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Immunofluorescenza multipla combinata con analisi di immagini spaziali per la valutazione clinica...
Immunofluorescenza multipla combinata con analisi di immagini spaziali per la valutazione clinica...
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Cancer Research
This content is Free Access.
JoVE Journal Cancer Research
Multiplex Immunofluorescence Combined with Spatial Image Analysis for the Clinical and Biological Assessment of the Tumor Microenvironment

Immunofluorescenza multipla combinata con analisi di immagini spaziali per la valutazione clinica e biologica del microambiente tumorale

Full Text
9,907 Views
06:05 min
June 2, 2023

DOI: 10.3791/65220-v

Nicolas Huyghe1, Elena Benidovskaya1, Simon Beyaert1, Aurélie Daumerie4, Finoula Maestre Osorio1, Frank Aboubakar Nana2,3, Caroline Bouzin4, Marc Van den Eynde1,5

1Institut de Recherche Expérimentale et Clinique (IREC), Pôle MIRO,Université Catholique de Louvain (UCLouvain), 2Institut de Recherche Expérimentale et Clinique (IREC), Pôle de Pneumologie, ORL et Dermatologie (PNEU),Université Catholique de Louvain (UCLouvain), 3Division of Pneumology, Cliniques Universitaires St-Luc,Université Catholique de Louvain (UCLouvain), 4IREC Imaging Platform,Université Catholique de Louvain (UCLouvain), 5Institut Roi Albert II, Department of Medical Oncology and Gastroenterology,Cliniques Universitaires St-Luc

AI Banner

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

In questo articolo viene descritto un protocollo per l'immunofluorescenza multipla (mIF) manuale di amplificazione del segnale di tiramido (TSA) combinato con l'analisi delle immagini e l'analisi spaziale. Questo protocollo può essere utilizzato con sezioni FFPE (paraffina-embedded fissate in formalina) per la colorazione di due o sei antigeni per vetrino a seconda dello scanner di vetrini disponibile in laboratorio.

Nel nostro laboratorio, stiamo studiando il cancro del colon-retto umano. La sua progressione verso la malattia metastatica e la sua risposta al trattamento, compresa l'immunoterapia. Stiamo cercando di trovare nuovi biomarcatori predittivi e prognostici studiando il microambiente immunitario tumorale e il microbioma intratumorale nella malattia primaria e metastatica.

Nel nostro progetto stiamo attualmente implementando diverse tecnologie come il sequenziamento dell'RNA, il sequenziamento dell'intero esoma, il sequenziamento TCR dell'analisi del DNA libero da cellule circolanti, l'immunofluorescenza e l'ibridazione dell'istituto di fluorescenza. In questo momento, la nostra sfida principale è quella di combinare la colorazione di ibridazione dell'istituto di fluorescenza con l'immunofluorescenza multiplex di amplificazione del segnale del timide per studiare l'interazione tra il microbioma e le cellule immunitarie. Il nostro metodo è robusto, riproducibile, facile da usare ed economico.

Può essere installato in qualsiasi laboratorio che possieda uno scanner a luce fluorescente e il metodo può essere utilizzato con qualsiasi anticorpo IHC disponibile in commercio in opposizione ai kit disponibili in commercio che di solito sono ottimizzati per pannelli ristretti di antigeni.

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