un vaccino adiuvante nanoemulsione contro MRSA e la valutazione della risposta immunitaria in vivo. Questo metodo migliora l'efficacia vaccinale e la stabilità del prodotto.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Questa ricerca è stata supportata dal n. 2021YFC2302603 del National Key Research and Development Program of China, No. 32070924 e 32000651 del NSFC e No. 2019jcyjA-msxmx0159 del Natural Science Foundation Project Program di Chongqing.

<ol><li>Cheung, G. Y. C., Bae, J. S., Otto, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenicity+and+virulence+of+Staphylococcus+aureus%5BTitle%5D)+AND+%22Virulence%22%5BJournal%5D)">Pathogenicity and virulence of Staphylococcus aureus.</a> Virulence. 12 (1), 547-569 (2021).</li>
<li>Lakhundi, S., Zhang, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methicillin-resistant+Staphylococcus+aureus%3A+molecular+characterization%2C+evolution%2C+and+epidemiology%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Microbiology+Reviews%22%5BJournal%5D)">Methicillin-resistant Staphylococcus aureus: molecular characterization, evolution, and epidemiology.</a> Clinical Microbiology Reviews. 31 (4), e00020(2018).</li>
<li>Mancuso, G., Midiri, A., Gerace, E., Biondo, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+antibiotic+resistance%3A+the+most+critical+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22Pathogens%22%5BJournal%5D)">Bacterial antibiotic resistance: the most critical pathogens.</a> Pathogens. 10 (10), 1310(2021).</li>
<li>Goullé, J. P., Grangeot-Keros, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aluminum+and+vaccines%3A+Current+state+of+knowledge%5BTitle%5D)+AND+%22Medecine+et+Maladies+Infectieuses%22%5BJournal%5D)">Aluminum and vaccines: Current state of knowledge.</a> Medecine et Maladies Infectieuses. 50 (1), 16-21 (2020).</li>
<li>Shi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vaccine+adjuvants%3A+Understanding+the+structure+and+mechanism+of+adjuvanticity%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Vaccine adjuvants: Understanding the structure and mechanism of adjuvanticity.</a> Vaccine. 37 (24), 3167-3178 (2019).</li>
<li>Geoghegan, S., O'Callaghan, K. P., Offit, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vaccine+safety%3A+myths+and+misinformation%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Vaccine safety: myths and misinformation.</a> Frontiers in Microbiology. 11, 372(2020).</li>
<li>Pandey, P., Gulati, N., Makhija, M., Purohit, D., Dureja, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoemulsion%3A+a+novel+drug+delivery+approach+for+enhancement+of+bioavailability%5BTitle%5D)+AND+%22Recent+Patents+on+Nanotechnology%22%5BJournal%5D)">Nanoemulsion: a novel drug delivery approach for enhancement of bioavailability.</a> Recent Patents on Nanotechnology. 14 (4), 276-293 (2020).</li>
<li>Ko, E. J., Kang, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunology+and+efficacy+of+MF59-adjuvanted+vaccines%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Vaccines+%26+Immunotherapeutics%22%5BJournal%5D)">Immunology and efficacy of MF59-adjuvanted vaccines.</a> Human Vaccines & Immunotherapeutics. 14 (12), 3041-3045 (2018).</li>
<li>Chen, B. H., Inbaraj, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoemulsion+and+nanoliposome+based+strategies+for+improving+anthocyanin+stability+and+bioavailability%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">Nanoemulsion and nanoliposome based strategies for improving anthocyanin stability and bioavailability.</a> Nutrients. 11 (5), 1052(2019).</li>
<li>Zuo, Q. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+protective+immunity+of+a+novel+subunit+fusion+vaccine+in+a+murine+model+of+systemic+MRSA+infection%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the protective immunity of a novel subunit fusion vaccine in a murine model of systemic MRSA infection.</a> PLoS One. 8 (12), e81212(2013).</li>
<li>Sun, H. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+systemic+and+mucosal+immunity+against+methicillin-resistant+Staphylococcus+aureus+infection+by+a+novel+nanoemulsion+adjuvant+vaccine%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Induction of systemic and mucosal immunity against methicillin-resistant Staphylococcus aureus infection by a novel nanoemulsion adjuvant vaccine.</a> International Journal of Nanomedicine. 10, 7275-7290 (2015).</li>
<li>National Pharmacopoeia Committee. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Chinese+Pharmacopoeia%22">Chinese Pharmacopoeia</a>. , China Medical Science and Technology Press. Beijing. 1088(2020).</li>
<li>Kontomaris, S. V., Stylianou, A., Malamou, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atomic+force+microscopy+nanoindentation+method+on+collagen+fibrils%5BTitle%5D)+AND+%22Materials%22%5BJournal%5D)">Atomic force microscopy nanoindentation method on collagen fibrils.</a> Materials. 15 (7), 2477(2022).</li>
<li>Zeng, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+immunodominant+epitope-specific+monoclonal+antibody+cocktail+improves+survival+in+a+mouse+model+of+Staphylococcus+aureus+bacteremia%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">An immunodominant epitope-specific monoclonal antibody cocktail improves survival in a mouse model of Staphylococcus aureus bacteremia.</a> The Journal of Infectious Diseases. 223 (10), 1743-1752 (2021).</li>
<li>Roy, U., Kornitzer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heme-iron+acquisition+in+fungi%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Heme-iron acquisition in fungi.</a> Current Opinion in Microbiology. 52, 77-83 (2019).</li>
<li>Saeed, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+toxins+in+musculoskeletal+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Orthopaedic+Research%22%5BJournal%5D)">Bacterial toxins in musculoskeletal infections.</a> Journal of Orthopaedic Research. 39 (2), 240-250 (2021).</li>
<li>Xu, Q., Zhou, A., Wu, H., Bi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+in+vivo+evaluation+of+baicalin-loaded+W%2FO+nanoemulsion+for+lymphatic+absorption%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceutical+Development+and+Technology%22%5BJournal%5D)">Development and in vivo evaluation of baicalin-loaded W/O nanoemulsion for lymphatic absorption.</a> Pharmaceutical Development and Technology. 24 (9), 1155-1163 (2019).</li>
<li>Singh, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoemulsion%3A+Concepts%2C+development+and+applications+in+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Controlled+Release%22%5BJournal%5D)">Nanoemulsion: Concepts, development and applications in drug delivery.</a> Journal of Controlled Release. 252, 28-49 (2017).</li>
<li>Kadakia, E., Shah, L., Amiji, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mathematical+modeling+and+experimental+validation+of+nanoemulsion-based+drug+transport+across+cellular+barriers%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceutical+Research%22%5BJournal%5D)">Mathematical modeling and experimental validation of nanoemulsion-based drug transport across cellular barriers.</a> Pharmaceutical Research. 34 (7), 1416-1427 (2017).</li>
<li>Bhattacharjee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DLS+and+zeta+potential-What+they+are+and+what+they+are+not%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Controlled+Release%22%5BJournal%5D)">DLS and zeta potential-What they are and what they are not.</a> Journal of Controlled Release. 235, 337-351 (2016).</li>
<li>Francis, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+vaccine+technologies%5BTitle%5D)+AND+%22The+Veterinary+Clinics+of+North+America.+Small+Animal+Practice%22%5BJournal%5D)">Recent advances in vaccine technologies.</a> The Veterinary Clinics of North America. Small Animal Practice. 48 (2), 231-241 (2018).</li>
<li>Tripathi, N. K., Shrivastava, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+developments+in+recombinant+protein-based+dengue+vaccines%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Recent developments in recombinant protein-based dengue vaccines.</a> Frontiers in Immunology. 9, 1919(2018).</li>
<li>Wilder-Smith, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengue+vaccine+development%3A+status+and+future%5BTitle%5D)+AND+%22Bundesgesundheitsblatt+Gesundheitsforschung+Gesundheitsschutz%22%5BJournal%5D)">Dengue vaccine development: status and future.</a> Bundesgesundheitsblatt Gesundheitsforschung Gesundheitsschutz. 63 (1), 40-44 (2020).</li>
<li>Korneev, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+sepsis+and+septic+shock%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Mouse models of sepsis and septic shock.</a> Molecular Biology. 53 (5), 799-814 (2019).</li>
</ol>

Gli autori dichiarano di non avere conflitti di interesse in questo lavoro.

IsdB, una proteina di superficie ancorata alla parete cellulare batterica e regolata dal ferro, svolge un ruolo importante nel processo di ottenimento del ferro eme15. Hla, tossina alfa, è tra le tossine batteriche più efficaci conosciute nell'MRSA e può formare pori nelle cellule eucariotiche e interferire con l'adesione e le cellule epiteliali16. Nel nostro studio, una nuova proteina antigene MRSA di ricombinazione (HI) è stata costruita ed espressa con ...

Lo Staphylococcus aureus meticillino-resistente (MRSA) è un patogeno opportunista con uno dei più alti tassi di infezione in un'unità di terapia intensiva (ICU) reparti1, reparti di cardiologia e reparti ustionati in tutto il mondo. L'MRSA presenta alti tassi di infezione, mortalità e ampia resistenza ai farmaci, presentando grandi difficoltà nel trattamento clinico2. Nell'elenco delle priorità globali dei batteri resistenti agli antibiotici pubblicato dall'Organizzazione mondiale della sanità (OMS) nel 2017, l'MRSA è stato elencatonella categoria 3 più critica. È quindi urgentemente necessario un vaccino contro l'infezione da MRSA.
L'adiuvante di alluminio è stato utilizzato per lungo tempo e il meccanismo ausiliario adiuvante è relativamente chiaro, sicuro, efficace e ben tollerato4. Gli adiuvanti di alluminio sono attualmente un tipo di coadiuvante ampiamente utilizzato. Si ritiene generalmente che gli antigeni adsorbiti su particelle di sale di alluminio possano migliorare la stabilità e migliorare la capacità del sito di iniezione di assorbire gli antigeni, fornendo un buon assorbimento e un lento rilascio5. Attualmente, il principale svantaggio degli adiuvanti di alluminio è che mancano di un effetto adiuvante o mostrano solo un debole effetto adiuvante su alcuni antigeni candidati al vaccino6. Inoltre, gli adiuvanti di alluminio inducono reazioni di ipersensibilità IgE-mediate5. Pertanto, è necessario sviluppare nuovi adiuvanti per stimolare una risposta immunitaria più forte.
Gli adiuvanti di nanoemulsione sono sistemi di dispersione colloidale composti da olio, acqua, tensioattivi e cotensioattivi7. Inoltre, gli adiuvanti sono termodinamicamente stabili e isotropi, possono essere autoclavati o stabilizzati mediante centrifugazione ad alta velocità e possono formarsi spontaneamente in condizioni di preparazione blande. Diversi adiuvanti di emulsione (come la serie MF59, NB001-002, la serie AS01-04, ecc.) sono attualmente sul mercato o in fase di ricerca clinica, ma le loro dimensioni delle particelle sono superiori a 160 nm8. Pertanto, i vantaggi dei preparati medicinali su scala nanometrica (1-100 nm) (vale a dire, grande superficie specifica, piccola dimensione delle particelle, effetto superficiale, alta energia superficiale, effetto di piccole dimensioni ed effetto di tunneling quantistico macro) non possono essere pienamente sfruttati. Nel presente protocollo, è stato riportato che un nuovo adiuvante basato sulla tecnologia della nanoemulsione con una dimensione del diametro di 1-100 nm mostra una buona attività adiuvante9. Abbiamo testato la proteina di fusione del frammento attivo della subunità del vaccino di ricombinazione HI (mutante α-emolisina [Hla] e proteina di fusione attiva del frammento attivo della subunità N2 del fattore B della superficie dello ione Fe [IsdB]); Sono state stabilite una serie di procedure per esaminare le proprietà fisiche e la stabilità, valutare la sua risposta anticorpale specifica dopo somministrazione intramuscolare e testare l'effetto protettivo del vaccino utilizzando un modello di infezione sistemica murina.

<table><tbody><tr><td>5424-Piccola centrifuga ad alta velocitàFA-45-24-11</td><td>Eppendorf, Germania&nbsp;</td><td></td><td></td>5424000495</tr><tr><td>piastre a 96 pozzetti</td><td>Corning Incorporated, USA</td><td>CLS3922</td><td></td></tr><tr><td>AFM Dimension FastScan</td><td>BRUKER, Germania&nbsp;</td><td></td><td></td>null</tr><tr><td>Lampada ad alcool</td><td>Shenzhen Yibaxun Technology Co., Cina</td><td>YBS-AA-11408</td><td></td></tr><tr><td>Balb/c mouse&nbsp;</td><td>Beijing HFK Bioscience Co. Ltd.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BCIP/NBT</td><td>Fuzhou Maixin Biotechnology Development Company, Cina</td><td>Lettore di micropiastre BCIP/NBT</td><td></td></tr><tr><td>Bio-Rad 6.0</td><td>Bio-Rad Laboratories Incorporated Limited Co., CA, USA</td><td>null</td><td></td></tr><tr><td>BL21 Competent Cell</td><td>Merck millipore, Germania</td><td>70232-3CN</td><td></td></tr><tr><td>BSA-100G</td><td>Sigma-Aldrich, USA</td><td>B2064-100G</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuga 5810 R</td><td>Eppendorf, Germania&nbsp;</td><td></td><td></td>5811000398</tr><tr><td>Coomassie blu brillante G-250 soluzione di colorazione</td><td>MIKX, Cina</td><td>DB236</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione di decolorazione</td><td>BOSTER, Cina</td><td>AR0163-2</td><td></td></tr><tr><td>Coltivatore a temperatura eretta con elettroriscaldamento HH-B11-420</td><td>Shanghai Yuejin Medical Device Factory, Cina</td><td>null</td><td></td></tr><tr><td>Apparecchio per elettroforesi</td><td>Beijing Liuyi Instrument Factory, Cina</td><td>DYCZ-25D</td><td></td></tr><tr><td>Immagine del gel</td><td>Tanon, USA</td><td>nullo</td><td></td></tr><tr><td>Glutatione-Sefarosio Resina GST</td><td>Mei5bio, Cina</td><td>resina</td><td></td>per cromatografia di affinità</tr><tr><td>H2SO4</td><td>Chengdu KESHI Chemical Co., LTD, Cina</td><td>7664-93-9</td><td></td></tr><tr><td>HI proteina ricombinante</td><td>Terza Università Medica Militare, Cina</td><td>110-27-0</td><td></td></tr><tr><td>HRP - Capra anti-topo IgG</td><td>Biodragon, Cina</td><td>BF03001</td><td></td></tr><tr><td>HRP- Capra anti-topo IgG1</td><td>Biodragon, Cina</td><td>BF03002R</td><td></td></tr><tr><td>HRP- Capra anti-topo IgG2a</td><td>Biodragon, Cina</td><td>BF03003R</td><td></td></tr><tr><td>HRP- Capra anti-topo IgG2b</td><td>Biodragon, Cina</td><td>BF03004R</td><td></td></tr><tr><td>Ciclo di inoculazione</td><td>Haimen Feiyue Co., LTD, Cina</td><td>YR-JZH-1UL</td><td></td></tr><tr><td>Cloni IsdB e Hla</td><td>Shanghai Jereh Biotechnology Co, Cina</td><td>null</td><td></td></tr><tr><td>Noce moscata isopropilica (adiuvante farmaceutico)</td> <td>SEPPIC, Francia</td><td>null</td><td></td></tr><tr><td>isopropil- &beta;-D-1-mercaptogalactopiranoside</td><td>fdbio, Cina</td><td>FD3278-1</td><td></td></tr><tr><td>LB brodo coltura-medium</td><td>Pechino AOBOX Biotechnology Co., LTD, Cina</td><td>02-136</td><td></td></tr><tr><td>Lampada per fisioterapia a</td> cartuccia <td>Guangzhou Runman Medical Equipment Co., Cina</td><td>7600</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuga refrigerata a bassa temperatura</td><td>Eppendorf, Germania...</td><td></td><td></td>null</tr><tr><td>Malvern NANO ZS</td><td>Malvern Instruments Ltd., Regno Unito</td><td>null</td><td></td></tr><tr><td>MH (A) medio</td><td>Beijing AOBOX Biotechnology Co., LTD, Cina</td><td>02-051</td><td></td></tr><tr><td>MH (B) medio</td><td>Beijing AOBOX Biotechnology Co., LTD, Cina</td><td>02-052</td><td></td></tr><tr><td>Micro piastra lavatrice 405 LSRS</td><td>Bio Tek Instruments, Inc Highland&nbsp; Park,USA</td><td>null</td><td></td></tr><tr><td>Mini-TBC Compact Film Transfer Instrument</td><td>BeiJingDongFangRuiLi Co.,LTD,China</td><td>1658030</td><td></td></tr><tr><td>MMC packing</td><td>TOSOH(SHANGHAI)CO.,LTD</td><td></td><td></td></tr> 0022818 <tr><td>MRSA252</td><td>USA, ATCC</td><td>null</td><td></td></tr><tr><td>Nanodrop spettrofotometro ultravioletto</td><td>Thermo Scientific, USA</td><td>null</td><td></td></tr><tr><td>New FlashTM Protein any KD PAGE Kit gel per elettroforesi proteica</td><td>DAKEWE, Cina</td><td>8012011</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>biosharp, Cina</td><td>null</td><td></td></tr><tr><td>PCR, Amplifier</td><td>Thermal Cycler, USA</td><td>plasmide</td> ricombinante genico null <td></td></tr><tr><td>pGEX-target</td><td>Shanghai Jereh Biotechnology Co, Cina</td><td>B3528G</td><td></td></tr><tr><td>Acido fosfotungstico</td><td>G-CLONE, Cina</td><td>Pipetta CS1231-25g</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Eppendorf, Germania&nbsp;</td><td></td><td></td>3120000844</tr><tr><td>olio di ricino poliossietilato (adiuvante farmaceutico)</td><td>Aladdin, Cina</td><td>K400327-1kg</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo primario</td><td>Laboratorio fatto in casa:da topi immunizzati con siero positivo</td><td>nullo</td><td>Vedere il riferimento 11 per i dettagli</td></tr><tr><td>glicole propilenico (adiuvante farmaceutico)</td><td>Sigma-Aldrich, USA</td><td>P4347-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Marcatore proteico</td><td>Thermo Scientufuc, USA</td><td>26616</td><td></td></tr><tr><td>MEMBRANA DI TRASFERIMENTO PVDF</td><td>Invitrogen, USA</td><td>88518</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio elettronico a scansione</td><td>JEOL, Giappone</td><td>JSM-IT800</td><td></td></tr><tr><td>Pentobarbital di sodio</td><td>Merck, Germania</td><td>Tc-P8411</td><td></td></tr><tr><td>Talos L120C TEM</td><td>Thermo Fisher, USA</td> soluzione di colore <td>TMB nullo</td><td></td></tr><tr><td></td><td>TIAN GEN, Cina</td><td>PA107-01</td><td></td></tr><tr><td>Kit tartaruga</td><td>Xiamen Bioendo Technology Co., LTD</td><td>ES80545</td><td></td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Macklin, Cina</td><td>9005-64-5</td><td></td></tr></tbody></table>

valutazione della risposta immunitaria di un vaccino adiuvante nanoemulsione contro l'infezione da staphylococcus aureus resistente alla meticillina (mrsa)

Evaluating the Immune Response of a Nanoemulsion Adjuvant Vaccine Against Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus (MRSA) Infection

I vaccini adiuvanti a nanoemulsione hanno attirato molta attenzione a causa delle loro piccole dimensioni delle particelle, dell'elevata stabilità termica e della capacità di indurre risposte immunitarie valide. Tuttavia, stabilire una serie di protocolli completi per valutare la risposta immunitaria di un nuovo vaccino adiuvante nanoemulsione è vitale. Pertanto, questo articolo presenta una procedura rigorosa per determinare le caratteristiche fisico-chimiche di un vaccino (mediante microscopia elettronica a trasmissione [TEM], microscopia a forza atomica [AFM] e diffusione dinamica della luce [DLS]), la stabilità dell'antigene e del sistema del vaccino (mediante un test di centrifuga ad alta velocità, un test di stabilità termodinamica, SDS-PAGE e western blot) e la risposta immunitaria specifica (IgG1, IgG2a e IgG2b). Utilizzando questo approccio, i ricercatori possono valutare accuratamente l'effetto protettivo di un nuovo vaccino adiuvante nanoemulsione in un modello murino di MRSA252 letale. Con questi protocolli, è possibile identificare l'adiuvante del vaccino nanoemulsione più promettente in termini di potenziale adiuvante efficace. Inoltre, i metodi possono aiutare a ottimizzare nuovi vaccini per lo sviluppo futuro.

È stato valutato il protocollo per la preparazione del vaccino adiuvante nanoemulsione e i test in vitro e in vivo di questo vaccino. TEM, AFM e DLS sono stati utilizzati per determinare le importanti caratteristiche del potenziale zeta e della dimensione delle particelle sulla superficie di questo campione (Figura 1). SDS-PAGE e western blotting hanno mostrato che la quantità di antigene nel precipitato e nel surnatante non si è degradata significativamente dopo la centrif...

Il presente protocollo prepara e valuta le proprietà fisiche, la risposta immunitaria e l'effetto protettivo in vivo di un nuovo vaccino adiuvante nanoemulsione.

Valutazione della risposta immunitaria di un vaccino adiuvante nanoemulsione contro l'infezione da Staphylococcus aureus resistente alla meticillina (MRSA)

Nanoemulsion adjuvant vaccines have attracted extensive attention because of their small particle size, high thermal stability, and ability to induce ...

Il protocollo dimostrato ha sottolineato l'approccio sperimentale diretto ed efficace e i passaggi dettagliati per gli effetti della risposta immunitaria di nuovi adiuvanti virali. Questo protocollo fornisce alla ricerca non solo un metodo di valutazione fondamentalmente immune per il vaccino adiuvante, ma può anche determinare la loro stabilità di massa. Per iniziare, prendi la soluzione di lavoro da 10 milligrammi per millilitro della proteina dell'antigene MRSA HI e, ad essa, aggiungi sequenzialmente i tre eccipienti, isopropilmiristato, olio di ricino di poliossietilene e glicole propilenico, mantenendo un rapporto di massa di uno è a sei è a tre.Mescolare bene la miscela, quindi aggiungere gradualmente acqua pura sterilizzata per raggiungere un volume di sistema di 10 millilitri. Per preparare il vaccino nanoemulsione con il metodo di emulsificazione a bassa energia, mescolare a 500 rotazioni al minuto e 25 gradi Celsius per circa 20 minuti. Successivamente, il vaccino nanoemulsione contenente un milligrammo per millilitro di proteine viene ottenuto come liquido trasparente trasparente.Per il rivestimento dell'antigene del saggio immunoassorbente enzimatico o della piastra ELISA, diluire l'antigene della proteina HI a 10 microgrammi per millilitro con la soluzione di rivestimento e aggiungere 100 microlitri di antigene diluito per pozzetto nella piastra ELISA. Incubare la piastra a quattro gradi Celsius durante la notte. Dopo l'incubazione, lavare la piastra con 300 microlitri di PBST per pozzetto.Sigillare i pozzetti con 300 microlitri di soluzione sigillante per pozzetto per due ore a 37 gradi Celsius, quindi diluire tre microlitri del siero di topi da ciascun gruppo sperimentale 100 volte aggiungendo 297 microlitri di PBST e vortice il siero diluito. Aggiungere 100 microlitri di siero diluito per pozzetto nella piastra ELISA rivestita per ciascun campione di siero. Allo stesso modo, diluire i sieri di controllo positivi e negativi 100 volte con PBST aggiungendo quattro microlitri di siero di controllo positivo o negativo a 396 microlitri di PBST, seguito dalla miscelazione del vortice.Per eseguire la diluizione a doppio rapporto, aggiungere 200 microlitri del siero sperimentale precedentemente diluito alla prima fila della piastra ELISA rivestita, quindi aggiungere 100 microlitri di PBST a tutti i pozzetti, ad eccezione di quelli nelle file uno e 12. Quindi, regolare la pistola per pipette a 100 microlitri e trasferire 100 microlitri di siero dalla prima fila alla seconda fila contenente PBST. Mescolare il contenuto nella seconda fila 10 volte usando la pistola per pipette.Allo stesso modo, eseguire uno è a due diluizioni successive del siero fino alla riga 11. Una volta fatto, scartare 100 microlitri di liquido dalla fila 11. Aggiungere 100 microlitri di siero negativo e positivo diluito a ciascun pozzetto corrispondente nella riga 12 seguendo il modello di esempio.Sigillare la piastra ELISA con pellicola trasparente e incubare a 37 gradi Celsius per un'ora. Nel frattempo, diluire l'anticorpo secondario anti-topo IgG HRP 10.000 volte aggiungendo PBST. Dopo l'incubazione di un'ora, lavare la piastra ELISA con 300 microlitri di PBST per pozzetto per pulire gli anticorpi non legati, quindi aggiungere 100 microlitri di anticorpo secondario diluito a ciascun pozzetto e incubare la piastra a 37 gradi Celsius per 40 minuti.Lavare la piastra con 300 microlitri di PBST per pozzetto, quindi aggiungere 100 microlitri di soluzione di sviluppo del colore TMB a ciascun pozzetto. Posizionare le piastre a 37 gradi Celsius e al riparo dalla luce per 10 minuti. Dopo di che, terminare immediatamente la reazione con 50 microlitri di acido solforico molare.Rilevare la densità ottica o i valori di OD a 415 nanometri utilizzando un marcatore enzimatico entro 15 minuti dalla terminazione. Le caratteristiche fisiche del nuovo vaccino a nanoemulsione sono state analizzate utilizzando la microscopia elettronica a trasmissione e la microscopia a forza atomica. La diffusione dinamica della luce è stata utilizzata per determinare la distribuzione granulometrica e il potenziale zeta del campione.SDS-PAGE e western blotting hanno mostrato che la quantità di antigene nel precipitato e nel surnatante non differiva significativamente dopo la centrifugazione, indicando che il vaccino era strutturalmente intatto, specifico e immunogenico. Il vaccino adiuvante nanoemulsione ha aumentato significativamente i titoli anticorpali totali IgG, IgG1 e IgG2a dei topi. L'immunogenicità del vaccino proteico è stata significativamente migliorata.I valori sierici di OD IgG2b a 450 nanometri erano più alti quando PBS è stato utilizzato a una diluizione da uno a 5.000. Il modello letale dei topi MRSA 252 rifletteva che il vaccino in nanoemulsione mostrava un buon effetto protettivo e inibiva efficacemente l'infezione batterica con MRS A 252, migliorando il tasso di sopravvivenza dei topi infetti. La preparazione della nanoemulssione e l'aggiunta di siero alla pianta sono le più importanti.Inoltre, dove il rilevamento del titolo anticorpale, si dovrebbe prestare attenzione a correggere un più ampio e liquido a base di fuori. Oltre agli adiuvanti, questo metodo può essere utilizzato anche per l'evoluzione immunitaria di altri array matematici, come le materie plastiche o i sistemi di consegna.

evaluating-immune-response-nanoemulsion-adjuvant-vaccine-against

Research

Ricerca

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologia e Infezioni

Questo video dimostra un'efficiente tecnica di omogeneizzazione per generare un'emulsione antigene-adiuvante per indurre l'encefalomielite autoimmune sperimentale (EAE) in un modello murino. L'emulsione contiene un autoantigene - la glicoproteina oligodendrocitaria della mielina (MOG) - in fase acquosa, circondata da una fase oleosa continua comprendente un batterio patogeno inattivato. L'emulsione garantisce un rilascio prolungato di antigeni per una risposta immunitaria prolungata.

Preparazione di un'emulsione antigene-adiuvante per indurre l'encefalomielite autoimmune

Questo video dimostra un metodo per valutare la risposta immunitaria degli anticorpi a un nuovo vaccino adiuvante a nanoemulsione in topi pre-immunizzati. L'immunizzazione migliora la risposta anticorpale, come confermato dalla determinazione dei titoli anticorpali IgG.

Misurazione dei livelli di immunoglobulina G rispetto a un vaccino di prova in un siero di topo

Questo video dimostra la produzione di vaccini tumorali in nanoemulsione. I depositi stabili del serbatoio dell'olio che trasportano peptidi sintetici e adiuvanti sono prodotti mediante nanoemulsione a bassa energia, offrendo una promessa significativa per l'immunoterapia tumorale.

Preparazione di un vaccino adiuvante a nanoemulsione

Descriviamo tecniche basate sull'imaging di animali interi e citometria a flusso per monitorare l'espansione delle cellule T CD8+ antigene-specifiche in risposta all'immunizzazione con nanoparticelle in un modello murino di vaccinazione.

Imaging Whole-animale e di citometria a flusso tecniche di analisi di Antigen-specific CD8 + cellule T Risposte dopo nanoparticelle vaccinazione

Il protocollo presenta metodi dettagliati per valutare se l'adiuvante nanoemulsione ofiopogonina D promuove risposte immunitarie cellulari efficaci.

In vitro Valutazione dell'attività cellulare del vaccino adiuvante nanoemulsione ofiopogonina D

Qui, presentiamo metodi dettagliati per la preparazione e la valutazione del vaccino tumorale nanoemulsione autoassemblato nasale in vitro e in vivo.

Preparazione, caratteristiche, tossicità e valutazione dell'efficacia del vaccino tumorale nanoemulsione autoassemblato nasale in vitro e in vivo

Per indurre l'encefalomielite autoimmune sperimentale, un modello animale di sclerosi multipla, i topi vengono immunizzati con un'emulsione acqua-in-olio contenente un autoantigene e un adiuvante completo di Freund. Mentre esistono diversi protocolli per la preparazione di queste emulsioni, qui viene presentato un protocollo di omogeneizzazione rapido, semplice e standardizzato per la preparazione dell'emulsione.

Un metodo di omogeneizzazione rapido, semplice e standardizzato per preparare emulsioni antigene/adiuvanti per indurre l'encefalomielite autoimmune sperimentale

Introduciamo quattro metodi per valutare le attività antimicrobiche delle nanoparticelle e delle superfici nanostrutturate utilizzando tecniche in vitro . Questi metodi possono essere adattati per studiare le interazioni di diverse nanoparticelle e superfici nanostrutturate con una vasta gamma di specie microbiche.

Valutazione delle attività antimicrobiche di nanoparticelle e superfici nanostrutturate in vitro

In questo protocollo, abbiamo sviluppato un acido retinoico (RA) incapsulato in nanoemulsione cationica da utilizzare come adiuvante per promuovere risposte sistemiche e mucose antigene-specifiche. Aggiungendo l'artrite reumatoide approvata dalla FDA alla nanoemulsione, le sIgA antigene-specifiche sono state promosse nella vagina e nell'intestino tenue dopo l'iniezione intramuscolare della nanoemulsione.

Acido retinoico incapsulato con nanoemulsione cationica come adiuvante per promuovere risposte sistemiche e mucose specifiche per le OVA

Protocolli per l'utilizzo aperto biofilm flusso sistema con reattori a goccia e flusso di rotazione del disco reattori sono presentati in dettaglio.

L&#39;uso del flusso gocciolamento e Reattori disco rotante per Staphylococcus aureus Analisi Biofilm

Scopri la preparazione di un vaccino adiuvante nanoemulsione contro MRSA e la valutazione della risposta immunitaria in vivo. Questo metodo migliora l'efficacia vaccinale e la stabilità del prodotto.

Valutazione della risposta immunitaria di un vaccino adiuvante nanoemulsione contro linfezione da Staphylococcus aureus resistente alla meticillina (MRSA) (Video) | JoVE Journal

Valutazione della risposta immunitaria di un vaccino adiuvante nanoemulsione contro l'infezione da Staphylococcus aureus resistente alla meticillina (MRSA)

Esplora altri video