Name: Coltura primaria di cellule staminali della polpa dentale (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-05-05T13:50:00.000+00:00
Duration: 3 min 45 s
Description: Impara il metodo di coltura primaria di cellule staminali della polpa dentale tramite tecnica explant per studiare rigenerazione tissutale e sviluppare terapie innovative per difetti ossei.

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Riconosciamo il sostegno finanziario all'AK da parte del Dipartimento di Ricerca Sanitaria (DHR), ICMR, Govt. dell'India (DHR-NRI Grant # R.12015/01/2022-HR). SR ha ricevuto finanziamenti da ICMR, Govt. dell'India (Grant # 2020-7593/SCR-BMS) e PS ha ricevuto una borsa di studio da CSIR, Govt. of India. Siamo anche grati alla signora Sandhya Tokhi e alla signora Bhupinder Kaur per l'assistenza nella citometria a flusso, al nucleo centrale di strumentazione sofisticata (CSIC) e al PGIMER, Chandigarh per aver fornito supporto infrastrutturale.

Stabilire la coltura primaria di cellule staminali della polpa dentale

<ol><li>Bhattacharyya, S., Kumar, A., Lal Khanduja, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+voyage+of+stem+cell+toward+terminal+differentiation%3A+a+brief+overview%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biochimica+et+Biophysica+Sinica%22%5BJournal%5D)">The voyage of stem cell toward terminal differentiation: a brief overview.</a> Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 44 (6), 463-475 (2012).</li>
<li>Prentice, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Adult stem cells.</a> Circulation Research. 124 (6), 837-839 (2019).</li>
<li>Raik, S., Kumar, A., Bhattacharyya, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insights+into+cell-free+therapeutic+approach%3A+Role+of+stem+cell+%26%2334%3Bsoup-ernatant%26%2334%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+and+Applied+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Insights into cell-free therapeutic approach: Role of stem cell &#34;soup-ernatant&#34.</a> Biotechnology and Applied Biochemistry. 65 (2), 104-118 (2018).</li>
<li>Rodriguez-Fuentes, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells+current+clinical+applications%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Medical+Research%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells current clinical applications: a systematic review.</a> Archives of Medical Research. 52 (1), 93-101 (2021).</li>
<li>Yamazaki, K., Kawabori, M., Seki, T., Houkin, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+trials+of+stem+cell+treatment+for+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Clinical trials of stem cell treatment for spinal cord injury.</a> International Journal of Molecular Sciences. 21 (11), 3994(2020).</li>
<li>Kumar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+spectrum+of+secretome+regulates+the+relative+hepatogenic+potential+of+mesenchymal+stem+cells+from+bone+marrow+and+dental+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Molecular spectrum of secretome regulates the relative hepatogenic potential of mesenchymal stem cells from bone marrow and dental tissue.</a> Scientific Reports. 7 (1), 15015(2017).</li>
<li>Kumar, A., Kumar, V., Rattan, V., Jha, V., Bhattacharyya, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Secretome+cues+modulate+the+neurogenic+potential+of+bone+marrow+and+dental+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Secretome cues modulate the neurogenic potential of bone marrow and dental stem cells.</a> Molecular Neurobiology. 54 (6), 4672-4682 (2017).</li>
<li>Kumar, A., Kumar, V., Rattan, V., Jha, V., Bhattacharyya, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Secretome+proteins+regulate+comparative+osteogenic+and+adipogenic+potential+in+bone+marrow+and+dental+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimie%22%5BJournal%5D)">Secretome proteins regulate comparative osteogenic and adipogenic potential in bone marrow and dental stem cells.</a> Biochimie. 155, 129-139 (2018).</li>
<li>Kumar, A., Bhattacharyya, S., Rattan, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+uncontrolled+freezing+on+biological+characteristics+of+human+dental+pulp+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Bank%22%5BJournal%5D)">Effect of uncontrolled freezing on biological characteristics of human dental pulp stem cells.</a> Cell Tissue Bank. 16 (4), 513-522 (2015).</li>
<li>Raik, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+post-thaw+quality+of+dental+mesenchymal+stromal+cells+after+long-term+cryopreservation+by+uncontrolled+freezing%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Biochemistry+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Assessment of post-thaw quality of dental mesenchymal stromal cells after long-term cryopreservation by uncontrolled freezing.</a> Applied Biochemistry and Biotechnology. 191 (2), 728-743 (2020).</li>
<li>Gronthos, S., Mankani, M., Brahim, J., Robey, P. G., Shi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postnatal+human+dental+pulp+stem+cells+%28DPSCs%29+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Postnatal human dental pulp stem cells (DPSCs) in vitro and in vivo.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 97 (25), 13625-13630 (2000).</li>
<li>Tsutsui, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dental+pulp+stem+cells%3A+advances+to+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+and+Cloning%22%5BJournal%5D)">Dental pulp stem cells: advances to applications.</a> Stem Cells and Cloning. 13, 33-42 (2020).</li>
<li>Huang, G. T. -J., Gronthos, S., Shi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells+derived+from+dental+tissues+vs.+those+from+other+sources%3A+their+biology+and+role+in+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dental+Research%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells derived from dental tissues vs. those from other sources: their biology and role in regenerative medicine.</a> Journal of Dental Research. 88 (9), 792-806 (2009).</li>
<li>La Noce, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dental+pulp+stem+cells%3A+state+of+the+art+and+suggestions+for+a+true+translation+of+research+into+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dentistry%22%5BJournal%5D)">Dental pulp stem cells: state of the art and suggestions for a true translation of research into therapy.</a> Journal of Dentistry. 42 (7), 761-768 (2014).</li>
<li>Xiao, L., Tsutsui, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+human+dental+pulp+cells-derived+spheroids+in+serum-free+medium%3A+stem+cells+in+the+core%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Characterization of human dental pulp cells-derived spheroids in serum-free medium: stem cells in the core.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 114 (11), 2624-2636 (2013).</li>
<li>Kumar, A., Yun, H., Funderburgh, M. L., Du, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regenerative+therapy+for+the+cornea%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Retinal+and+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Regenerative therapy for the cornea.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 87, 101011(2022).</li>
<li>Gandia, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+dental+pulp+stem+cells+improve+left+ventricular+function%2C+induce+angiogenesis%2C+and+reduce+infarct+size+in+rats+with+acute+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Human dental pulp stem cells improve left ventricular function, induce angiogenesis, and reduce infarct size in rats with acute myocardial infarction.</a> Stem Cells. 26 (3), 638-645 (2008).</li>
<li>Yong, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+angiogenic+ability+between+SHED+and+DPSC+in+a+mice+model+with+critical+limb+ischemic%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering+and+Regenerative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Comparison of the angiogenic ability between SHED and DPSC in a mice model with critical limb ischemic.</a> Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 19 (4), 861-870 (2022).</li>
<li>Zhang, X. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+potential+of+dental+pulp+stem+cell+transplantation+in+a+rat+model+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Regeneration+Research%22%5BJournal%5D)">Therapeutic potential of dental pulp stem cell transplantation in a rat model of Alzheimer's disease.</a> Neural Regeneration Research. 16 (5), 893-898 (2021).</li>
<li>Kabir, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imperative+role+of+dental+pulp+stem+cells+in+regenerative+therapies%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Nigerian+Journal+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Imperative role of dental pulp stem cells in regenerative therapies: a systematic review.</a> Nigerian Journal of Surgery. 20 (1), 1-8 (2014).</li>
<li>Kumar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dental+pulp+stem+cell+secretome+ameliorates+d-galactose+induced+accelerated+aging+in+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Biochemistry+and+Function%22%5BJournal%5D)">Dental pulp stem cell secretome ameliorates d-galactose induced accelerated aging in rat model.</a> Cell Biochemistry and Function. 40 (5), 535-545 (2022).</li>
<li>Hirata, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multifaceted+therapeutic+benefits+of+factors+derived+from+dental+pulp+stem+cells+for+mouse+liver+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Multifaceted therapeutic benefits of factors derived from dental pulp stem cells for mouse liver fibrosis.</a> Stem Cells Translational Medicine. 5 (10), 1416-1424 (2016).</li>
<li>Fujii, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((regeneration+by+human+dental+pulp+stem+cells+using+a+helioxanthin+derivative+and+cell-sheet+technology%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Research+%26+Therapy%22%5BJournal%5D)">regeneration by human dental pulp stem cells using a helioxanthin derivative and cell-sheet technology.</a> Stem Cell Research & Therapy. 9 (1), 24(2018).</li>
<li>Ferrua, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+has+dental+pulp+stem+cells+isolation+been+conducted%3F+A+scoping+review%5BTitle%5D)+AND+%22Brazilian+Oral+Research%22%5BJournal%5D)">How has dental pulp stem cells isolation been conducted? A scoping review.</a> Brazilian Oral Research. 31, e87(2017).</li>
<li>Pilbauerova, N., Soukup, T., Suchankova Kleplova, T., Suchanek, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enzymatic+isolation%2C+amplification+and+characterization+of+dental+pulp+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Folia+Biologica%22%5BJournal%5D)">Enzymatic isolation, amplification and characterization of dental pulp stem cells.</a> Folia Biologica. 65 (3), 124-133 (2019).</li>
<li>Tatullo, M., Marrelli, M., Shakesheff, K. M., White, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dental+pulp+stem+cells%3A+function%2C+isolation+and+applications+in+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Tissue+Engineering+and+Regenerative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Dental pulp stem cells: function, isolation and applications in regenerative medicine.</a> Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 9 (11), 1205-1216 (2015).</li>
<li>Hilkens, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+isolation+methodology+on+stem+cell+properties+and+multilineage+differentiation+potential+of+human+dental+pulp+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+and+Tissue+Research%22%5BJournal%5D)">Effect of isolation methodology on stem cell properties and multilineage differentiation potential of human dental pulp stem cells.</a> Cell and Tissue Research. 353 (1), 65-78 (2013).</li>
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<li>Aryal Ac, S., Islam, M. S., Samsudin, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigation+of+the+effect+of+a+time+delay+on+the+characteristics+and+survival+of+dental+pulp+stem+cells+from+extracted+teeth%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Oral+Biology%22%5BJournal%5D)">Investigation of the effect of a time delay on the characteristics and survival of dental pulp stem cells from extracted teeth.</a> Archives of Oral Biology. 119, 104896(2020).</li>
<li>Langenbach, F., Handschel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+dexamethasone%2C+ascorbic+acid+and+%CE%B2-glycerophosphate+on+the+osteogenic+differentiation+of+stem+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Research+%26+Therapy%22%5BJournal%5D)">Effects of dexamethasone, ascorbic acid and β-glycerophosphate on the osteogenic differentiation of stem cells in vitro.</a> Stem Cell Research & Therapy. 4, 117(2013).</li>
<li>Jaiswal, N., Haynesworth, S. E., Caplan, A. I., Bruder, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteogenic+differentiation+of+purified%2C+culture-expanded+human+mesenchymal+stem+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Osteogenic differentiation of purified, culture-expanded human mesenchymal stem cells in vitro.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 64 (2), 295-312 (1997).</li>
<li>Bernar, A., Gebetsberger, J. V., Bauer, M., Streif, W., Schirmer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+the+alizarin+red+S+assay+by+enhancing+mineralization+of+osteoblasts%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Optimization of the alizarin red S assay by enhancing mineralization of osteoblasts.</a> International Journal of Molecular Sciences. 24 (1), 723(2022).</li>
<li>Coe, C. L., Lubach, G. R., Schneider, M. L., Dierschke, D. J., Ershler, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+rearing+conditions+alter+immune+responses+in+the+developing+infant+primate%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Early rearing conditions alter immune responses in the developing infant primate.</a> Pediatrics. 90, 505-509 (1992).</li>
<li>Bakopoulou, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+the+impact+of+two+different+isolation+methods+on+the+osteo%2Fodontogenic+differentiation+potential+of+human+dental+stem+cells+derived+from+deciduous+teeth%5BTitle%5D)+AND+%22Calcified+Tissue+International%22%5BJournal%5D)">Assessment of the impact of two different isolation methods on the osteo/odontogenic differentiation potential of human dental stem cells derived from deciduous teeth.</a> Calcified Tissue International. 88 (2), 130-141 (2011).</li>
<li>Arthur, A., Rychkov, G., Shi, S., Koblar, S. A., Gronthos, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+human+dental+pulp+stem+cells+differentiate+toward+functionally+active+neurons+under+appropriate+environmental+cues%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Adult human dental pulp stem cells differentiate toward functionally active neurons under appropriate environmental cues.</a> Stem Cells. 26 (7), 1787-1795 (2008).</li>
<li>Kim, B. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteoblastic%2Fcementoblastic+and+neural+differentiation+of+dental+stem+cells+and+their+applications+to+tissue+engineering+and+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering.+Part+B%2C+Reviews%22%5BJournal%5D)">Osteoblastic/cementoblastic and neural differentiation of dental stem cells and their applications to tissue engineering and regenerative medicine.</a> Tissue Engineering. Part B, Reviews. 18 (3), 235-244 (2012).</li>
<li>Ge, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distal+C+terminus+of+CaV1.2+channels+plays+a+crucial+role+in+the+neural+differentiation+of+dental+pulp+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Distal C terminus of CaV1.2 channels plays a crucial role in the neural differentiation of dental pulp stem cells.</a> PLoS One. 8 (11), e81332(2013).</li>
</ol>

Gli autori dichiarano di non avere conflitti di interesse finanziari o non finanziari.

Le cellule staminali hanno riposto le speranze di curare numerose malattie, grazie alla loro plasticità, robustezza, proprietà immunomodulatorie, meccanismi paracrini ed efficienza di homing. Il tessuto pulpare dentale è considerato la fonte più potente e preziosa di cellule staminali, con un'eminente plasticità e una capacità rigenerativa. Qui, dimostriamo l'isolamento delle DPSC, utilizzando il metodo di coltura dell'espianto, ampiamente adottato, in cui le cellule migrano da pezzi di tessuto pulpare o espianti per cre...

Le cellule staminali adulte si sono trasformate in un potente strumento terapeutico per trattamenti e terapie diretti alle cellule grazie alla loro plasticità, ai meccanismi paracrini e alle proprietà immunomodulatorie 1,2,3. I dati incoraggianti provenienti da studi preclinici basati su cellule staminali hanno ispirato i ricercatori a lavorare per la traduzione dal laboratorio al letto del paziente. Il tipo di cellule staminali utilizzate per la terapia con cellule staminali gioca un ruolo significativo nei risultati di successo. Negli studi preclinici e clinici, la fonte più ampiamente riportata di cellule staminali mesenchimali (MSC) rimane il midollo osseo 4,5. Tuttavia, i principali svantaggi dell'utilizzo di cellule staminali derivate dal midollo osseo (BMSC) includono la loro rara popolazione, le procedure altamente invasive per l'isolamento e la loro limitata capacità di espansione. Pertanto, si stanno esplorando fonti alternative di MSC. A questo proposito, i tessuti dentali, con la loro facilità di accessibilità, l'enorme plasticità, l'alto potenziale rigenerativo e l'elevata capacità proliferativa, sono stati ora considerati come una ricca e potenziale fonte alternativa di cellule staminali 6,7,8,9,10.
Le cellule staminali della polpa dentale (DPSC) sono state il primo tipo di cellule staminali dentali ad essere isolate e caratterizzate da Gronthos nel 200011. I DPSC hanno attirato l'attenzione per le applicazioni di ingegneria tissutale a causa del loro alto tasso di proliferazione, del significativo potenziale di differenziazione, della facilità di accessibilità con una coltura senza sforzo e, soprattutto, della loro capacità di essere ottenuti da un dente scartato senza alcuna preoccupazione etica12. Le limitazioni poste da altre fonti di cellule staminali, come le BMSC e le cellule staminali di derivazione adiposa (ADSC), nel loro isolamento e nelle inadeguate capacità di auto-rinnovamento sono aggirate dalle DPSC13. Le DPSC umane possono essere ottenute da denti primari umani, denti permanenti, denti del giudizio, denti decidui esfoliati (SHED) e papille apicali. Inoltre, le DPSC possono anche essere isolate dai denti soprannumerari, che vengono generalmente scartati14. Le DPSC esprimono marcatori associati alla cresta neurale e hanno il potenziale di differenziarsi in cellule neuronali sia in vitro che in vivo15. Oltre al loro potenziale neurogenico, le DPSC possono differenziarsi in altre linee cellulari, come osteogeniche, condrogeniche, adipogeniche, epatiche e miogeniche, quando vengono date specifiche condizioni di differenziazione13. Pertanto, queste cellule multipotenti hanno un grande potenziale per la terapia cellulare e possono essere impiegate per la rigenerazione di vari tessuti. Gli studi hanno anche riportato il potenziale ruolo delle DPSC nella ricostruzione della cornea16, nella riparazione dell'infarto del miocardio17 e il loro potenziale ruolo terapeutico in malattie come l'ischemia degli arti18, l'Alzheimer 19, il Parkinson 20 e l'invecchiamento21. Pertanto, le cellule staminali derivate dal tessuto dentale possono essere utilizzate non solo per la rigenerazione dentale, ma anche per la riparazione e la rigenerazione di organi non dentali come gli occhi16, i cuori17, i fegati22, le ossa23 ecc.
Esistono due metodi particolari per l'isolamento di una popolazione di MSC dal tessuto pulpare: la digestione enzimatica e la coltura di espianti24,25. L'insediamento di colture primarie senza alcuna differenza significativa nella quantità e nelle proprietà dei DPSC è stato riportato con entrambi questi metodi26. In questo studio, ci siamo concentrati sull'isolamento delle DPSC con il metodo di espiantazione27, poiché questo metodo genera DPSC senza contaminazione delle cellule ematopoietiche ed endoteliali, rispetto alla digestione enzimatica che può provocare la contaminazione dei fibroblasti28.

<table><tbody><tr><td>Piastra per colture cellulari a 6 pozzetti</td><td>Costar</td><td>3516</td><td>Per colture cellulari</td></tr><tr><td>Colorazione blu Alcian</td><td>Kit di colorazione dei condrociti EZstain, HiMedia</td><td>CCK029</td><td></td></tr><tr><td>Colorazione S rosso alizarina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>TMS-008</td><td>Colorazione osteogenica</td></tr><tr><td>Cocktail di antibiotici</td><td>Himedia</td><td>A002-5X50ML</td><td>Per prevenire la contaminazione della coltura</td></tr><tr><td>Acido ascorbico</td><td>Himedia</td><td>TC094-25G</td><td>Integratore di induzione condrogenica</td></tr><tr><td>B27</td><td>Gibco</td><td>17504044</td><td>Per induzione neurale</td></tr><tr><td>bFGF (fattore di crescita dei fibroblasti di base)</td><td>Gibco</td><td>PHG0024</td><td>Per induzione neurale</td></tr><tr><td>CD 105</td><td>BD-Pharmingen</td><td>560839</td><td></td></tr><tr><td>CD 35</td><td>Biolegend</td><td>343604</td><td></td></tr><tr><td>CD 45</td><td>Biolegend</td><td>304006</td><td></td></tr><tr><td>CD 73</td><td>Biolegend</td><td>344016</td><td></td></tr><tr><td>CD 90</td><td>Biolegend</td><td>328107</td><td>Caratterizzazione</td></tr><tr><td>cetil piridinio cloruro (CPC)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1104006</td><td>Per l'estrazione del rosso alizarina</td></tr><tr><td>Desametasone 21-fosfato disodico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D1159-100MG</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina tamponata con fosfato di Dulbecco</td><td>Himedia</td><td>TS1006-5L</td><td>Per il lavaggio</td></tr><tr><td>EGF (Epidermal Growth Factor)</td><td>Gibco</td><td>PHG0311</td><td>Per induzione epatica e neurale</td></tr><tr><td>EVOS Microscopio LED</td><td>Invitrogen</td><td></td><td>Per imaging a fluorescenza</td></tr><tr><td>EZ colorante Kit di colorazione dei condrociti</td><td>Himedia</td><td>CCK029-1KT</td><td>Kit di colorazione dei condrociti</td></tr><tr><td>FACS Canto citometro</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td> caratterizzazione</td></tr><tr><td>Siero fetale bovino</td><td>Gibco</td><td>16000044</td><td>Per colture primarie</td></tr><tr><td>Siero fetale bovino</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F2442</td><td>Per coltura cellulare</td></tr><tr><td>Integratore</td><td>G5 Gibco</td><td>17503012</td><td>Per induzione neurale</td></tr><tr><td>HGF (fattore di crescita degli epatociti)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H1404</td><td>Per induzione epatica</td></tr><tr><td>HLA-DR</td><td>Biolegend</td><td>307605</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; TGF umano-&beta; 3</td><td>Peprotech</td><td>#100-36E-10U</td><td></td></tr><tr><td>Premiscela di acido insulino-transferrina-selenoso</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I3146</td><td>Per induzione epatica</td></tr><tr><td>Premiscela ITS</td><td>Corning</td><td>354350</td><td></td></tr><tr><td>Kit di test di captazione LDL</td><td>Abcam</td><td>ab133127</td><td>Per caratterizzazione epatica</td></tr><tr><td>DMEM a basso contenuto di glucosio</td><td>Gibco</td><td>11885-084</td><td>Per induzione</td></tr> <tr><td>epaticaAnticorpo MAP2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M4403</td><td>Per la caratterizzazione neurale</td></tr><tr><td>Integratore</td><td>N2 Gibco</td><td>17502048</td><td>Per induzione neurale</td></tr><tr><td>Terreni basali neurali</td><td>Gibco</td><td>21103049 Per l'induzione</td><td>neurale</td></tr><tr><td>Anticorpo NFM</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>N4142</td><td>Per la caratterizzazione neurale</td></tr><tr><td>Nikon Elipse TS100 microscopio</td><td>Nikon</td><td></td><td>Per&nbsp; Olio per immagini a fluorescenza</td></tr><tr><td>Red O</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>01391-250Ml</td><td>Colorazione adipogenica</td></tr><tr><td>Oncostatin M R</td><td>& D Systems</td><td>295-OM-010/CF</td><td>Per induzione epatica</td></tr><tr><td>Petridish</td><td>Tarson</td><td>460090-90MM</td><td>Per il taglio dei tessuti</td></tr><tr><td>Fosfato di potassio monobasico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>15655-100G</td><td>Induzione osteogenica</td></tr><tr><td>Propan-2-olo</td><td>Thermo Fisher</td><td>Q13827</td><td>Per l'estrazione di olio Red O</td></tr><tr><td>Soluzione di piruvato di sodio</td><td>Sigma life sciences</td><td>S8636-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T4049</td><td>Per il passaggio cellulare</td></tr> Carta <tr><td>da filtro Whatman</td> carta da <td>filtro</td> <td>Merck</td><td>WHA1001325</td></tr>&<tr><td>alpha;- Terreni essenziali minimi (&alfa;-MEM)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M0643-10X 1L</td><td>Terreni per coltura primaria</td></tr><tr><td>&beta;-glicerofosfato sale disodico idrato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G9422-50G</td><td></td></tr></tbody></table>

coltura primaria di cellule staminali della polpa dentale

Primary Culture of Dental Pulp Stem Cells

La polpa dentale umana rappresenta un promettente serbatoio di cellule staminali multipotenti con una competenza rigenerativa preminente che può essere prelevata da un dente estratto. L'origine ecto-mesenchimale derivata dalla cresta neurale delle cellule staminali della polpa dentale (DPSC) conferisce un alto grado di plasticità che deve ai suoi molteplici benefici nella riparazione e rigenerazione dei tessuti. Ci sono vari modi pratici per raccogliere, mantenere e proliferare le cellule staminali adulte che vengono studiate per il loro uso nella medicina rigenerativa. In questo lavoro, dimostriamo la creazione di una coltura primaria di cellule staminali mesenchimali da tessuto dentale con il metodo della coltura di espianto. Le cellule isolate erano a forma di fuso e aderivano alla superficie plastica della piastra di coltura. La caratterizzazione fenotipica di queste cellule staminali ha mostrato un'espressione positiva dei marcatori di superficie cellulare raccomandati dalla società internazionale di terapia cellulare (ISCT) per le MSC, come CD90, CD73 e CD105. Inoltre, l'espressione trascurabile dei marcatori ematopoietici (CD45) ed endoteliali (CD34) e inferiore al 2% di espressione dei marcatori HLA-DR, hanno confermato l'omogeneità e la purezza delle colture DPSC. Abbiamo ulteriormente illustrato la loro multipotenza basata sulla differenziazione in linee adipogeniche, osteogeniche e condrogeniche. Abbiamo anche indotto queste cellule a differenziarsi in cellule simili a quelle epatiche e neuronali aggiungendo corrispondenti mezzi di stimolazione. Questo protocollo ottimizzato aiuterà nella coltivazione di una popolazione altamente espandibile di cellule staminali mesenchimali da utilizzare in laboratorio o per studi preclinici. Protocolli simili possono essere incorporati in configurazioni cliniche per la pratica di trattamenti basati su DPSC.

Qui, descriviamo come i ricercatori possono stabilire una coltura pura di DPSC tramite il metodo di espiantazione 6,7,8,9,10 e indurli verso più lignaggi per stabilire la purezza della coltura per le applicazioni a valle.
Abbiamo stabilito una coltura primaria di DPSC dal piccolo tessuto di polpa estratto dal terzo molare d...

Questo articolo fornisce una guida passo passo per stabilire una coltura primaria di cellule staminali di polpa dentale utilizzando il metodo della coltura di espiantazione e la caratterizzazione di queste cellule in base alle linee guida ICSCRT. Le cellule isolate da questo protocollo possono essere considerate come cellule staminali mesenchimali per ulteriori applicazioni.

Coltura primaria di cellule staminali della polpa dentale

The human dental pulp represents a promising multipotent stem cell reservoir with pre-eminent regenerative competence that can be harvested from an ...

Stiamo studiando il potenziale delle DPSC in applicazioni cell-based e cell-free per modelli di malattia, studiando al contempo i meccanismi cellulari e molecolari coinvolti nella rigenerazione tissutale. Inoltre, stiamo esplorando il ruolo dei fattori secretori derivati dalle cellule staminali nel controllo del destino delle cellule staminali e nella promozione della rigenerazione dei tessuti. Attualmente ci concentriamo sull'utilizzo di tecniche di coltura 3D per comprendere più a fondo i meccanismi molecolari e i cambiamenti genetici ed epigenetici associati alla rigenerazione dei tessuti.Stiamo incorporando tecniche avanzate come il sequenziamento di nuova generazione, il sequenziamento dell'RNA e il sequenziamento dei chip per svelare i domini regolatori che governano vari processi cellulari. Utilizzando metodi di espiantazione per isolare la DPSC, è possibile raccogliere in modo efficiente una popolazione omogenea di cellule staminali, libera da altre cellule come l'endotelio e i periciti. Questi tipi di cellule rimangono nella coltura cellulare quando le DPSC vengono stabilite utilizzando procedure enzimatiche.La nostra ricerca che utilizza le DPSC come modello cellulare per lo screening dei farmaci e la rigenerazione dei tessuti può sviluppare nuove terapie, medicina personalizzata avanzata e avere implicazioni di vasta portata nella medicina rigenerativa, tra cui la ricostruzione craniofacciale e la rigenerazione ossea in vivo dopo l'estrazione dentale. Attualmente stiamo studiando come le DPSC possano essere utilizzate per affrontare i difetti ossei, come i difetti delle ossa lunghe e del calce. Inoltre, stiamo esplorando le potenziali implicazioni terapeutiche delle molecole secretorie derivate dalle DPSC in vari modelli di malattia, tra cui la neurodegenerazione e il glaucoma.

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Il metodo descritto l'isolamento e la caratterizzazione di cellule staminali dentali umane Pulp (hDPSCs)...

Differenziazione Isolamento, caratterizzazione e comparata delle cellule umane Dental Pulp staminali derivate da denti permanenti mediante due diversi metodi

Forniamo i protocolli per la valutazione delle cellule staminali mesenchimali isolate da polpa dentale e interazioni delle cellule di carcinoma della prostata basati su metodi diretti e indiretti di co-coltura. Mezzo di condizione e trans-pozzo membrane sono adatte per analizzare attività paracrina indiretta. Seeding differenzialmente macchiato le cellule insieme è un modello appropriato per interazione diretto cellula-cellula.

Isolamento di cellule staminali mesenchimali da tessuto della polpa e co-coltura con cellule tumorali per studiare le loro interazioni

Qui presentiamo un protocollo per isolamento umano Dental Pulp Stem Cells e propagazione al fine di valutare l'espressione della proteina del prion durante il processo di differenziamento neuronale.

Isolamento, propagazione e l'espressione della proteina del Prion durante il differenziamento di cellule staminali polpa dentaria umana

Questo protocollo enfatizza l'estrazione, la coltura e la conservazione di cellule staminali multipotenti dalla polpa dentale attraverso la digestione enzimatica. Inoltre, dimostra il loro potenziale di differenziarsi in osteoblasti, adipociti e condrociti, evidenziando l'importanza della precisione e della coerenza nel processo.

Isolamento, coltura e caratterizzazione di cellule staminali della polpa dentale da denti decidui e permanenti umani

Questo protocollo dimostra come mantenere sani, indifferenziate staminali embrionali umane (ES) cellule.

Cultura e manutenzione di cellule staminali embrionali umane

Epatociti primari costituirà un valido strumento per valutare le funzioni biochimiche, molecolari e metaboliche in un sistema fisiologicamente rilevante sperimentale. Noi descriviamo un protocollo affidabile per la perfusione di fegato di ratto in situ, che genera costantemente epatociti vitali fino to1.0 ×...

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Un metodo semplice è descritto per l'induzione della transizione epitelio mesenchimale (EMT) in una varietà di tipi cellulari. Metodi per l'analisi di cellule in EMT stati di immunocitochimica sono inclusi.

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In questa pubblicazione, si descrive una procedura rapida e conveniente per l'isolamento e la coltura primaria cellule pancreatiche acinose del pancreas murino. Questo metodo costituisce un valido approccio per studiare la fisiologia delle cellule esocrine del pancreas freschi primarie normali / non trasformata.

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Qui ci dettaglio un metodo per cultura germi denti in fette mandibola con un chopper tessuto. Questo metodo consente l'accesso esclusivo al dente durante lo sviluppo, fornendo un'ottima opportunità per la manipolazione e lignaggio tracing, non disponibile utilizzando metodi di coltura più tradizionali.

Il Metodo Culture Slice per seguire lo sviluppo dei germi dente Espianto Cultura

L'isolamento e la coltura di una popolazione pura di cellule satelliti quiescenti, una popolazione di cellule staminali muscolari, è essenziale per la comprensione del muscolo biologia delle cellule staminali e rigenerazione, nonché trapianto di cellule staminali per terapie in distrofia muscolare e altre malattie degenerative.

Isolamento, Cultura e trapianto di cellule muscolari satellite

Impara il metodo di coltura primaria di cellule staminali della polpa dentale tramite tecnica explant per studiare rigenerazione tissutale e sviluppare terapie innovative per difetti ossei.

Coltura primaria di cellule staminali della polpa dentale

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