Name: Microscopia ad espansione ultrastrutturale in tre fasi del ciclo di vita in vitro di Trypanosoma cruzi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-05-12T14:50:00.000+00:00
Duration: 9 min 45 s
Description: Scopri la microscopia ad espansione ultrastrutturale per studiare Trypanosoma cruzi nelle tre fasi del ciclo di vita in vitro. Questo metodo consente ricostruzioni tridimensionali ad alta risoluzione delle strutture cellulari nanometriche.

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<meta charset="utf8"></head><body>Microscopia ad espansione ultrastrutturale nel ciclo di vita in vitro di Trypanosoma cruzi

<ol><li>Chen, F., Tillberg, P. W., Boyden, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expansion+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Expansion microscopy.</a> Science. 347 (6221), 543-548 (2015).</li>
<li>Chozinski, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expansion+microscopy+with+conventional+antibodies+and+fluorescent+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Expansion microscopy with conventional antibodies and fluorescent proteins.</a> Nature Methods. 13 (6), 485-488 (2016).</li>
<li>Ku, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplexed+and+scalable+super-resolution+imaging+of+three-dimensional+protein+localization+in+size-adjustable+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Multiplexed and scalable super-resolution imaging of three-dimensional protein localization in size-adjustable tissues.</a> Nature Biotechnology. 34 (9), 973-981 (2016).</li>
<li>Gambarotto, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+cellular+ultrastructures+using+expansion+microscopy+%28U-ExM%29%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Imaging cellular ultrastructures using expansion microscopy (U-ExM).</a> Nature Methods. 16 (1), 71-74 (2018).</li>
<li>Tillberg, P. W., Chen, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expansion+microscopy%3A+Scalable+and+convenient+super-resolution+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Cell+and+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Expansion microscopy: Scalable and convenient super-resolution microscopy.</a> Annual Review of Cell and Developmental Biology. 35, 683-701 (2019).</li>
<li>Jurriens, D., van Batenburg, V., Katrukha, E. A., Kapitein, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mapping+the+neuronal+cytoskeleton+using+expansion+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Mapping the neuronal cytoskeleton using expansion microscopy.</a> Methods in Cell Biology. 161, 105-124 (2021).</li>
<li>Alonso, V. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrastructure+expansion+microscopy+%28U-ExM%29+in+Trypanosoma+cruzi%3A+localization+of+tubulin+isoforms+and+isotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Parasitology+Research%22%5BJournal%5D)">Ultrastructure expansion microscopy (U-ExM) in Trypanosoma cruzi: localization of tubulin isoforms and isotypes.</a> Parasitology Research. 121 (10), 3019-3024 (2022).</li>
<li>Kalichava, A., Ochsenreiter, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrastructure+expansion+microscopy+in+Trypanosoma+brucei%5BTitle%5D)+AND+%22Open+Biology%22%5BJournal%5D)">Ultrastructure expansion microscopy in Trypanosoma brucei.</a> Open Biology. 11 (10), 210132(2021).</li>
<li>Amodeo, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+novel+mitochondrial+genome+segregation+factor+TAP110+in+Trypanosoma+brucei%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Science%22%5BJournal%5D)">Characterization of the novel mitochondrial genome segregation factor TAP110 in Trypanosoma brucei.</a> Journal of Cell Science. 134 (5), (2021).</li>
<li>Liffner, B., Absalon, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expansion+microscopy+reveals+plasmodium+falciparum+blood-stage+parasites+undergo+anaphase+with+a+chromatin+bridge+in+the+absence+of+mini-chromosome+maintenance+complex+binding+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Microorganisms%22%5BJournal%5D)">Expansion microscopy reveals plasmodium falciparum blood-stage parasites undergo anaphase with a chromatin bridge in the absence of mini-chromosome maintenance complex binding protein.</a> Microorganisms. 9 (11), 2306(2021).</li>
<li>Dos Santos Pacheco, N., Soldati-Favre, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coupling+auxin-inducible+degron+system+with+ultrastructure+expansion+microscopy+to+accelerate+the+discovery+of+gene+function+in+Toxoplasma+gondii%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Coupling auxin-inducible degron system with ultrastructure expansion microscopy to accelerate the discovery of gene function in Toxoplasma gondii.</a> Methods in Molecular Biology. 2369, 121-137 (2021).</li>
<li>Lidani, K. C. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chagas+disease%3A+From+discovery+to+a+worldwide+health+problem%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Public+Health%22%5BJournal%5D)">Chagas disease: From discovery to a worldwide health problem.</a> Frontiers in Public Health. 7, 166(2019).</li>
<li>Carrea, A., Diambra, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systems+biology+approach+to+model+the+life+cycle+of+Trypanosoma+cruzi%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Systems biology approach to model the life cycle of Trypanosoma cruzi.</a> PloS One. 11 (1), e0146947(2016).</li>
<li>Vidal, J. C., De Souza, W. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aVidal%2C+JC+%22Morphological+and+Functional+Aspects+of+Cytoskeleton+of+Trypanosomatids.+Cytoskeleton+-+Structure%2C+Dynamics%2C+Function+and+Disease%22">Morphological and Functional Aspects of Cytoskeleton of Trypanosomatids. Cytoskeleton - Structure, Dynamics, Function and Disease</a>. , InTech. (2017).</li>
<li>Kunz, T. C., Götz, R., Gao, S., Sauer, M., Kozjak-Pavlovic, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+expansion+microscopy+to+visualize+and+characterize+the+morphology+of+mitochondrial+cristae%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cell+and+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Using expansion microscopy to visualize and characterize the morphology of mitochondrial cristae.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 8, 617(2020).</li>
<li>Laporte, M. H., Klena, N., Hamel, V., Guichard, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+the+native+cellular+organization+by+coupling+cryofixation+with+expansion+microscopy+%28Cryo-ExM%29%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Visualizing the native cellular organization by coupling cryofixation with expansion microscopy (Cryo-ExM).</a> Nature Methods. 19 (2), 216-222 (2022).</li>
<li>Sahabandu, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expansion+microscopy+for+the+analysis+of+centrioles+and+cilia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Microscopy%22%5BJournal%5D)">Expansion microscopy for the analysis of centrioles and cilia.</a> Journal of Microscopy. 276 (3), 145-159 (2019).</li>
<li>Wen, G., Leen, V., Rohand, T., Sauer, M., Hofkens, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+progress+in+expansion+microscopy%3A+chemical+strategies+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Reviews%22%5BJournal%5D)">Current progress in expansion microscopy: chemical strategies and applications.</a> Chemical Reviews. 123 (6), 3299-3323 (2023).</li>
<li>Trinks, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subdiffraction-resolution+fluorescence+imaging+of+immunological+synapse+formation+between+NK+cells+and+A.+fumigatus+by+expansion+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Communications+Biology%22%5BJournal%5D)">Subdiffraction-resolution fluorescence imaging of immunological synapse formation between NK cells and A. fumigatus by expansion microscopy.</a> Communications Biology. 4 (1), 1151(2021).</li>
<li>White, B. M., Kumar, P., Conwell, A. N., Wu, K., Baskin, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+expansion+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Lipid expansion microscopy.</a> Journal of the American Chemical Society. 144 (40), 18212-18217 (2022).</li>
<li>Steib, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TissUExM+enables+quantitative+ultrastructural+analysis+in+whole+vertebrate+embryos+by+expansion+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports+Methods%22%5BJournal%5D)">TissUExM enables quantitative ultrastructural analysis in whole vertebrate embryos by expansion microscopy.</a> Cell Reports Methods. 2 (10), 100311(2022).</li>
<li>Shaib, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+proteins+by+expansion+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Visualizing proteins by expansion microscopy.</a> bioRxiv. , (2023).</li>
<li>M'Saad, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((All-optical+visualization+of+specific+molecules+in+the+ultrastructural+context+of+brain+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">All-optical visualization of specific molecules in the ultrastructural context of brain tissue.</a> bioRxiv. , (2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Filtri per siringhe sterili da 0,22 micrometri PES</td><td>Soluzioni a membrana</td><td>SFPES030022S</td><td></td></tr><tr><td>becher da 1 L</td><td>Schott Duran</td><td>10005227</td><td></td></tr><tr><td>1,5 mL SPINWIN Micro Centrifuga Tube</td><td>Tarson</td><td>T38-500010</td><td></td></tr><tr><td>10 mL sterile monouso serynge</td><td>NP</td><td>66-32</td><td></td></tr><tr><td>10 mL pipetta sierologica sterile</td><td>Jet Biofil</td><td>GSP211010</td><td></td></tr><tr><td>Vetrini coprioggetti da 12 mm</td><td>Merienfeld GmbH</td><td>01 115 20</td><td>Vetrini coprioggetti rotondi Piastre</td></tr> a <tr><td>12 pozzetti</td><td>Jet Biofil</td><td>TCP011012</td><td></td></tr><tr><td>Vetrini coprioggetti da 22 mm</td><td>Corning</td><td>2845-22</td><td>Vetrini coprioggetti quadrati</td></tr><tr><td>Piastre a 24 pozzetti</td><td>Jet Biofil</td><td>TCP-011-024</td><td></td></tr><tr><td>Bicchiere da 250 mL</td><td>Schott Duran</td><td>C108.1</td><td></td></tr><tr><td>3 mL Pasteur pipetta</td><td>Deltalab</td><td>200037</td><td></td></tr><tr><td>piastre con fondo in vetro da 35 mm</td><td>Matsunami glass ind</td><td>D11130H</td><td></td></tr><tr><td>4&prime;,6-Diamidine-2&prime;-fenilindolo dicloridrato</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D9542</td><td>DAPI</td></tr><tr><td>pipetta sierologica da 5 ml sterile</td><td>Jet Biofil</td><td>GSP010005</td><td></td></tr><tr><td>piastre a 6 pozzetti</td><td>Sarstedt</td><td>83.3920</td><td></td></tr><tr><td>Acrilammide</td><td>BioRad</td><td>1610101</td><td></td></tr><tr><td>Ammonio persolfato</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A3678-25G</td><td>APS</td></tr><tr><td>ATTO 647 NHS estere</td><td>BOC Sciences</td><td>F10-0107</td><td>Per l'etichettatura pan-proteoma</td></tr><tr><td>Biosafty Cabinet</td><td>Telstar</td><td>Bio II A/P</td><td></td></tr><tr><td>Bovino Sodio Albumina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A7906</td><td></td></tr><tr><td>BSA CO2 Incubatore</td><td>Sanyo</td><td>MCO-15A</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio confocale</td><td>Zeiss</td><td>LSM 880</td><td></td></tr><tr><td>Tarsoni</td><td></td><td>petridici monouso</td><td>460095 90 mm di diametro</td></tr><tr><td>DMEM, Thermo</td><td>Fisher Cientific Cientific</td><td>12100046</td><td>Polvere</td></tr><tr><td>Calibro digitale elettronico</td><td>Radar</td><td>RADAR-SLIDE-CALIPER</td><td></td></tr><tr><td>Etanolo Assoluto</td><td>Supelco</td><td>1,00,98,31,000</td><td></td></tr><tr><td>Siero fetale di vitello</td><td>Internegocios SA</td><td>FCS FRA 500</td><td></td></tr><tr><td>Pacchetto di elaborazione delle immagini Fiji</td> sterile e inattivato a caldo <td>ImageJ</td><td></td><td>doi:10.1038/nmeth.2019</td></tr><tr><td>Formaldeide 37%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>F8775</td><td>FA</td></tr><tr><td>Vetro Petridish</td><td>Marienfeld Superior</td><td>PM-3400300</td><td>60 mm diametro</td></tr><tr><td>Glucosa D(+)</td><td>Cicarelli</td><td></td><td></td>716214</tr><tr><td>Glutaraldeide 70%</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>G7776</td><td></td></tr><tr><td>Capra anti-Topo IgG Anticorpo secondario Alexa Fluor 555</td><td>Invitrogen</td><td>A-21422</td><td></td></tr><tr><td>Capra anti-coniglio IgG Anticorpo secondario FICT</td><td>Jackson Immunoresearch</td><td>115-095-003</td><td></td></tr><tr><td>Cilindro graduato</td><td>Nalgene</td><td>3663-1000</td><td></td></tr><tr><td>Pallone</td> <td>di vetro graduatoGlassco</td><td>GL-274.202.01</td> Blocco riscaldante <td>da 100 mL</td></tr><tr><td></td><td>IBR</td><td></td><td>Prodotto in casa</td></tr><tr><td>Hemin</td><td>Frontier Scientific</td><td>H651-9</td><td></td></tr><tr><td>Acido cloridrico 36,8-38,0%</td><td>Ciccarelli</td><td>918110</td><td></td></tr><tr><td>Secchiello per il ghiaccio</td><td>Corning</td><td>1167U68</td><td></td></tr><tr><td>Incubatore</td><td>Tecno Dalvo</td><td>TOC130</td><td></td></tr><tr><td>Infuso di fegato</td><td>Difco</td><td>226920</td><td></td></tr><tr><td>Agitatore magnetico e riscaldatore</td><td>Compagno di laboratorio</td><td>HP-3000</td><td></td></tr><tr><td>Spatola in metallo</td><td>SALTTECH</td><td>200MM</td><td></td></tr><tr><td>Pinzette in metallo</td><td>Marienfeld Superior</td><td>PM-6633002</td><td></td></tr><tr><td>Assoluta di metanolo</td><td>Cicarelli</td><td>897110</td><td></td></tr><tr><td>Provetta per microcentrifuga 1,5 mL</td><td>Tarson</td><td>500010-N</td><td></td></tr><tr><td>Carta per microscopia KimWipes</td><td>Kimtech Science</td><td>B0013HT2QW</td><td></td></tr><tr><td>Milli-Q sistema d'acqua</td><td>Merk Millipore</td><td>IQ-7003</td><td></td></tr><tr><td>topo anti-alfa tubulina clone DM1A</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T9026</td><td></td></tr><tr><td>topo anti-PFR</td><td>Anticorpi</td><td></td> purificati <td>Donato dal Dr. Ariel Silber (USP)</td></tr><tr><td>N,N&acute;-metilenbisacrilamide</td><td>ICN</td><td>193997</td><td>bis</td></tr><tr><td>Na2HPO4</td><td>Cicarelli</td><td>834214</td><td></td></tr><tr><td>Neubauer camera</td><td>Boeco</td><td>BOE 01</td><td></td></tr><tr><td>p1000 pipetta</td><td>Gilson</td><td>PIPETMAN P1000</td><td></td></tr><tr><td>p1000 puntali per pipette</td><td>Tarson</td><td>TAR-521020B</td><td></td></tr><tr><td>p20 pipetta</td><td>Gilson</td><td>PIPETMAN P20</td><td></td></tr><tr><td>p20 puntali per pipette</td><td>Tarson</td><td>TAR-527108</td><td></td></tr><tr><td>p200 pipetta</td><td>Gilson</td><td>PIPETMAN P200</td><td></td></tr><tr><td>p200 puntali per pipette</td><td>Tarson</td><td>TAR-521010Y</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldeide</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P6148</td><td>PFA</td></tr><tr><td>pH / ORP / &deg; C metro</td><td>HANNA Instruments</td><td>HI 2211</td><td></td></tr><tr><td>Poli-D-lisina 0,1%</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>P8920</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro di potassio</td><td>Cicarelli</td><td>867212</td><td>KCl</td></tr><tr><td>Lama di rasoio</td><td>Printex</td><td>BS 2982:1992</td><td></td></tr><tr><td>Sigillatura FIlm "Parafilm M"</td><td>Bemis</td><td>PM996</td><td></td></tr><tr><td>Acrilato di sodio</td><td>Sigma Aldrich</td><td>408220-25G</td><td></td></tr><tr><td>SA Bicarbonato di sodio</td><td>Cicarelli</td><td>929211</td><td>NaHCO3</td></tr><tr><td>Cloruro di sodio</td><td>Cicarelli</td><td>750214</td><td>NaCl</td></tr><tr><td>Sodio Dodecil solfato</td><td>BioRad</td><td>1610302</td><td>SDS</td></tr><tr><td>Idrossido di sodio</td><td>Merk</td><td>1-06498</td><td>NaOH</td></tr><tr><td>Sorvall ST 16 Centrifuga</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>75004380</td><td></td></tr><tr><td>Palloni T-25</td><td>Corning</td><td>430639</td><td></td></tr><tr><td>TEMED</td><td>Invitrogen</td><td>15524-010</td><td></td></tr><tr><td>Carta velina</td><td>Elite</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Triptose</td><td>Merck</td><td>1106760500</td><td></td></tr><tr><td>Tris</td><td>BioRad</td><td>1610719</td><td></td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Biopack</td><td>2003-07</td><td>Polisorbato 20</td></tr><tr><td>Pompa</td> <td>a vuotoSilfab</td><td>N33-A</td><td></td></tr><tr><td>Vero cells</td><td>ATCC</td><td>CRL-1587</td><td></td></tr><tr><td>Vortex MIxer</td><td>Dragon Lab</td><td>MX-S</td><td></td></tr></tbody></table>

microscopia ad espansione ultrastrutturale in tre fasi del ciclo di vita in vitro di trypanosoma cruzi

Ultrastructural Expansion Microscopy in Three In Vitro Life Cycle Stages of Trypanosoma cruzi

Se il protocollo è stato eseguito correttamente (Figura 1), i campioni saranno visibili come un gel planare e traslucido che può essere espanso fino a un fattore di 4-4,5x in acqua (Figura 3A). Questa espansione ha fornito una risoluzione effettiva di circa 70 nm, che può variare a seconda del fattore di espansione finale e del sistema di imaging impiegato. Dopo il secondo processo di espansione e l'acquisizione dell'immagine in un microscopio confocale, siamo s...

Microscopia ad espansione ultrastrutturale in tre fasi del ciclo di vita in vitro di Trypanosoma cruzi

We describe here the application of ultrastructure expansion microscopy (U-ExM) in Trypanosoma cruzi, a technique that allows increasing the spatial ...

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