Name: Creazione di un modello murino di fistola oronasale (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-09-08T14:25:00.000+00:00
Duration: 3 min 51 s
Description: Impara a creare un modello murino di fistola oronasale con cauterio oftalmico riscaldato. Questo protocollo riduce significativamente il sanguinamento chirurgico e il rischio di soffocamento nei topi.

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Questo lavoro è stato supportato dal programma di ricerca e sviluppo, dall'ospedale di stomatologia della Cina occidentale, dall'Università del Sichuan (RD-02-202107), dal programma di supporto alla scienza e alla tecnologia della provincia del Sichuan (2022NSFSC0743) e dalla sovvenzione della Fondazione scientifica post-dottorato del Sichuan (TB2022005) a H. Huang.

Tutte le procedure sugli animali in questo studio sono state esaminate e approvate dal Comitato Etico della Scuola di Stomatologia della Cina Occidentale, Università del Sichuan. Per il presente studio sono stati utilizzati topi adulti C57BL/6 (femmine).
1. Preparazione chirurgica
<ol><li>Raccogli gli strumenti chirurgici necessari per la procedura: germinatore, cauterizzazione oftalmologica, forbici microchirurgiche, pinzette microchirurgiche, siringhe e aghi (26 g x 0,63 pollici) (Figura 1A,B) (vedi Tabella dei materiali). NOTA: Prima della procedura chirurgica, sterilizzare in autoclave gli strumenti chirurgici, inclusi il cauterizzatore oftalmologico, le pinzette microchirurgiche e le forbici microchirurgiche, a 102,9 kPa (1,05 kg/cm2) e 121 °C per 20 minuti.</li>
	<li>Raccogliere le forniture chirurgiche necessarie: teli chirurgici, guanti in lattice, cotone sterile, fogli sterili, fogli di metallo sterili, pannelli di schiuma come piattaforma chirurgica, elastici (che possono essere ottenuti strappando un guanto in lattice medico) e nastro adesivo (Figura 1C) (vedere Tabella dei materiali). NOTA: Utilizzare un set separato di materiali di consumo per ciascun topo, comprese siringhe e fogli sterili per il campo chirurgico.</li>
	<li>Pulire l'area chirurgica e l'apparecchio (sorgente luminosa, pannello in schiuma e dispositivo di mantenimento della temperatura, vedere la tabella dei materiali) utilizzando salviette imbevute di alcol. Coprire le manopole e le maniglie degli strumenti che potrebbero essere necessari durante la procedura con un foglio di metallo sterile.</li>
	<li>Aprire in modo asettico i singoli strumenti e posizionarli con cura nell'area chirurgica. Attivare il germinatore (vedi Tabella dei materiali) e le luci per l'uso durante la procedura. Mettere il cauterizzazione oftalmologica nel germinatore e riscaldarlo a 250 °C per 20 min.</li>
</ol>2. Procedura chirurgica
<ol><li>Eseguire la fissazione del mouse e aprire la cavità orale seguendo i passaggi seguenti.<ol><li>Selezionare una femmina di topo C57BL/6J del peso di 20-25 g e di 8-12 settimane. Tenere a casa il topo per 7 giorni prima di eseguire qualsiasi procedura.</li>
		<li>Anestetizzare il topo mediante iniezione intraperitoneale di Zoletil50 (80 mg/kg) e xilazina (5 mg/kg) (vedere Tabella dei materiali). Applicare un unguento oftalmico per gli occhi sull'occhio del topo. Attendi fino a quando non c'è una risposta di pizzicamento delle dita dei piedi. NOTA: Il mouse è pronto per la procedura quando non è in grado di capovolgersi autonomamente.</li>
		<li>Fissare il mouse a un pannello di schiuma rivestito con fogli sterili. Utilizzare del nastro adesivo per legare il mouse alla piattaforma chirurgica in posizione supina (Figura 2A).</li>
		<li>Aprire la cavità orale del topo. Posizionare due aghi (26 g x 0,63 pollici) davanti al piano orbitale dell'orecchio e altri due dietro di esso. Metti un elastico intorno agli aghi e incrocia gli incisivi per tenere la bocca aperta. Utilizzare una pinzetta microchirurgica per aprire gli angoli della bocca (Figura 2B). NOTA: Assicurarsi che il palato duro sia chiaramente esposto. Fissare la linguetta sotto l'elastico per evitare l'ostruzione del campo visivo e il bruciore durante gli esperimenti successivi.</li>
	</ol></li>
	<li>Creare la fistola oronasale (ONF) sul palato duro (Figura 3A-F).<ol><li>Recuperare il cauterizzazione oftalmologica, che è stato riscaldato a 250 °C per 20 min. Posizionare la punta del cauterismo a 1 mm di distanza dall'intersezione tra la linea mediana del palato e la linea del primo premolare, creando una lesione della mucosa a tutto spessore al palato duro nella linea mediana. NOTA: Evitare di scottare la lingua del mouse.</li>
		<li>Dopo alcuni secondi, rimuovere il cauterismo oftalmologico quando la mucosa intorno alla punta del cauterio diventa bianca.</li>
		<li>Posizionare il cauterizzazione oftalmologica nel germinatore e continuare a riscaldarlo a 250 °C per 10 min. Ripetere il passaggio precedente per allargare la ferita lungo i bordi fino a raggiungere una lunghezza di 2,0 mm e una larghezza di 1,5 mm. NOTA: Ogni estensione deve seguire il bordo dell'ultima lesione. Usa un calibro a corsoio per misurare la lunghezza e la larghezza della lesione. La lesione dovrebbe coprire il 10% del palato.</li>
		<li>Utilizzare forbici microchirurgiche per rimuovere i tessuti molli denaturati in eccesso intorno alla ferita. Utilizzare cotone sterile per fermare l'emorragia e prevenire l'asfissia per inalazione del topo. Misurare la ferita per assicurarsi che formi una lesione della mucosa del palato duro a tutto spessore che misura 2,0 x 1,5 mm nella linea mediana.</li>
	</ol></li>
</ol>3. Cure post-operatorie
<ol><li>Somministrare Meloxicam al topo al momento del risveglio postoperatorio, alla dose di 5 mg/kg/die per 3 giorni, per via sottocutanea29.</li>
	<li>Posizionare il mouse su un dispositivo di mantenimento della temperatura fino a quando non riprende completamente conoscenza. NOTA: Assicurarsi che il mouse sia posizionato in modo da facilitare la respirazione. Ruotare i topi ogni 10-15 minuti per prevenire il ristagno di sangue o il collasso dei lobi polmonari. Una volta che il topo si è riscaldato, rimettilo nella sua gabbia. Fornire gelatina sterile e mangime irradiato sul fondo della gabbia per i topi.</li>
</ol>4. Verifica della creazione della fistola oronasale
NOTA: Il successo della creazione della fistola oronasale (ONF) viene valutato il 7° giorno successivo alla procedura chirurgica.
<ol><li>Preparare le forniture chirurgiche necessarie: elastico, nastro adesivo, siringhe, teli chirurgici, guanti in lattice, fogli sterili, fogli di metallo sterili e pannelli di schiuma.</li>
	<li>Indossare teli chirurgici e guanti sterili per mantenere le condizioni asettiche. Disinfettare il pannello in schiuma, la fonte di luce e il dispositivo di mantenimento della temperatura con alcol.</li>
	<li>Indurre l'anestesia generale mediante iniezione intraperitoneale di Zoletil50 (80 mg/kg). Attendi fino a quando non c'è una risposta di pizzicamento delle dita dei piedi. Utilizzare lo stesso metodo descritto nei passaggi 2.1.3 e 2.1.4 per immobilizzare il mouse ed esporre il palato duro.</li>
	<li>Eseguire la verifica strutturale anatomica assicurandosi che il setto sia ancora visibile nel sito della ferita, indicando la corretta creazione di ONF (Figura 4A,B).</li>
	<li>Eseguire la verifica funzionale: chiudere la cavità orale del topo e iniettare acqua sterile nella sua cavità orale utilizzando una siringa sterile. Il successo della creazione di ONF è confermato quando il fluido scorre dalle narici del topo.</li>
	<li>Posizionare il mouse sul dispositivo di mantenimento della temperatura (37 °C) fino a quando non riprende completamente conoscenza. Ruotare i topi ogni 10-15 minuti per prevenire il ristagno di sangue o il collasso dei lobi polmonari.</li>
</ol>

Sviluppo di un modello murino efficace per lo studio delle fistole oronasali

<ol><li>Alonso, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-layered+repair+with+a+collagen+membrane+and+a+mucosal+rotational+flap+reinforced+with+fibrine+for+palatal+fistula+closure+in+children%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Pediatric+Otorhinolaryngology%22%5BJournal%5D)">Three-layered repair with a collagen membrane and a mucosal rotational flap reinforced with fibrine for palatal fistula closure in children.</a> International Journal of Pediatric Otorhinolaryngology. 127, 109679(2019).</li>
<li>Garg, R., Shah, S., Uppal, S., Mittal, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+statistical+analysis+of+incidence%2C+etiology%2C+and+management+of+palatal+fistula%5BTitle%5D)+AND+%22National+Journal+of+Maxillofacial+Surgery%22%5BJournal%5D)">A statistical analysis of incidence, etiology, and management of palatal fistula.</a> National Journal of Maxillofacial Surgery. 10 (1), 43-46 (2019).</li>
<li>Mahajan, R. K., Kaur, A., Singh, S. M., Kumar, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+retrospective+analysis+of+incidence+and+management+of+palatal+fistula%5BTitle%5D)+AND+%22Indian+Journal+of+Plastic+Surgery%22%5BJournal%5D)">A retrospective analysis of incidence and management of palatal fistula.</a> Indian Journal of Plastic Surgery. 51 (3), 298-305 (2018).</li>
<li>Huang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validation+of+the+Chinese+Velopharyngeal+Insufficiency+Effects+on+Life+Outcomes+Instrument%5BTitle%5D)+AND+%22Laryngoscope%22%5BJournal%5D)">Validation of the Chinese Velopharyngeal Insufficiency Effects on Life Outcomes Instrument.</a> Laryngoscope. 129 (11), E395-E401 (2019).</li>
<li>Sakran, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+Postoperative+Outcomes+in+Two+Cleft+Palate+Repair+Techniques+without+Relaxing+Incisions%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Evaluation of Postoperative Outcomes in Two Cleft Palate Repair Techniques without Relaxing Incisions.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. , (2023).</li>
<li>Sakran, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+late+cleft+palate+repair+by+a+modified+technique+without+relaxing+incisions%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Stomatology%2C+Oral+and+Maxillofacial+Surgery%22%5BJournal%5D)">Evaluation of late cleft palate repair by a modified technique without relaxing incisions.</a> Journal of Stomatology, Oral and Maxillofacial Surgery. 124 (4), 101403(2023).</li>
<li>Sakran, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Sommerlad-Furlow+modified+palatoplasty+technique%3A+postoperative+complications+and+implicating+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Laryngoscope%22%5BJournal%5D)">The Sommerlad-Furlow modified palatoplasty technique: postoperative complications and implicating factors.</a> Laryngoscope. 133 (4), 822-829 (2023).</li>
<li>Sakran, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+cleft+palate+repair+by+a+modified+technique+without+relaxing+incisions%5BTitle%5D)+AND+%22The+Cleft+Palate-Craniofacial+Journal%22%5BJournal%5D)">Early cleft palate repair by a modified technique without relaxing incisions.</a> The Cleft Palate-Craniofacial Journal. , (2022).</li>
<li>Chen, J., Yang, R., Shi, B., Xu, Y., Huang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Obturator+manufacturing+for+oronasal+fistula+after+cleft+palate+repair%3A+a+review+from+handicraft+to+the+application+of+digital+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Functional+Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Obturator manufacturing for oronasal fistula after cleft palate repair: a review from handicraft to the application of digital techniques.</a> Journal of Functional Biomaterials. 13 (4), 251(2022).</li>
<li>Yussif, N., Wagih, R., Selim, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Propylene+mesh+versus+acrylic+resin+stent+for+palatal+wound+protection+following+free+gingival+graft+harvesting%3A+a+short-term+pilot+randomized+clinical+trial%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Oral+Health%22%5BJournal%5D)">Propylene mesh versus acrylic resin stent for palatal wound protection following free gingival graft harvesting: a short-term pilot randomized clinical trial.</a> BMC Oral Health. 21 (1), 208(2021).</li>
<li>Miron, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet-rich+fibrin+and+soft+tissue+wound+healing%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering+Part+B%3A+Reviews%22%5BJournal%5D)">Platelet-rich fibrin and soft tissue wound healing: a systematic review.</a> Tissue Engineering Part B: Reviews. 23 (1), 83-99 (2017).</li>
<li>Ballestas, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+hard+palate+wound+healing+using+immune+modulatory+autotherapies%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomaterialia%22%5BJournal%5D)">Improving hard palate wound healing using immune modulatory autotherapies.</a> Acta Biomaterialia. 91, 209-219 (2019).</li>
<li>Ferreira, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrical+stimulation+enhances+early+palatal+wound+healing+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Oral+Biology%22%5BJournal%5D)">Electrical stimulation enhances early palatal wound healing in mice.</a> Archives of Oral Biology. 122, 105028(2021).</li>
<li>Lindley, L. E., Stojadinovic, O., Pastar, I., Tomic-Canic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biology+and+Biomarkers+for+Wound+Healing%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Biology and Biomarkers for Wound Healing.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 138 (3 Suppl), 18s-28s (2016).</li>
<li>Xu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+Additive+Manufacturing+of+a+Superlight+Obturator+for+Large+Oronasal+Fistula+in+Pediatric+Patient%5BTitle%5D)+AND+%22Laryngoscope%22%5BJournal%5D)">Rapid Additive Manufacturing of a Superlight Obturator for Large Oronasal Fistula in Pediatric Patient.</a> Laryngoscope. 133 (6), 1507-1512 (2022).</li>
<li>Leenstra, T. S., Kuijpers-Jagtman, A. M., Maltha, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+healing+process+of+palatal+tissues+after+palatal+surgery+with+and+without+implantation+of+membranes%3A+an+experimental+study+in+dogs%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Materials+Science%3A+Materials+in+Medicine%22%5BJournal%5D)">The healing process of palatal tissues after palatal surgery with and without implantation of membranes: an experimental study in dogs.</a> Journal of Materials Science: Materials in Medicine. 9 (5), 249-255 (1998).</li>
<li>In de Braekt, M. M., van Alphen, F. A., Kuijpers-Jagtman, A. M., Maltha, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+healing+and+wound+contraction+after+palatal+surgery+and+implantation+of+poly-%28L-lactic%29+acid+membranes+in+beagle+dogs%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Oral+and+Maxillofacial+Surgery%22%5BJournal%5D)">Wound healing and wound contraction after palatal surgery and implantation of poly-(L-lactic) acid membranes in beagle dogs.</a> Journal of Oral and Maxillofacial Surgery. 50 (4), 359-365 (1992).</li>
<li>Suragimath, G., Krishnaprasad, K. R., Moogla, S., Sridhara, S. U., Raju, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+carbonated+drink+on+excisional+palatal+wound+healing%3A+A+study+on+Wistar+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Indian+Journal+of+Dental+Research%22%5BJournal%5D)">Effect of carbonated drink on excisional palatal wound healing: A study on Wistar rats.</a> Indian Journal of Dental Research. 21 (3), 330-333 (2010).</li>
<li>Zhu, T., Park, H. C., Son, K. M., Yang, H. -C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+dimethyloxalylglycine+on+wound+healing+of+palatal+mucosa+in+a+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Oral+Health%22%5BJournal%5D)">Effects of dimethyloxalylglycine on wound healing of palatal mucosa in a rat model.</a> BMC Oral Health. 15 (1), 60(2015).</li>
<li>Kirschner, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repair+of+oronasal+fistulae+with+acellular+dermal+matrices%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Repair of oronasal fistulae with acellular dermal matrices.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 118 (6), 1431-1440 (2006).</li>
<li>Rohleder, N. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repair+of+oronasal+fistulae+by+interposition+of+multilayered+amniotic+membrane+allograft%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Repair of oronasal fistulae by interposition of multilayered amniotic membrane allograft.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 132 (1), 172-181 (2013).</li>
<li>Kesting, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repair+of+oronasal+fistulas+with+human+amniotic+membrane+in+minipigs%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Oral+and+Maxillofacial+Surgery%22%5BJournal%5D)">Repair of oronasal fistulas with human amniotic membrane in minipigs.</a> British Journal of Oral and Maxillofacial Surgery. 48 (2), 131-135 (2010).</li>
<li>Ayvazyan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collagen-gelatin+scaffold+impregnated+with+bFGF+accelerates+palatal+wound+healing+of+palatal+mucosa+in+dogs%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">Collagen-gelatin scaffold impregnated with bFGF accelerates palatal wound healing of palatal mucosa in dogs.</a> Journal of Surgical Research. 171 (2), e247-e257 (2011).</li>
<li>Takao, K., Miyakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+responses+in+mouse+models+greatly+mimic+human+inflammatory+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Genomic responses in mouse models greatly mimic human inflammatory diseases.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (4), 1167-1172 (2015).</li>
<li>Rongvaux, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+function+of+human+innate+immune+cells+in+a+humanized+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Development and function of human innate immune cells in a humanized mouse model.</a> Nature Biotechnology. 32 (4), 364-372 (2014).</li>
<li>Shan, L., Flavell, R. A., Herndler-Brandstetter, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+humanized+mouse+models+for+studying+human+NK+cells+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Development of humanized mouse models for studying human NK cells in health and disease.</a> Methods in Molecular Biology. 2463, 53-66 (2022).</li>
<li>Keswani, S. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+salivary+vascular+endothelial+growth+factor+%28VEGF%29+in+palatal+mucosal+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair+and+Regeneration%22%5BJournal%5D)">Role of salivary vascular endothelial growth factor (VEGF) in palatal mucosal wound healing.</a> Wound Repair and Regeneration. 21 (4), 554-562 (2013).</li>
<li>Amanso, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+delivery+of+FTY720+induces+neutrophil+activation+through+chemokine+signaling+in+an+oronasal+fistula+model%5BTitle%5D)+AND+%22Regenerative+Engineering+and+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Local delivery of FTY720 induces neutrophil activation through chemokine signaling in an oronasal fistula model.</a> Regenerative Engineering and Translational Medicine. 7 (2), 160-174 (2021).</li>
<li>Antiorio, A. T. F. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Administration+of+meloxicam+to+improve+the+welfare+of+mice+in+research%3A+a+systematic+review+%282000+-+2020%29%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">Administration of meloxicam to improve the welfare of mice in research: a systematic review (2000 - 2020).</a> Veterinary Research Communications. 46 (1), 1-8 (2022).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

I ricercatori hanno esplorato vari materiali, farmaci e nuove tecniche per il trattamento dell'ONF 10,11,12,13,14,15,16,17. Con i progressi nelle procedure chirurgiche, l'incidenza e la recidiva di ONF sono state ridotte. Tuttavia, a causa delle caratterist...

La fistola oronasale (ONF), un'apertura anomala tra la cavità orale e quella nasale, si manifesta clinicamente come un difetto in un'area strutturale dal processo alveolare all'ugola, che si verifica comunemente come complicanza dopo la riparazione della palatoschisi1. I pazienti con ONF soffrono di reflusso alimentare, disturbi articolari e compromissione della funzione velofaringea, con un impatto significativo sulla qualità della vita 2,3,4. Il tasso di ONF post-operatoria varia dal 2,4% al 55% a causa di fattori quali la larghezza della schisi, il tipo di Veau e il metodo chirurgico 5,6,7,8. Inoltre, il tasso di recidiva dopo la riparazione dell'ONF è elevato, compreso tra lo 0% e il 43%9.
Diversi nuovi trattamenti si sono recentemente dimostrati promettenti nel campo dell'ONF, tra cui diversi materiali, farmaci e nuove tecniche 10,11,12,13,14,15,16,17. Una valutazione accurata degli effetti terapeutici è essenziale in quanto fornisce la base per la selezione e l'ulteriore sviluppo dei trattamenti per l'ONF. Tuttavia, ottenere una valutazione valida a breve termine per gli effetti terapeutici diversi dalla chirurgia è difficile, poiché le caratteristiche degli ONF variano tra i diversi pazienti. Pertanto, è necessario stabilire un modello di malattia ONF per verificare l'efficacia di questi metodi di trattamento.
Per diversi decenni, i ricercatori hanno generato il modello della fistola oronasale (ONF) in varie specie animali, tra cui ratti18,19, suinetti20,21, minipig22 e cani23, poiché queste specie possiedono un palato duro sostanziale adatto alla manipolazione chirurgica. Tuttavia, i topi hanno una sequenza genetica e un intero genoma simili a quelli degli esseri umani, il che li rende un modello importante per la ricerca e lo sviluppo di nuovi farmaci24,25,26. Inoltre, i topi offrono poche variazioni da lotto a lotto, il che li rende una scelta favorevole per stabilire il modello ONF12,13,27.
Tuttavia, i passaggi dettagliati per la creazione di ONF non sono stati descritti e la stabilità delle dimensioni ONF non è stata presa in considerazione. Inoltre, la verifica della formazione di ONF si basava esclusivamente sull'osservazione28, senza garantire la comunicazione diretta tra la cavità orale e quella nasale. Non è stato dimostrato con altri mezzi, come la perdita di peso corporeo del topo a causa delle difficoltà alimentari causate dall'ONF. Inoltre, non è stata presa in considerazione la normale variazione delle dimensioni della ferita, che è fondamentale per gli studi su farmaci o materiali che promuovono o inibiscono la guarigione della ferita. Pertanto, vi è una forte necessità di stabilire un modello ONF stabile e convalidato.
L'obiettivo di questo studio è stato quello di sviluppare un modello pratico di ONF che affronti le questioni di cui sopra, con la speranza che questo protocollo serva come base per la ricerca futura sui meccanismi di guarigione delle ferite palatali e nuovi trattamenti per l'ONF.

<table><tbody><tr><td>Scienze della microscopia elettronica</td> <td>del germinatore</td>&nbsp;<td>66118-20</td><td>Apparecchiature per il riscaldamento e la disinfezione</td></tr><tr><td>Guanti in lattice</td><td>Allmed</td><td></td><td>o simili</td></tr><tr><td>Lights</td><td>Olympus</td><td>A1813</td><td></td></tr><tr><td>Meloxicam</td><td>MedChemExpress</td><td>HY-B0261</td><td>frantumato; 5 mg/kg</td></tr><tr><td>Strumenti microchirurgici (forbici e pinzette)</td><td>Jiangsu Tonghui Medical Devices Co.</td><td>M-Y-0087</td><td>Strumento chirurgico</td></tr><tr><td>Cauterizzazione oftalmologica</td><td>Suqian Wenchong Medical Equipment Co.</td><td>1.00234E + 13</td><td>Strumento chirurgico</td></tr><tr><td>Cotone sterile,</td> <td>Yancheng Begu Technology Co.</td><td></td><td>o simile</td></tr><tr><td>Foglio di metallo sterile</td><td>Biosharp</td><td></td><td>o simile</td></tr><tr><td>Fogli sterili</td><td>3M</td><td>XH003801129</td><td>o simili</td></tr><tr><td>Teli chirurgici</td><td>Yancheng Begu Technology Co.</td><td></td><td>o</td></tr><tr><td>simili Siringhe</td><td>Yancheng Begu Technology Co.</td><td>S-015301</td><td>o simile</td></tr><tr><td>Tape</td><td>Bkmamlab</td><td></td><td>o dispositivo simile</td></tr> per <tr><td>il mantenimento della temperatura</td><td>Harvard Apparatus&nbsp;</td><td>LE-13-2104</td><td></td></tr><tr><td>Zoletil50</td><td>Virbac</td><td></td><td>80 mg/kg</td></tr></tbody></table>

creazione di un modello murino di fistola oronasale

Establishment of an Oronasal Fistula Mice Model

Questo studio presenta un metodo che utilizza il cauterizzazione oftalmologica riscaldata per sviluppare un modello praticabile per lo studio delle fistole oronasali. I topi C57BL/6 sono stati utilizzati per stabilire il modello di fistola oronasale (ONF). Per creare l'ONF, i topi sono stati anestetizzati e immobilizzati e i loro palati duri sono stati esposti. Durante la procedura chirurgica, è stata indotta una lesione della mucosa a tutto spessore di 2,0 x 1,5 mm nella linea mediana del palato duro utilizzando la cauterizzazione oftalmologica. Era fondamentale controllare le dimensioni dell'ONF e ridurre al minimo il sanguinamento per garantire il successo dell'esperimento. La verifica dell'efficacia del modello ONF è stata condotta il 7° giorno dopo l'intervento, comprendendo sia valutazioni anatomiche che funzionali. La presenza del setto nasale all'interno della cavità orale e il deflusso di acqua sterile dalle narici al momento dell'iniezione nella cavità orale hanno confermato il successo del modello ONF. Il modello ha dimostrato una fistola oronasale pratica e di successo, caratterizzata da un basso tasso di mortalità, variazioni di peso significative e variazioni minime nelle dimensioni dell'ONF. Studi futuri potrebbero prendere in considerazione l'adozione di questa metodologia per chiarire i meccanismi di guarigione delle ferite del palato ed esplorare nuovi trattamenti per le fistole oronasali.

Per valutare la fattibilità e la stabilità di questo metodo sperimentale, la stessa procedura è stata eseguita su dieci topi e sono state fatte osservazioni riguardanti la mortalità, i cambiamenti nelle dimensioni della ferita, il peso corporeo e l'analisi istologica. I topi sono stati soppressi il giorno 7.
La procedura ha mostrato un basso tasso di mortalità. Il cauterizzazione oftalmologica e il germinatore, raffigurati nella Figura 1A-C<strong...

Questo articolo delinea una procedura passo passo per stabilire un modello di topi con una fistola oronasale. La fistola oronasale è stata creata impiegando un cauterizzatore oftalmologico riscaldato per danneggiare la porzione mediana del palato duro, con conseguente formazione di un'apertura tra le cavità orali e nasali.

Creazione di un modello murino di fistola oronasale

This study presents a method utilizing heated ophthalmologic cautery to develop a viable model for investigating oronasal fistulas. C57BL/6 mice were used ...

La nostra ricerca si è concentrata su come stabilire il modello murino stabile e standardizzato della fistola oronasale. Questo protocollo ha anche dimostrato i cambiamenti del peso corporeo, i cambiamenti delle dimensioni della ferita e le caratteristiche istologiche della formazione della fistola nasale orale. Le attuali sfide sperimentali per la creazione di modelli di fistola oronasale sono la mortalità dei topi per soffocamento o perdita di sangue, nonché la standardizzazione delle dimensioni della ferita.Il nostro protocollo riduce significativamente la quantità di sanguinamento nei topi durante l'intervento chirurgico rispetto all'uso tradizionale di un punzone da biopsia. In questo modo si riduce il rischio di soffocamento a causa di gravi emorragie. Inoltre, il nostro metodo sperimentale è anche più semplice e meno sensibile dal punto di vista tecnico.La nostra ricerca futura mira a concentrarsi sull'osservazione della risposta infiammatoria durante la formazione della fistola oronasale. Abbiamo anche in programma di sviluppare nuove strategie per ridurre la risposta infiammatoria, promuovendo al contempo la guarigione delle ferite palatali per ridurre l'incidenza della fistola oronasale.

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Questo video mostra la registrazione elettrofisiologica dei neuroni sensoriali olfattivi (OSN) nei topi utilizzando una tecnica di patch-clamp perforata. L'epitelio olfattivo, contenente OSN con recettori degli odori marcati con fluorofori, viene isolato da un topo e fissato in una camera di registrazione. Una pipetta di registrazione è fissata alla manopola dendritica di un OSN e la nistatina all'interno della pipetta perfora la membrana per formare la connettività elettrica con la cellula.

Registrazione perforata con patch-clamp dei neuroni sensoriali olfattivi nei topi

Un modello murino di ricostruzione base cranica endoscopica umana sviluppato che crea un'interfaccia semipermeabile tra il cervello e il naso utilizzando innesti mucose nasali. Questo metodo permette ai ricercatori di studiare consegna al sistema nervoso centrale di alto peso molecolare terapeutica che altrimenti esclusi dalla barriera emato-encefalica, se somministrati per via sistemica.

Eterotopico mucosa engrafting Procedura di Drug Delivery diretto al cervello nei topi

Presentiamo un protocollo chirurgico che descrive in dettaglio come eseguire un'assotomia di taglio o schiacciamento sul nervo facciale nel topo. L'assotomia del nervo facciale può essere impiegata per studiare la risposta fisiologica alla lesione nervosa e testare le tecniche terapeutiche.

Facial assotomia Nerve in topi: un modello per studiare motoneuroni risposta al danno

Qui, stabiliamo un nuovo modello di ratto Sprague-Dawley (SD) di trombosi sagittale superiore (SSS) tramite un metodo di embolizzazione del filo e la stabilità e l'affidabilità del modello sono state verificate.<br...

Istituzione di un modello di ratto di occlusione sagittale-seno superiore tramite un metodo thread-embolismo

Questo protocollo dimostra i dettagli passo-passo su come estrarre il primo molare mandibolare nel topo. Fornisce un metodo alternativo per i ricercatori che si concentrano sulla guarigione e la rigenerazione della mandibola.

L'istituzione di un modello murino di guarigione dell'orbita di estrazione molare mandibolare

Questo protocollo dimostra un modello unico di ictus del topo con un infarto di medie dimensioni e un eccellente tasso di sopravvivenza. Questo modello consente ai ricercatori preclinici sull'ictus di estendere la durata dell'ischemia, utilizzare topi anziani e valutare gli esiti funzionali a lungo termine.

Un modello modificato di occlusione dell'arteria cerebrale media transcranica per studiare gli esiti dell'ictus nei topi anziani

Questo protocollo presenta la creazione e la conferma di un modello postnatale di sovraccarico del volume ventricolare destro (VO) in topi con fistola arterovenosa addominale (AVF), che può essere applicato per studiare come il VO contribuisce allo sviluppo cardiaco postnatale.

Istituzione e conferma di un modello murino postnatale di sovraccarico del volume ventricolare destro

L'obiettivo di questo protocollo è stabilire un modello di fibrosi muscolare orofacciale. Il confronto dell'istologia tra il massetere dei topi e il muscolo tibiale anteriore dopo la lesione da congelamento ha confermato la fibrosi del muscolo massetere. Questo modello faciliterà ulteriori indagini sul meccanismo alla base della fibrosi muscolare orofacciale.

Lesione da congelamento nel muscolo massetere del topo per stabilire un modello di fibrosi muscolare orofacciale

Questo articolo presenta un protocollo semplificato per stabilire un modello di pulpite nei topi utilizzando un innovativo bavaglio orale, seguito da una successiva analisi istologica.

Istituzione di un modello di esposizione alla polpa murina con un nuovo bavaglio orale per la ricerca sulla pulpite

Questo studio ha stabilito modelli di tosse e starnuti nei topi applicando stimoli specifici alla trachea e alla cavità nasale e ha sviluppato un metodo basato sull'audio per distinguere tra tosse e starnuti di topo analizzando le differenze nei loro segnali acustici.<br...

Induzione di precisione e distinzione dei riflessi di tosse e starnuti nei topi

Impara a creare un modello murino di fistola oronasale con cauterio oftalmico riscaldato. Questo protocollo riduce significativamente il sanguinamento chirurgico e il rischio di soffocamento nei topi.

Creazione di un modello murino di fistola oronasale

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