Name: Impianto di minipompa osmotica per aumentare la concentrazione di glucosio nel liquido cerebrospinale di topo (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-04-07T14:20:00.000+00:00
Duration: 6 min 21 s
Description: Impara l'impianto di minipompa osmotica per aumentare il glucosio nel liquido cerebrospinale di topo senza alterare la glicemia. Questo metodo consente di studiare gli effetti diretti sul cervello e sulla neurodegenerazione.

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Il National Institutes of Health concede DK124619 a KHC.
Premio per i fondi di avviamento e la ricerca pilota, Dipartimento di Medicina, Università di Rochester, NY, a KHC.
Il Del Monte Institute for Neuroscience Pilot Research Award, Università di Rochester, a KHC.
Premio per la ricerca universitaria, Ufficio del vicepresidente per la ricerca, Università di Rochester, NY, a KHC.
MUR ha progettato ed eseguito il metodo, analizzato i risultati, preparato grafici e figure e scritto e modificato il manoscritto. KHC ha concepito e supervisionato lo studio, analizzato i risultati e scritto e modificato il manoscritto. KHC è il garante di questo lavoro. Tutti gli autori hanno approvato la versione finale del manoscritto.

Tutte le procedure sui topi sono state approvate dall'Institutional Animal Care and Use Committee dell'Università di Rochester e sono state eseguite secondo le linee guida del servizio sanitario pubblico degli Stati Uniti per la cura umana e l'uso di animali da esperimento. I topi maschi C57BL / 6J di sei settimane utilizzati per questo studio sono stati ottenuti commercialmente. Tutti gli animali sono stati alloggiati in gruppo (5 topi per gabbia) in una stanza con un ciclo giorno/notte di 12 ore e hanno avuto accesso a cibo e acqua ad libitum. Dopo che i topi sono stati impiantati con una cannula per infondere glucosio nel ventricolo laterale, sono stati alloggiati singolarmente per prevenire eventuali danni agli impianti da altri topi.
1. Assemblaggio di minipompe osmotiche
<ol><li>Preparare il liquido cerebrospinale artificiale (aCSF) secondo il seguente protocollo. Sciogliere NaCl (8,66 g), KCl (0,224 g), CaCl 2,2H 2 O (0,206 g) e MgCl 2,6H 2 O (0,163 g) in 500 ml di acqua sterile per preparare la soluzione A. Sciogliere Na 2 HPO 4,7H 2 O (0,214 g) e NaH 2 PO4. H2O (0,027 g) in 500 mL di acqua sterile per preparare la soluzione B. Quindi, mescolare la soluzione A e B in un rapporto 1: 1 per preparare l'aCSF. NOTA: Questa formulazione di aCSF non contiene glucosio.</li>
	<li>Per preparare la soluzione di glucosio al 50%, aggiungere 50 g di glucosio a 50 ml di aCSF in un becher. Posizionare il becher su una piastra riscaldante e portare la temperatura della sospensione a 60 °C. Mescolare la sospensione con un agitatore magnetico fino a quando il glucosio è completamente sciolto.</li>
	<li>Aggiungere aCSF al becher per rendere il volume finale di 100 ml. Passare la soluzione attraverso il filtro dei pori da 0,22 μm per sterilizzarla.</li>
	<li>Preparare una soluzione salina allo 0,9% (NaCl) e far passare la soluzione attraverso il filtro da 0,22 μm.</li>
	<li>Posizionare tutti i componenti della minipompa e del kit di infusione in un vassoio sterile e tagliare il tubo dal kit di infusione cerebrale a 1 pollice di lunghezza con una forbice sterile. Tenere il tubo con un emostatico sterile e spingerlo sulla parte superiore di un'estremità della cannula. Collegare l'altra estremità del tubo al lato superiore del modulatore di flusso. Coprire entrambe le estremità del tubo con una piccola quantità di colla per una connessione più forte.</li>
	<li>Collegare un ago da 27 G a una siringa da 1 mL e riempirla con aCSF o la soluzione di glucosio. Inserire l'ago da 27 G in un piccolo pezzo di tubo. Quindi, collegare il tubo all'estremità aperta del modulatore di flusso e riempirlo con la soluzione corrispondente fino a quando le gocce della soluzione iniziano a fuoriuscire dalla cannula. Rimuovere eventuali bolle d'aria intrappolate nel tubo.</li>
	<li>Per riempire la minipompa, tenere la pompa in posizione verticale e inserire l'ago della siringa nella pompa. Riempirlo con la soluzione corrispondente fino a quando una goccia della soluzione inizia a formarsi all'apertura della minipompa.</li>
	<li>Inserire lentamente il modulatore di flusso nella pompa facendo attenzione a non introdurre bolle d'aria nel gruppo.</li>
	<li>Dopo aver assemblato le minipompe osmotiche, trasferirle in un tubo conico da 50 ml. Riempire il tubo con la soluzione salina sterile in modo che le pompe siano completamente sommerse, assicurandosi che la cannula rimanga fuori dalla soluzione salina. Quattro di queste pompe assemblate possono essere collocate in un tubo da 50 ml.</li>
	<li>Posizionare liberamente il tappo su ciascun tubo e incubare le pompe a 37 °C fino all'innesco per almeno 48 ore.</li>
</ol>2. Chirurgia per l'impianto di pompe osmotiche
<ol><li>Procedura pre-operatoria<ol><li>Sterilizzare gli strumenti chirurgici in autoclave e lasciarli raffreddare per almeno 30 minuti prima dell'uso. Le condizioni dell'autoclave prevedono la sterilizzazione a vapore a 121 °C per 30 minuti.</li>
		<li>Disinfettare l'area chirurgica con etanolo al 70%. Pulire le manopole, le barre auricolari e la superficie del telaio stereotassico. NOTA: La chirurgia deve essere eseguita in un ambiente asettico, tenendo presente di evitare di toccare superfici non sterili durante l'esecuzione dell'intervento chirurgico. Sostituire i guanti se vi è il sospetto di contaminazione.</li>
		<li>Posizionare il topo in una camera di anestesia per anestetizzarlo con isoflurano al 3% miscelato in aria per 3-5 minuti. Quindi, rimuovere il mouse dalla camera e posizionarlo su un drappeggio sterile. Mantenere l'anestesia tramite un cono nasale all'1,5% -2%.</li>
		<li>Pizzica la zampa posteriore del topo per osservare qualsiasi riflesso e verificare la profondità dell'anestesia.</li>
		<li>Iniettare 5 mg/kg di carprofen per via sottocutanea per l'analgesia.</li>
		<li>Utilizzare tosatrici pulite per agganciare l'area chirurgica sulla testa del mouse. Strofinare il cuoio capelluto prima con una soluzione di povidone-iodio e poi con tamponi imbevuti di alcool accuratamente per almeno 2 minuti. Ripeti questo processo almeno tre volte.</li>
		<li>Applicare un lubrificante per gli occhi per evitare che gli occhi si secchino durante l'intervento chirurgico.</li>
	</ol></li>
	<li>Chirurgia<ol><li>Posizionare il mouse sul telaio stereotassico e montare la testa sulla barra incisiva. Coprire il naso con il cono del naso. Applicare teli sterili per fissare l'area chirurgica.</li>
		<li>Spostare il flusso di isoflurano al cono del naso. Continuare a mantenere l'anestesia all'1,5%-2% di isoflurano.</li>
		<li>Posizionare una piastra elettrica sotto il mouse per mantenere la temperatura corporea.</li>
		<li>Indossare nuovi guanti sterili e, con un bisturi, praticare un'incisione sulla linea mediana (~ 10-15 mm di lunghezza) sul cuoio capelluto. Esporre la superficie del cranio con una spatola mentre si utilizzano punte di cotone per pulire eventuali sanguinamenti. NOTA: Utilizzare un cauterizzatore se sanguina abbondantemente, il che è raro.</li>
		<li>Strofinare con una punta di cotone immersa in perossido di idrogeno al 3% per esporre le suture craniche.</li>
		<li>Prendi nota di bregma e lambda per navigare le coordinate del cranio. Imposta tutte le coordinate a zero su bregma. NOTA: Queste coordinate sono state ottenute da un atlante cerebrale di topo14. La distanza bregma-lambda di riferimento nell'atlante è di 4,21 mm. Per correggere le differenze basate sull'età e sul sesso nelle dimensioni del cranio, la distanza bregma-lambda per ciascun topo è stata misurata e poi divisa per 4,21 mm per ottenere un fattore di moltiplicazione. Ad esempio, se la distanza tra bregma e lambda era di 4,65 mm, la divisione per 4,21 mm dava un fattore di moltiplicazione di 1,10. Tutte le coordinate ottenute dall'atlante sono state poi moltiplicate con questo fattore per misurare le coordinate effettive utilizzate per praticare il foro. Nell'esempio precedente, le coordinate antero-posteriore (AP) e mediale-laterale (ML) risultanti sarebbero rispettivamente 0,55 e 1,1 mm (cioè 1,1 x 0,5 o 1 mm).</li>
		<li>Usa un trapano elettrico per fare un foro a queste coordinate: 0,5 mm posteriormente al bregma e 1 mm lateralmente alla linea mediana verso destra. NOTA: Durante la perforazione del foro nel cranio, fare attenzione a non rompere la dura madre. Assicurarsi che la punta del trapano sia sterile. Può essere collocato con altri strumenti nella stessa busta per autoclave per la sterilizzazione.</li>
		<li>Inserire un emostatico sotto la pelle incisa e spingerlo nel punto in cui verrà impiantata la minipompa osmotica. Aprire e chiudere delicatamente l'emostatico per creare una tasca per la minipompa.</li>
		<li>Utilizzare un emostatico sterile per prelevare una minipompa osmotica innescata dalla punta del modulatore di flusso. Spingere la pompa attraverso la pelle incisa nella tasca. NOTA: Fare attenzione a non lasciare che la pompa e la cannula tocchino superfici non sterili.</li>
		<li>Applicare un po 'di colla sul lato inferiore della cannula e fissarla nel supporto della cannula. Abbassare lentamente la cannula attraverso il foro praticato ventrale di 2 mm sulla superficie del cranio. Lasciarlo lì per almeno 5 minuti per consentire alla colla di solidificarsi.</li>
		<li>Prima di inserire la cannula nel cervello, assicurarsi che la cannula non sia ostruita e che la soluzione scorra correttamente. NOTA: A volte, il glucosio può depositarsi sulla punta della cannula a causa di una portata molto bassa, bloccando il flusso.</li>
		<li>Con l'aiuto di una forbice, agganciare la parte superiore della cannula assicurandosi che non si stacchi dalla superficie del cranio.</li>
		<li>Coprire la cannula con uno strato di cemento dentale per un supporto extra.</li>
		<li>Utilizzare suture di nylon (dimensioni 5-0 e 30 pollici di lunghezza) per chiudere la ferita e applicare antibiotici topici sulla ferita per prevenire l'infezione.</li>
		<li>Spegnere l'isoflurano e lasciare che l'animale si riprenda dall'anestesia. Quindi, trasferire l'animale in una nuova gabbia pulita.</li>
	</ol></li>
	<li>Assistenza post-operatoria<ol><li>Dopo l'intervento chirurgico, monitorare il mouse per almeno 1 settimana.</li>
		<li>Somministrare 5 mg/kg di carprofen per via sottocutanea, una volta ogni 24 ore per tre giorni dopo l'intervento.</li>
		<li>Lasciare che la ferita guarisca completamente prima di rimuovere le suture 7-10 giorni dopo l'intervento. NOTA: È stato osservato che i topi con alto livello di glucosio nel liquido cerebrospinale impiegavano più tempo a guarire. Tagliare le unghie sulle zampe posteriori del topo riduce al minimo la possibilità di lesioni al sito dell'incisione a causa del comportamento graffiante dei topi.</li>
	</ol></li>
</ol>3. Sostituzione delle minipompe
NOTA: Poiché le minipompe utilizzate in questo studio durano solo 4 settimane, la sostituzione delle minipompe è stata testata anche per prolungare la durata dell'infusione di glucosio, come potrebbe essere richiesto nel caso di studi a lungo termine. Ciò ha comportato i seguenti passaggi.
<ol><li>Preparare i topi per la chirurgia come descritto sopra.</li>
	<li>Fare una piccola incisione verticale di 1 cm nella pelle leggermente sopra la pompa.</li>
	<li>Inserire un emostato sotto la pelle incisa ed estrarre la pompa.</li>
	<li>Rimuovere la pompa dal tubo e collegare una nuova pompa innescata al tubo.</li>
	<li>Inserire nuovamente la pompa all'interno e cucire la pelle.</li>
	<li>Seguire le stesse istruzioni di cura post-operatoria come descritto sopra.</li>
</ol>4. Procedura di raccolta dei QCS
<ol><li>Preparazione<ol><li>Tirare capillari di vetro di 1 mm di diametro con un estrattore di micropipette per ottenere punte da 0,5 mm di diametro. Le impostazioni sono: calore = 800, trazione = 15, velocità = 5 e tempo = 200 unità. Mettere i capillari tirati in una scatola sterile fino all'uso.</li>
		<li>Collegare un ago da 27 G a una siringa da 1 ml. Inserire il capillare tirato sull'ago e utilizzare un piccolo nastro adesivo per fissare la connessione.</li>
		<li>Fissare saldamente la siringa in un supporto capillare di un micromanipolatore.</li>
		<li>Quindi, preparare il topo per la chirurgia, come descritto nella procedura pre-operatoria sopra.</li>
	</ol></li>
	<li>Procedura chirurgica<ol><li>Posizionare il mouse sulla cornice stereotassica. Dopo aver fissato la testa sul telaio, come descritto in precedenza, ruotare le manopole per inclinare la testa in modo che il naso sia rivolto verso il basso. Applicare teli sterili per fissare l'area chirurgica.</li>
		<li>Fai una piccola incisione sulla superficie dorsale, partendo dal piano intra-uditivo fino al lato caudale. NOTA: Fare attenzione a non danneggiare il tubo durante l'incisione.</li>
		<li>Rimuovere il supporto dal corpo del mouse e lasciare riposare il mouse verticalmente in modo che il collo sia completamente esteso dorsalmente.</li>
		<li>Con l'aiuto di una pinza smussata curva, taglia delicatamente in due i muscoli posteriori del collo dalla linea mediana per creare una piccola finestra. Quindi, utilizzare un applicatore di punta di cotone bagnato per spostare delicatamente i muscoli del collo dalla linea mediana alla periferia.</li>
		<li>Osservare se la cisterna magna è esposta, che appare come una finestra triangolare con una membrana dura trasparente.</li>
		<li>Posizionare il gruppo micromanipolatore sul telaio stereotassico accanto al mouse assicurandosi che la punta capillare non tocchi alcuna superficie.</li>
		<li>Rompere delicatamente la punta capillare senza disturbare la configurazione.</li>
		<li>Mentre si guarda nella lente d'ingrandimento (ingrandimento di 2,25x), ruotare le manopole corrispondenti sul micromanipolatore per allineare lentamente e spostare la punta capillare verso la cisterna magna.</li>
		<li>Una certa resistenza si avverte una volta che la punta capillare tocca la membrana della cisterna magna. Spingere molto lentamente la punta contro la membrana con l'aiuto delle manopole. NOTA: Fare attenzione a non danneggiare i vasi sanguigni nella membrana. Questo passaggio è molto importante per evitare qualsiasi contaminazione del sangue nel liquido cerebrospinale.</li>
		<li>Forare molto delicatamente la membrana. Il liquido cerebrospinale inizierà a fluire nel capillare in una sola volta a causa della pressione negativa nel capillare.</li>
		<li>Lasciare la configurazione per alcuni minuti fino a quando ~ 10 μL di CSF non vengono raccolti nel capillare.</li>
		<li>Quindi, estrarre lentamente il capillare dalla cisterna magna e premere delicatamente un applicatore sterile a punta di cotone contro l'apertura della cisterna magna per fermare la perdita di liquido cerebrospinale.</li>
		<li>Rimuovere con cautela il capillare dalla siringa e collegarlo a un distributore di lampadine a microcap. Premere il bulbo per trasferire il liquido cerebrospinale in una provetta sterile per microcentrifuga.</li>
		<li>Posizionare un supporto sotto il mouse e ruotare le manopole stereotassiche per livellare la testa.</li>
		<li>Chiudere la ferita con punti di sutura in nylon.</li>
		<li>Iniettare 300 μL di soluzione salina sterile per via sottocutanea prima di rimuovere il topo dall'apparecchio.</li>
		<li>Dare cure post-operatorie agli animali come descritto sopra, fino al momento di rimuovere le suture - ~ 7-10 giorni dopo l'intervento chirurgico.</li>
	</ol></li>
</ol>5. Dosaggio del glucosio
<ol><li>Seguire il protocollo come descritto nel kit di analisi colorimetrica del glucosio.</li>
	<li>Diluire la soluzione tampone fosfato di sodio fornita nel kit fino a 50 mM di concentrazione in acqua ultrapura.</li>
	<li>Preparare gli standard di glucosio in intervalli 0, 2,5, 5, 7,5, 10, 15, 20, 25 e 50 mg / dL dalla soluzione madre da 1.000 mg / dL fornita nel kit in soluzione tampone diluita.</li>
	<li>Preparare una diluizione di 7 volte dei campioni di CSF nel tampone. Ad esempio, se il volume totale del CSF raccolto è di 10 μL, il volume diluito di sette volte sarà di 70 μL.</li>
	<li>Pipettare 15 μL di glucosio standard e CSF diluito in duplicati in una piastra da 96 pozzetti.</li>
	<li>Pipettare 85 μL di tampone diluito in ciascuno dei pozzetti con standard e CSF.</li>
	<li>Aggiungere 6 mL di tampone diluito al flaconcino della miscela enzimatica calorimetrica del glucosio e vortire per alcuni secondi per miscelare accuratamente.</li>
	<li>Aggiungere 100 μL della preparazione della miscela enzimatica a ciascun pozzetto per avviare la reazione.</li>
	<li>Sigillare la piastra con un foglio di copertura e picchiettare delicatamente sulla piastra per miscelare i reagenti.</li>
	<li>Posizionare la piastra in un'incubatrice a 37 °C per 10 minuti. Le fiale con alto contenuto di glucosio iniziano a diventare immediatamente viola.</li>
	<li>Dopo 10 minuti, rimuovere il coperchio e misurare l'assorbanza a 500-520 nm utilizzando un lettore di piastre.</li>
	<li>Calcolare la concentrazione di glucosio nei campioni di CSF interpolando i loro valori dalla curva standard.</li>
</ol>6. Saggio della glicemia
<ol><li>Fai un piccolo nick laterale alla coda del topo usando una lama di rasoio e usa una goccia di sangue per misurare la glicemia con un glucometro, secondo le istruzioni del manuale.</li>
</ol>

<ol><li>Moheet, A., Mangia, S., Seaquist, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+diabetes+on+cognitive+function+and+brain+structure%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+the+New+York+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Impact of diabetes on cognitive function and brain structure.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1353, 60-71 (2015).</li>
<li>Takeda, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diabetes-accelerated+memory+dysfunction+via+cerebrovascular+inflammation+and+Abeta+deposition+in+an+Alzheimer+mouse+model+with+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Diabetes-accelerated memory dysfunction via cerebrovascular inflammation and Abeta deposition in an Alzheimer mouse model with diabetes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 107 (15), 7036-7041 (2010).</li>
<li>Arvanitakis, Z., Wilson, R. S., Bienias, J. L., Evans, D. A., Bennett, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diabetes+mellitus+and+risk+of+Alzheimer+disease+and+decline+in+cognitive+function%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Diabetes mellitus and risk of Alzheimer disease and decline in cognitive function.</a> Archives of Neurology. 61 (5), 661-666 (2004).</li>
<li>Zilliox, L. A., Chadrasekaran, K., Kwan, J. Y., Russell, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diabetes+and+cognitive+impairment%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Diabetes+Reports%22%5BJournal%5D)">Diabetes and cognitive impairment.</a> Current Diabetes Reports. 16 (9), 87(2016).</li>
<li>Reno, C. M., Litvin, M., Clark, A. L., Fisher, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defective+counterregulation+and+hypoglycemia+unawareness+in+diabetes%3A+mechanisms+and+emerging+treatments%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology+and+Metabolism+Clinics+of+North+America%22%5BJournal%5D)">Defective counterregulation and hypoglycemia unawareness in diabetes: mechanisms and emerging treatments.</a> Endocrinology and Metabolism Clinics of North America. 42 (1), 15-38 (2013).</li>
<li>Cryer, P. E., Davis, S. N., Shamoon, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoglycemia+in+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Care%22%5BJournal%5D)">Hypoglycemia in diabetes.</a> Diabetes Care. 26 (6), 1902-1912 (2003).</li>
<li>Hwang, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoglycemia+unawareness+in+type+1+diabetes+suppresses+brain+responses+to+hypoglycemia%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Hypoglycemia unawareness in type 1 diabetes suppresses brain responses to hypoglycemia.</a> The Journal of Clinical Investigation. 128 (4), 1485-1495 (2018).</li>
<li>Cryer, P. E., Gerich, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose+counterregulation%2C+hypoglycemia%2C+and+intensive+insulin+therapy+in+diabetes+mellitus%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Glucose counterregulation, hypoglycemia, and intensive insulin therapy in diabetes mellitus.</a> The New England Journal of Medicine. 313 (4), 232-241 (1985).</li>
<li>Tigchelaar, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elevated+cerebrospinal+fluid+glucose+levels+and+diabetes+mellitus+are+associated+with+activation+of+the+neurotoxic+polyol+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetologia%22%5BJournal%5D)">Elevated cerebrospinal fluid glucose levels and diabetes mellitus are associated with activation of the neurotoxic polyol pathway.</a> Diabetologia. 65 (7), 1098-1107 (2022).</li>
<li>Zheng, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cognitive+decline+in+type+2+diabetic+db%2Fdb+mice+may+be+associated+with+brain+region-specific+metabolic+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+et+Biophysica+Acta.+Molecular+Basis+of+Disease%22%5BJournal%5D)">Cognitive decline in type 2 diabetic db/db mice may be associated with brain region-specific metabolic disorders.</a> Biochimica et Biophysica Acta. Molecular Basis of Disease. 1863 (1), 266-273 (2017).</li>
<li>Ernst, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diabetic+db%2Fdb+mice+exhibit+central+nervous+system+and+peripheral+molecular+alterations+as+seen+in+neurological+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Translational+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Diabetic db/db mice exhibit central nervous system and peripheral molecular alterations as seen in neurological disorders.</a> Translational Psychiatry. 3 (5), 263(2013).</li>
<li>Wang, Y., Yang, Y., Liu, Y., Guo, A., Zhang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cognitive+impairments+in+type+1+diabetes+mellitus+model+mice+are+associated+with+synaptic+protein+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">Cognitive impairments in type 1 diabetes mellitus model mice are associated with synaptic protein disorders.</a> Neuroscience Letters. 777, 136587(2022).</li>
<li>Jolivalt, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Type+1+diabetes+exaggerates+features+of+Alzheimer%27s+disease+in+APP+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">Type 1 diabetes exaggerates features of Alzheimer's disease in APP transgenic mice.</a> Experimental Neurology. 223 (2), 422-431 (2010).</li>
<li>Paxinos, G., Franklin, K. B. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPaxinos%2C+G+%22Paxinos+and+Franklin%27s+The+mouse+brain+in+stereotaxic+coordinates%22">Paxinos and Franklin's The mouse brain in stereotaxic coordinates</a>. , Academic Press. (2019).</li>
<li>Vinik, A. I., Maser, R. E., Mitchell, B. D., Freeman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diabetic+autonomic+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Care%22%5BJournal%5D)">Diabetic autonomic neuropathy.</a> Diabetes Care. 26 (5), 1553-1579 (2003).</li>
<li>Furman, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Streptozotocin-induced+diabetic+models+in+mice+and+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols%22%5BJournal%5D)">Streptozotocin-induced diabetic models in mice and rats.</a> Current Protocols. 1 (4), 78(2021).</li>
<li>Grieb, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracerebroventricular+streptozotocin+injections+as+a+model+of+Alzheimer%27s+disease%3A+in+search+of+a+relevant+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Intracerebroventricular streptozotocin injections as a model of Alzheimer's disease: in search of a relevant mechanism.</a> Molecular Neurobiology. 53 (3), 1741-1752 (2016).</li>
<li>Kealy, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+inflammation+alters+brain+energy+metabolism+in+mice+and+humans%3A+role+in+suppressed+spontaneous+activity%2C+impaired+cognition%2C+and+delirium%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Acute inflammation alters brain energy metabolism in mice and humans: role in suppressed spontaneous activity, impaired cognition, and delirium.</a> The Journal of Neuroscience. 40 (29), 5681-5696 (2020).</li>
<li>Dougherty, J. M., Roth, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+spinal+fluid%5BTitle%5D)+AND+%22Emergency+Medicine+Clinics+of+North+America%22%5BJournal%5D)">Cerebral spinal fluid.</a> Emergency Medicine Clinics of North America. 4 (2), 281-297 (1986).</li>
</ol>

Gli autori dichiarano di non avere conflitti di interesse.

Questo articolo riporta un protocollo dettagliato per aumentare il glucosio nel liquido cerebrospinale nei topi utilizzando minipompe osmotiche collegate a una cannula impiantata nel ventricolo laterale. L'infusione cronica di glucosio nel cervello del topo attraverso questa procedura sarà utile per delineare gli effetti dell'iperglicorrichia a lungo termine sulla cognizione, sul metabolismo sistemico del glucosio e sul bilancio energetico e per una migliore comprensione della patogenesi delle complicanze del diabete.</p...

Sia il diabete di tipo 1 che quello di tipo 2 compromettono la funzione cerebrale 1,2,3. Ad esempio, il diabete aumenta il rischio di declino cognitivo e disturbi neurodegenerativi, tra cui il morbo di Alzheimer 3,4. Inoltre, le persone con diabete hanno un rilevamento del glucosio difettoso nel cervello 5,6. Questo difetto contribuisce alla patogenesi dell'inconsapevolezza associata all'ipoglicemia e ad una risposta controregolatoria insufficiente all'ipoglicemia7,8, che può essere fatale se non trattata immediatamente.
Considerando che il diabete aumenta i livelli di glucosio nel sangue e nel liquido cerebrospinale (CSF)9, è importante determinare se uno o entrambi questi fattori contribuiscono alla compromissione della funzione cerebrale. Se il diabete provoca danni cerebrali da alto glucosio CSF da solo o in combinazione con altri fattori come la carenza di insulina o insulino-resistenza è anche una questione aperta. I modelli animali di diabete di tipo 1 e di tipo 2 mostrano declino cognitivo e neurodegenerazione oltre a un bilancio energetico influenzato e al metabolismo periferico del glucosio10,11,12,13. Tuttavia, da questi modelli, non è possibile disaccoppiare gli effetti selettivi di alti livelli di glucosio nel CSF rispetto ai livelli di glucosio nel sangue nel mediare le complicanze del diabete sulla funzione cerebrale.
Questo protocollo descrive i metodi per sviluppare un modello murino di iperglicorrichia per testare gli effetti di livelli di glucosio cronicamente elevati nel CSF sulla funzione cerebrale, sul bilancio energetico e sull'omeostasi del glucosio. Il modello murino sviluppato attraverso questa tecnica presenta uno strumento per studi che indagano il ruolo eziologico dell'omeostasi del glucosio disregolata sulla funzione neurale e comportamentale.
Pertanto, l'approccio proposto sarà utile per comprendere gli effetti diretti di elevati livelli di glucosio nel liquido cerebrospinale in varie condizioni fisiopatologiche.

<table><tbody><tr><td>0,22 &micro; m siringa filtro</td><td>Soluzioni a membrana</td><td>SFPES030022S</td><td></td></tr><tr><td>1 mL siringa sterile (punta Luer-lok)</td><td>BD</td><td>309628</td><td></td></tr><tr><td>1 mL TB siringa</td><td>BD</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>100 mL Bicchiere di vetro</td><td>Fisher&nbsp;</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>100% etanolo (Koptec)</td><td>DLI</td><td>UN170</td><td>Utilizzare una diluizione del 70% per pulire l'area chirurgica</td></tr><tr><td>Provetta conica da 50 ml</td><td>Fisher&nbsp;</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Indicatore di allineamento</td><td>KOPF</td><td>1905</td><td></td></tr><tr><td>Kit di infusione cerebrale Alzet</td><td>DURECT</td><td>Kit # 3; 0008851</td><td>Tagliare il tubo nel kit a 1 pollice di lunghezza</td></tr><tr><td>Pompa osmotica Alzet</td><td>DURECT</td><td>2004</td><td>Portata 0,25 &; Sistema</td></tr><tr><td>di anestesia</td> L/h <td>Kent</td><td>Scientific SomnoSuite</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione Betadine</td><td>Avrio Health</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2 . 2H2O</td><td>Fisher&nbsp;</td><td>C79-500</td><td></td></tr><tr><td>Supporto per cannula</td><td>KOPF</td><td>1966</td><td></td></tr><tr><td>Cannocchiale di centraggio</td><td>KOPF</td><td>1915</td><td></td></tr><tr><td>Cemento dentale liquido</td><td>Lang Dental</td><td>REF1404</td><td></td></tr><tr><td>Cemento dentale in polvere</td><td>Lang Dental</td><td>REF1220-C</td><td></td></tr><tr><td>D-glucosio &nbsp;</td><td>Trapano elettrico Sigma</td><td>G8270</td><td></td></tr><tr><td></td><td>KOPF</td><td>1911</td><td>Durante la perforazione di un foro evitare la rottura della dura madre</td></tr><tr><td>Lubrificante per gli occhi (Optixcare)</td><td>CLC Medica</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Sterilizzatore per perline di vetro (Germinator 500)</td><td>VWR</td><td>101326-488</td><td>Immergere gli strumenti in acqua sterile per farli raffreddare prima dell'intervento</td></tr><tr><td>chirurgico Kit per il dosaggio del glucosio</td><td>Cayman chemical</td><td>10009582</td><td></td></tr><tr><td>H2O2</td><td>Sigma</td><td>H1009-500ml</td><td>Applicare il 3% di H2O2 sulla superficie del cranio per rendere visibili le suture craniche.</td></tr><tr><td>Tagliacapelli</td><td>WAHL</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>termoforo</td><td>Heatpax</td><td>19520483</td><td></td></tr><tr><td>Emostatico</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano (Fluriso)</td><td>Zoetis</td><td>NDC1385-046-60</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>VWR</td><td>0395-500g</td><td></td></tr><tr><td>Supporto magnetico</td><td>WPI</td><td>M1</td><td></td></tr><tr><td>Lampada da tavolo con lente d'ingrandimento</td><td>Brightech</td><td>LightView Pro Flex 2</td><td></td></tr><tr><td>Spatola in metallo</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2 . 6H2O</td><td>Fisher&nbsp;</td><td>BP214-500</td><td></td></tr><tr><td>Micromanipolatore (destrorso)</td><td>WPI</td><td>M3301R</td><td></td></tr><tr><td>Micromanipolatore con display digitale</td><td>KOPF</td><td>1940</td><td></td></tr><tr><td>Na2HPO4 . 7H2O</td><td>Fisher&nbsp;</td><td>S373-500</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma</td><td>S7653-5Kg</td><td></td></tr><tr><td>NaH2PO4 . H2O</td><td>Fisher&nbsp;</td><td>S369-500</td><td></td></tr><tr><td>Neosporina</td><td>Johnson & Johnson</td><td>N/A Applicare</td> un <td>unguento topico per prevenire l'infezione</td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Bemis</td><td>DM-999</td><td></td></tr><tr><td>Rimadyl (Carprofen) 50mg/ml</td><td>Zoetis</td><td>N/A</td><td>5 mg/kg, sottocutaneo, per analgesia</td></tr><tr><td>Bisturi</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Sistema di allineamento stereotassico</td><td>KOPF</td><td>1900</td><td></td></tr><tr><td>Ago sterile calibro 27</td><td>BD</td><td>305109</td><td></td></tr><tr><td>Applicatori sterili con punta in cotone (Solon)</td><td>AMD Medicom</td><td>56200</td><td></td></tr><tr><td>Suture sterili in nylon (5.0)</td><td>Oasis</td><td>MV-661</td><td>Utilizzare sutura non assorbibile per chiudere la ferita</td></tr><tr><td>Forbici affilate sterili&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Lame chirurgiche sterili</td><td>VWR</td><td>55411-050</td><td></td></tr><tr><td>Guanti chirurgici (nitrile)</td><td>Ammex</td><td>N/A Sostituire</td><td>i guanti in caso di sospetto di contaminazione</td></tr><tr><td>Vassoio</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr></tbody></table>

impianto di minipompa osmotica per aumentare la concentrazione di glucosio nel liquido cerebrospinale di topo

Osmotic Minipump Implantation for Increasing Glucose Concentration in Mouse Cerebrospinal Fluid

Il diabete aumenta il rischio di declino cognitivo e compromette la funzione cerebrale. Se questa relazione tra glucosio alto e deficit cognitivi sia causale rimane elusiva. Inoltre, non è chiaro se questi deficit siano mediati da un aumento dei livelli di glucosio nel liquido cerebrospinale (CSF) e / o nel sangue. Ci sono pochissimi studi che studiano gli effetti diretti di alti livelli di glucosio nel liquido cerebrospinale sulla funzione del sistema nervoso centrale (SNC), in particolare sull'apprendimento e sulla memoria, poiché gli attuali modelli di diabete non sono sufficientemente sviluppati per affrontare tali domande di ricerca. Questo articolo descrive un metodo per aumentare cronicamente i livelli di glucosio nel CSF per 4 settimane infondendo continuamente glucosio nel ventricolo laterale utilizzando minipompe osmotiche nei topi. Il protocollo è stato convalidato misurando i livelli di glucosio nel liquido cerebrospinale. Questo protocollo ha aumentato i livelli di glucosio nel CSF a ~ 328 mg / dL dopo l'infusione di una soluzione di glucosio al 50% a una velocità di flusso di 0,25 μL / h, rispetto a una concentrazione di glucosio nel CSF di ~ 56 mg / dL nei topi che hanno ricevuto liquido cerebrospinale artificiale (aCSF). Inoltre, questo protocollo non ha influenzato i livelli di glucosio nel sangue. Pertanto, questo metodo può essere utilizzato per determinare gli effetti diretti di glucosio CSF alto sulla funzione cerebrale o su uno specifico percorso neurale indipendentemente dai cambiamenti nei livelli di glucosio nel sangue. Nel complesso, l'approccio qui descritto faciliterà lo sviluppo di modelli animali per testare il ruolo dell'alto livello di glucosio nel liquido cerebrospinale nelle caratteristiche di mediazione della malattia di Alzheimer e / o di altri disturbi neurodegenerativi associati al diabete.

I topi maschi sono stati impiantati con una cannula assemblata a una minipompa osmotica (Figura 1) per infondere cronicamente aCSF o una soluzione di glucosio al 50% nei loro ventricoli laterali (Figura 2). Il liquido cerebrospinale è stato raccolto 10 giorni dopo l'intervento chirurgico (Figura 3) per convalidare l'efficacia di questa procedura. I risultati hanno mostrato un aumento dei livelli di glucosio nel liquido cerebrospinal...

Questo articolo descrive un protocollo dettagliato per aumentare la concentrazione di glucosio nel liquido cerebrospinale (CSF) dei topi. Questo approccio può essere utile per studiare gli effetti del glucosio CSF alto sulla neurodegenerazione, sulla cognizione e sul metabolismo periferico del glucosio nei topi.

Impianto di minipompa osmotica per aumentare la concentrazione di glucosio nel liquido cerebrospinale di topo

Diabetes increases the risk of cognitive decline and impairs brain function. Whether or not this relationship between high glucose and cognitive deficits ...

Questa tecnica aumenta i livelli di glucosio del liquido cerebrospinale o del liquido cerebrospinale nei topi senza influenzare la loro concentrazione di glucosio nel sangue. Questo aiuta a studiare gli effetti diretti di alti livelli di glucosio nel liquido cerebrospinale sulla funzione cerebrale dell'animale. Questa tecnica può stabilire modelli animali per esplorare il ruolo teologico del glucosio CSF superiore sulla disfunzione cognitiva.Portando alla scoperta di nuovi bersagli molecolari per migliorare la funzione cognitiva. Il metodo aiuterà anche a determinare se alti livelli di glucosio nel CSF sono sufficienti per mediare i fenotipi dei disturbi neurodegenerativi nei topi. È necessario prestare attenzione al corretto assemblaggio e adescamento della configurazione della cannula e all'inserimento della cannula nel cervello con le coordinate corrette.Per iniziare l'intervento chirurgico per l'impianto di minipompa osmotica posizionare il topo anestetizzato sul telaio stereotassico. Montare la testa dell'animale sulla barra incisiva. Coprire il naso con il cono del naso per mantenere l'anestesia e collegare il flusso di isofluorato al cono del naso ad una velocità compresa tra l'1,5 e il 2%Posizionare una piastra riscaldante sotto il mouse per mantenere la temperatura corporea.Dopo aver disinfettato l'area chirurgica e praticato un'incisione, esporre la superficie del cranio con una spatola e pulire il sangue, se presente, con punte di cotone. Utilizzare un cauterizzatore se sanguina abbondantemente. Strofinare con una punta di cotone immersa nel 3% di perossido di idrogeno per esporre le suture craniche.Lavorando al microscopio, prendi nota di bregma e lambda per navigare nelle coordinate del cranio. Imposta tutte le coordinate a zero su bregma. Utilizzando un trapano elettrico con attenzione e senza rompere la dura madre fare un foro alle coordinate 0,5 millimetri posteriormente al bregma e 1 millimetro lateralmente alla linea mediana verso destra.Inserire un emostatico e aprirlo e chiuderlo delicatamente per creare una tasca per la mini pompa. Tenendo la pompa dalla punta del modulatore di flusso, spingerla attraverso la pelle incisa nella tasca creata. Applicare un po 'di colla sul lato inferiore della cannula e fissarla nel supporto della cannula.Assicurarsi che la cannula non sia ostruita e che la soluzione scorra correttamente. Quindi abbassare lentamente la cannula attraverso il foro praticato, due millimetri ventrale alla superficie del cranio. Lasciarlo lì per almeno cinque minuti per consentire alla colla di solidificarsi.Con l'aiuto delle forbici, agganciare la parte superiore della cannula assicurandosi che non si stacchi dalla superficie del cranio. Coprire la cannula con uno strato di cemento dentale per un supporto extra. Per la raccolta del liquido cerebrospinale o del liquido cerebrospinale, posizionare il mouse correttamente anestetizzato sul telaio stereotassico.Dopo aver fissato la testa sul telaio come dimostrato in precedenza ruotare le manopole per inclinare la testa in modo che il naso sia rivolto verso il basso. Dopo aver disinfettato l'area chirurgica e praticato un'incisione, rimuovere il supporto dal corpo del topo e lasciare riposare il topo verticalmente in modo che il collo sia completamente esteso dorsalmente. Utilizzando una pinza smussata curva, tagliare delicatamente in due i muscoli posteriori del collo dalla linea mediana per creare una piccola finestra.Quindi utilizzare un applicatore di punta di cotone bagnato per spostare delicatamente i muscoli del collo dalla linea mediana alla periferia. Osservare se la cisterna magna è esposta come una finestra triangolare con una membrana dura trasparente. Posizionare il gruppo micro manipolatore sul telaio stereotassico accanto al mouse assicurandosi che la punta capillare non tocchi alcuna superficie.Rompere delicatamente la punta capillare senza disturbare la configurazione. Ruotare le manopole corrispondenti sul micro manipolatore per allineare lentamente e spostare la punta capillare verso la cisterna magna. Una certa resistenza si avverte una volta che la punta capillare tocca la membrana della cisterna magna.Spingere molto lentamente la punta contro la membrana con l'aiuto delle manopole facendo attenzione a non danneggiare i vasi sanguigni nella membrana. Quando la membrana viene perforata, il liquido cerebrospinale scorre immediatamente nel capillare a causa della pressione capillare negativa. Lasciare la configurazione per alcuni minuti fino a quando circa 10 microlitri di CSF si raccolgono nel capillare.Rimuovere con cautela il capillare dalla siringa e collegarlo a un distributore di lampadine a microcap. Premere il bulbo per trasferire il liquido cerebrospinale in una provetta sterile per microcentrifuga. Posizionare il supporto sotto il mouse e ruotare le manopole stereotassiche per livellare la testa.Chiudere la ferita con punti di sutura in nylon. Iniettare 300 microlitri di soluzione salina sterile per via sottocutanea prima di rimuovere il topo dall'apparecchio. Dare assistenza postoperatoria agli animali fino al momento di rimuovere le suture, circa 7-10 giorni dopo l'intervento.Il liquido cerebrospinale raccolto 10 giorni dopo l'intervento chirurgico ha mostrato un aumento di circa sei volte del livello di glucosio nei topi, infuso con il 50% di glucosio rispetto a quello nei topi infusi con CSF. Tuttavia, i livelli di glucosio nel sangue non erano diversi tra i gruppi. Mentre si abbassa la cannula nel cervello, ritrarla indietro e controllare se il liquido cerebrospinale esce dal foro.È anche fondamentale identificare correttamente la cisterna magna e prevenire la contaminazione del liquido cerebrospinale con il sangue. Questa tecnica può anche essere utilizzata per fornire qualsiasi farmaco che non è in grado di attraversare la barriera emato-encefalica per testare il suo effetto sulla funzione cerebrale. Esiste un numero molto limitato di modelli animali di diabete e disturbano l'omeostasi del glucosio nell'ambiente periferico.Questo modello, tuttavia, aiuta a studiare i cambiamenti specifici del cervello nella regolazione del glucosio sulla funzione neurale.

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Come indagine delle neuroscienze diventa più sofisticato, l'indagine delle strutture cerebrali e circuiti richiede migliori livelli di accuratezza e alta risoluzione. Abbiamo sviluppato un metodo per la preparazione e l'impianto di un sistema di infusione cronica all'interno del cervello utilizzando un microcannula borosilicato con una punta di diametro 50 micron.

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In questo video, dimostriamo l'assemblaggio di un sistema di infusione cerebrale con pompa micro-osmotica seguito dal suo impianto chirurgico nel cranio del topo. Questo sistema consente la somministrazione continua di potenziali farmaci e facilita lo studio dei loro effetti sul cervello e sul tessuto cerebrale.

Sistema di infusione continua di farmaci in modello murino: una procedura chirurgica per impiantare un sistema di infusione con pompa microosmotica nel cervello di topo per la somministrazione continua di farmaci

Questo video mostra l'effetto dell'infusione continua di farmaci nel cervello del topo sui livelli di glucosio nel sangue. Il metabolismo del glucosio viene valutato prelevando il sangue dalla coda di un topo a digiuno e misurando i livelli di glucosio prima e dopo la somministrazione orale di glucosio. La tolleranza all'insulina viene valutata iniettando insulina nel topo, con livelli di glucosio registrati a intervalli specifici.

Valutazione dell'effetto dell'infusione continua di farmaci nel cervello del topo sui livelli periferici di glucosio

Fonte: Wang, X. et. al., Osmotic Pump-based Drug-delivery for In Vivo Remyelinning Research on the Central Nervous System. J. Vis. Exp. (2021)Questo video mostra il metodo per la somministrazione di farmaci neuroterapeutici utilizzando una pompa osmotica in un modello murino demielinizzato. Il rilascio controllato del farmaco promuove la rimielinizzazione attivando le cellule produttrici di mielina nel corpo calloso.

 Somministrazione di farmaci neuroterapeutici basata su pompa osmotica in un modello murino demielinizzato

L'attività di singoli neuroni di topi-adulti di età può essere studiato dissociandosi neuroni da regioni specifiche del cervello e l'utilizzo di membrana fluorescenti potenziale di imaging colorante. Da sperimentazioni risposte alle modifiche del glucosio, questa tecnica può essere utilizzata per studiare la sensibilità glucosio di adulti neuroni ipotalamici ventromedial.

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L&#39;impianto di Miniosmotic Pompe e consegna di traccianti Tract allo Studio Riorganizzazione Cervello in condizioni fisiopatologiche

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La demielinizzazione avviene in più malattie del sistema nervoso centrale. Una tecnica affidabile di somministrazione di farmaci in vivo è necessaria per i test antidroga rimielinizzanti. Questo protocollo descrive un metodo basato su pompa osmotica che consente la somministrazione di farmaci a lungo termine direttamente nel parenchima cerebrale e migliora la biodisponibilità del farmaco, con ampia applicazione nella ricerca sulla rimielinizzazione.

Somministrazione di farmaci a base di pompa osmotica per la ricerca sulla rimielinizzazione in vivo sul sistema nervoso centrale

Impara l'impianto di minipompa osmotica per aumentare il glucosio nel liquido cerebrospinale di topo senza alterare la glicemia. Questo metodo consente di studiare gli effetti diretti sul cervello e sulla neurodegenerazione.

Impianto di minipompa osmotica per aumentare la concentrazione di glucosio nel liquido cerebrospinale di topo

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