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Metodi per l'elettroporazione e la conferma della trasformazione in Limosilactobacillus reute...
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JoVE Journal Bioengineering
Methods for Electroporation and Transformation Confirmation in Limosilactobacillus reuteri DSM20016

Metodi per l'elettroporazione e la conferma della trasformazione in Limosilactobacillus reuteri DSM20016

Full Text
4,958 Views
11:04 min
June 23, 2023

DOI: 10.3791/65463-v

Alexander Duggan1, David McMillen1

1University of Toronto Mississauga

AI Banner

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Qui, presentiamo i protocolli per lavorare con Limosilactobacillus reuteri DSM20016, dettagliando la crescita, la trasformazione plasmidica, la PCR delle colonie, la misurazione della proteina reporter fluorescente e la mini-preparazione limitata del plasmide, nonché problemi comuni e risoluzione dei problemi. Questi protocolli consentono la misurazione delle proteine reporter in DSM20016, o la conferma tramite colony PCR se nessun reporter è coinvolto.

L.Reuteri, e in particolare il ceppo, DSM20016 è un commensale intestinale umano robusto e naturale, con grandi promesse per la consegna terapeutica e il rilevamento di malattie in tutto il tratto gastrointestinale. Questo lavoro aiuterà a posizionare DSM20016 come un telaio di biologia sintetica per questo tipo di applicazioni. I lactobacillales non hanno un organismo modello specifico.

Le specie preferite esistono, ma di solito sono scelte con un pregiudizio verso particolari obiettivi di ricerca. La variazione all'interno della famiglia batterica ha portato a protocolli frammentati, alcuni con iterazioni di modifiche che risalgono attraverso le pubblicazioni. È molto difficile per le persone che iniziano a filtrare esattamente ciò che è utile e ciò che non lo è.

Un documento per la trasformazione di DSM20016 esiste, ma non è moderno. Esistono protocolli moderni per altri membri della famiglia Lactobacillales, ma non sono DSM20016. Qui ci sforziamo di fornire un set di protocolli facile da usare, centralizzato, modernizzato e completo per DSM20016 elettroporazione.

Questo set di protocolli offre una modernizzazione sostanziale rispetto al precedente protocollo di esplorazione DSM20016 e chiarisce alcuni fili sospesi, oltre a sottolineare parti che in precedenza erano meno chiare. Anche il set di protocolli è completo, e specificamente per DSM20016, un ceppo per il quale altri protocolli non DSM20016 non sono totalmente compatibili. Uno dei nostri obiettivi principali è l'utilizzo di microbi come sensori e sistemi di consegna economici.

Stiamo lavorando con esperti di malattie intestinali per utilizzare DSM20016 per rilevare le condizioni nel tratto gastrointestinale e fornire terapie come richiesto.

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Bioingegneria Numero 196

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