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Analisi di goccioline lipidiche colorate con fluorescenza con ricostruzione 3D per la valutazione...
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JoVE Journal Biochemistry
Analysis of Fluorescent-Stained Lipid Droplets with 3D Reconstruction for Hepatic Steatosis Assessment

Analisi di goccioline lipidiche colorate con fluorescenza con ricostruzione 3D per la valutazione della steatosi epatica

Full Text
8,696 Views
07:12 min
June 2, 2023

DOI: 10.3791/65206-v

Karina Garcia1,2,3,4, André Alves1,2,3, Teresa M. Ribeiro-Rodrigues1,2,3, Flávio Reis1,2,3, Sofia Viana1,2,3,4

1Institute of Pharmacology & Experimental Therapeutics & Coimbra Institute for Clinical and Biomedical Research (iCBR), Faculty of Medicine,University of Coimbra, 2Center for Innovative Biomedicine and Biotechnology (CIBB),University of Coimbra, 3Clinical Academic Center of Coimbra (CACC), 4Polytechnic Institute of Coimbra,Coimbra Health School

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Qui, dimostriamo un protocollo ottimizzato basato sulla fluorescenza BODIPY 493/503 per la caratterizzazione delle goccioline lipidiche nel tessuto epatico. Attraverso l'uso di proiezioni ortogonali e ricostruzioni 3D, il fluoroforo consente una discriminazione di successo tra steatosi microvescicolare e macrovescicolare e può rappresentare un approccio complementare ai protocolli istologici classici per la valutazione della steatosi epatica.

Questo approccio di imaging consente la ricostruzione tridimensionale della deposizione di goccioline lipidiche epatiche e supera i principali svantaggi della colorazione istologica classica che ha ridotto la discriminazione di successo tra steatosi micro e macrovescicolare. La valutazione della steatosi microvescicolare è quando vengono utilizzate colorazioni istologiche gold standard, sia che rosso olio, a causa della rottura e della fusione occasionale di goccioline lipidiche native. Il pro-BODIPY offre un'alternativa ai protocolli di routine per la valutazione della steatosi epatica microvescicolare grazie alla sua giusta idrofobicità per un rapido assorbimento e un'efficace marcatura delle goccioline lipidiche, essendo non solo insensibile alla polarità ambientale, ma anche estremamente selettivo.

Questo approccio di imaging racchiude applicazioni più ampie in combinazione con tecniche di immunochimica, consentendo la rilevazione simultanea di altri antigeni subcellulari che possono far progredire lo studio della biogenesi e della dinamica delle goccioline lipidiche, alla base della steatosi epatica micro e macrovescicolare.

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Biochimica Numero 196 Goccioline lipidiche BODIPY 493/503 fluoroforo lipidi neutri analisi confocale a scansione laser microvescicolare macrovescicolare steatosi epatica

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