Rilevazione quantitativa dei legami incrociati DNA-proteina e delle loro modificazioni post-traduzionali

Il presente protocollo evidenzia un metodo modificato per rilevare e quantificare i legami incrociati DNA-proteina (DPC) e le loro modificazioni post-traduzionali (PTM), tra cui l'ubiquitilazione, la SUMOilazione e l'ADP-ribosilazione indotte da inibitori della topoisomerasi e dalla formaldeide, consentendo così lo studio della formazione e della riparazione delle DPC e dei loro PTM.

Bene, la mia ricerca si concentra sulla riparazione dei danni al DNA. In particolare, la riparazione del danno al DNA indotto dagli inibitori della topoisomerasi, dagli inibitori di PARP e dalle aldeidi. Sto cercando di illustrare i meccanismi molecolari attraverso i quali le cellule riparano i legami incrociati delle proteine del DNA indotti da questi farmaci.

I recenti progressi nella riparazione dei legami incrociati delle proteine del DNA includono l'identificazione di nuove vie di riparazione per i legami incrociati delle proteine del DNA e i meccanismi di modifica post-trapianto che regolano queste vie di riparazione. Il test del complesso enzimatico in vivo e il saggio di recupero degli addotti del DNA sono i metodi più utilizzati per misurare i legami incrociati delle proteine del DNA e alcuni legami incrociati delle proteine del DNA, come i legami incrociati della proteina topoisomerasi e del DNA, possono essere rilevati mediante immunofluorescenza utilizzando un anticorpo specifico. Una delle maggiori sfide è lo studio del ruolo delle modificazioni post-traduzionali nella riparazione dei legami incrociati delle proteine del DNA.

È stato molto difficile arricchire e rilevare i legami incrociati delle proteine del DNA coniugate con modificatori post-traduzionali a causa della loro abbondanza molto bassa. Questo protocollo fornisce dettagli sulla rilevazione di una quantificazione dei legami incrociati delle proteine del DNA deubiquitilato, SUMOilato e ADP-ribosilato, consentendo ai ricercatori di studiare la cinetica e la formazione di queste modificazioni nella riparazione dei legami incrociati delle proteine del DNA da diverse fonti. Altri protocolli per la rilevazione dei legami incrociati delle proteine del DNA non contengono passaggi che descrivano il rilevamento delle loro modificazioni post-traduzionali.

Mentre questo protocollo fornisce dettagli come le concentrazioni di farmaci e le durate di tempo per indurre le modifiche e i metodi per separare e rilevare le modifiche, nonché i metodi per stabilizzare le modifiche. Quindi sono state identificate diverse modificazioni post-trapianto nella riparazione dei legami incrociati delle proteine del DNA. Il modo in cui coordinano la riparazione rimane in gran parte sconosciuto.

Di conseguenza, l'interazione tra queste modifiche merita ulteriori indagini.