Approccio semplificato di imaging intravitale per il monitoraggio a lungo termine della dinamica del tessuto epiteliale su un microscopio confocale invertito
June 30th, 2023
Il protocollo presenta un nuovo strumento per semplificare l'imaging intravitale utilizzando la microscopia confocale invertita.
Abbiamo sviluppato uno strumento per eseguire l'imaging intravitale su topi vivi utilizzando un microscopio confocale invertito. Questo ci permette di monitorare le dinamiche delle cellule della pelle durante l'omeostasi e di confrontare i comportamenti delle cellule durante l'insorgenza e la progressione della malattia. La microscopia multifotone è l'approccio principale applicato per ottenere il tracciamento intravitale delle cellule.
Tuttavia, gli svantaggi di questi microscopi includono la limitata versatilità di imaging quotidiano, il costo elevato e la complessità tecnica. Il nostro nuovo strumento consente l'uso di versatili microscopi confocali invertiti per l'imaging intravitale in vivo. Modificando il file di progettazione, le dimensioni dell'inserto del tavolino possono essere personalizzate per adattarsi a qualsiasi marca di microscopio invertito.
Il foro dell'obiettivo può essere ridimensionato e riposizionato per adattarsi a qualsiasi modello animale e tessuto a scelta.
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Panoramica
Questo studio introduce uno strumento innovativo per eseguire l'imaging intravitale utilizzando la microscopia confocale invertita in topi vivi, consentendo ai ricercatori di tracciare la dinamica delle cellule della pelle durante l'omeostasi e la progressione della malattia. Il nuovo strumento affronta i limiti della microscopia multi-fotonica, rendendo l'imaging intravitale più accessibile e versatile.
Componenti principali dello studio
Area di ricerca
- Imaging intravitale
- Dinamiche delle cellule della pelle
- Tecniche di microscopia
Sfondo
- Gli attuali limiti della microscopia multi-fotonica includono costi elevati e complessità tecnica.
- I microscopi confocali invertiti offrono opzioni di imaging versatili per tessuti vivi.
- Il design personalizzato consente l'adattabilità a diversi modelli animali.
Metodi utilizzati
- Microscopia confocale invertita con inserti personalizzati stampati in 3D
- Topi vivi come sistema biologico
- Configurazione di imaging personalizzabile per vari tessuti
Principali risultati
- Acquisizione di successo di Z-stack di tessuto auricolare marcato fluorescentemente con minima deriva.
- Imaging continuo delle cellule della pelle (positive per mCherry e GFP) per periodi di tempo prolungati.
- Validazione dell'efficacia degli inserti per l'imaging intravitale stampati in 3D per un imaging stabile.
Conclusioni
- Questo studio dimostra un approccio innovativo per migliorare le capacità di imaging intravitale.
- Lo strumento migliora la capacità di studiare le dinamiche cellulari in modelli viventi, facendo progredire la ricerca in biologia cellulare.
