Name: Misurazione della funzione mitocondriale delle cellule T CD8 naive ed effettrici (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-28T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 7 s
Description: Scopri come misurare il metabolismo mitocondriale nelle cellule T CD8 naive ed effettrici utilizzando il Mito Stress Test. Questo metodo analizza la bioenergetica cellulare e la flessibilità metabolica in tempo reale.

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<table><tbody><tr><td>Antimicina A</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A8674</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD28</td><td>Biolegend</td><td>102116</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD3/CD28 Dynabeads</td><td>ThermoFisher</td><td>11456D</td><td></td></tr><tr><td>Biotinilato anti-CD3</td><td>Biolegend</td><td>317320</td><td></td></tr><tr><td>Albumina sierica bovina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>108321-42-2</td><td></td></tr><tr><td>CD8a+ Kit</td> <td>di isolamento delle cellule TMiltenyi Biotec</td><td>130-104-075</td><td></td></tr><tr><td>Filtri cellulari (100 &micro; m)</td><td>CELL TREAT</td><td>229485</td><td></td></tr><tr><td>Acido etilendiamminotetraacetico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E8008</td><td></td></tr><tr><td>Ficoll</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>26873-85-8</td><td>gradiente di densità medio&nbsp;</td></tr><tr><td>FCCP ((4-(trifluorometossi) fenil) carbonoidrazonoil dicianide)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C2920</td><td></td></tr><tr><td>Glucosio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G-6152</td><td></td></tr><tr><td>Glutammina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7513</td><td></td></tr><tr><td>Colonne LS</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td>Colonne a selezione</td></tr><tr><td>positiva Colonna di separazione cellulare magnetica</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-301</td><td></td></tr><tr><td>Micropiastra</td><td>Agilent</td><td>102601-100</td><td></td></tr><tr><td>Oligomicina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>75351</td><td></td></tr><tr><td>Piruvato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>113-24-6</td><td></td></tr><tr><td>Recobinant IL-2</td><td>PeproTech</td><td>200-02</td><td></td></tr><tr><td>Rotenone</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R8875</td><td></td></tr><tr><td>Cavalluccio marino media</td><td>Agilent</td><td>103576-100</td><td></td></tr><tr><td>Cartuccia sensore</td><td>Agilent</td><td>102601-100</td><td></td></tr><tr><td>Streptavidina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9275</td><td></td></tr><tr><td>Piastra sterile a 6 pozzetti</td><td>CELL TREAT</td><td>230601</td><td></td></tr><tr><td>Piastra sterile a 24 pozzetti</td><td>CELL TREAT</td><td>229524</td><td></td></tr><tr><td>XF Calibrant</td><td>Agilent</td><td>102601-100</td><td></td></tr></tbody></table>

misurazione della funzione mitocondriale delle cellule t cd8 naive ed effettrici

Measuring Mitochondrial Function of Na&#239;ve and Effector CD8 T Cells

Le capacità metaboliche glicolitiche e ossidative possono essere misurate utilizzando un saggio funzionale mitocondriale che valuta le capacità mirando ai componenti della catena di trasporto degli elettroni in particolari punti temporali (Figura 2A). Diversi schemi di iniezione possono essere caricati sulle porte della cartuccia del sensore per modificare il test tradizionale e valutare la stimolazione acuta del TCR (Figura 2B, C). Il numero di...

Misurazione della funzione mitocondriale delle cellule T CD8 naive ed effettrici

Understanding how immunometabolism impacts the function, differentiation, and fate of lymphocytes has garnered significant interest and attention. ...

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Immunology and Infection

Immunologia e Infezioni

Cellulo-mediata linfocitotossicità (LMC) test può essere usato per testare le risposte autoreattivi e lo studio dei meccanismi di morte cellulare in vitro. Tuttavia, utilizzando tecniche confocale live-cell immagini microscopiche con coloranti fluorescenti, il tipo e la cinetica di morte cellulare così come i percorsi utilizzati possono essere studiati in maggiore dettaglio.

Metodi per valutare la morte delle cellule beta Mediata da linfociti T citotossici

Questo video dimostra la valutazione del funzionamento mitocondriale delle cellule endoteliali vascolari cerebrali (CVE) utilizzando un test di flusso extracellulare. Le cellule CVE sono piastrate in una piastra di coltura cellulare a flusso extracellulare. I sensori di flusso extracellulare vengono idratati prima di essere caricati e calibrati nel bioanalizzatore. La piastra contenente le celle viene quindi caricata per l'analisi.

Valutazione della funzione mitocondriale nelle cellule endoteliali vascolari cerebrali

Questo protocollo descrive un sensibile test di citotossicità basato su cellule. Enumerando la diminuzione della frequenza delle cellule T CD4+ bersaglio vive in presenza di un numero crescente di cellule T CD8+ effettrici, questo test consente la valutazione diretta dell'attività citolitica delle cellule T CD8+ antigene-specifiche.

Saggio di citometria a flusso cellulare per misurare l'attività citotossica

Qui descritto è un metodo per rilevare e quantificare proteine ​​di membrana mitocondriale esterna da immunomarcatura di mitocondri isolati da tessuto roditore e l'analisi mediante citometria a flusso. Questo metodo può essere esteso a valutare aspetti funzionali di sottopopolazioni mitocondriali.

Immunolocalizzazione della membrana esterna proteine ​​mediante citometria di flusso di mitocondri isolati

Questo articolo viene illustrato un metodo potente per quantificare i mitocondri o i lisosomi delle cellule viventi. La combinazione di coloranti specifici lisosoma o mitocondri con anticorpi fluorescente coniugati contro marcatori di superficie permette la quantificazione di questi organelli in popolazioni di cellule miste, come primario cellule ottenute da campioni di tessuto, utilizzando citometria a flusso multicolor.

Quantificazione di basata su citometria a flusso multicolor dei mitocondri e lisosomi in cellule di T

Descriviamo qui un saggio di uccisione a base di citometria in vivo che consente di esaminare l'immunodominanza nelle risposte citotossiche dei linfociti T (CTL) a un antigene tumorale modello. Forniamo esempi di come questo saggio elegante può essere impiegato per gli studi meccanicistici e per i test di efficacia dei farmaci.

Sartoria in vivo saggi di citotossicità per studiare l'Immunodominanza nelle risposte delle cellule CD8+ T specifiche del tumore

Qui descriviamo un metodo affidabile per misurare la massa mitocondriale e il potenziale della membrana nelle cellule staminali ematopoietiche coltivate nell'ex vivo e nelle cellule T.

Misurazione della massa mitocondriale e del potenziale della membrana nelle cellule staminali ematopoietiche e t-cellule da parte della citometria di flusso

L'adattamento metabolico è fondamentale per le cellule T in quanto detta differenziazione, persistenza e citotossicità. Qui viene presentato un protocollo ottimizzato per il monitoraggio della respirazione mitocondriale in cellule T primarie umane differenziate ex vivo con citochine.

Monitoraggio in tempo reale della respirazione mitocondriale in cellule T primarie umane graduate differenziate con citochine

Viene descritta una procedura per studiare la dinamica del metabolismo del DNA mitocondriale (mtDNA) nelle cellule utilizzando un formato di piastra multi-pozzetto e l'imaging automatizzato di immunofluorescenza per rilevare e quantificare la sintesi e la distribuzione del mtDNA. Questo può essere ulteriormente utilizzato per studiare gli effetti di vari inibitori, stress cellulari e silenziamento genico sul metabolismo del mtDNA.

Quantificazione basata su immagini ad alto rendimento della sintesi e della distribuzione del DNA mitocondriale

Questa tecnica descrive un flusso di lavoro efficace per visualizzare e misurare quantitativamente il potenziale della membrana mitocondriale e i livelli di superossido all'interno delle cellule HeLa utilizzando l'imaging dal vivo basato sulla fluorescenza.

Quantificazione basata sulla fluorescenza del potenziale di membrana mitocondriale e dei livelli di superossido utilizzando l'imaging dal vivo nelle cellule HeLa

I metodi per studiare la bioenergetica mitocondriale in concentrazioni di substrato fisiologicamente rilevanti nelle cellule immunitarie sono limitati. Forniamo un protocollo dettagliato che utilizza la fluorespirometria ad alta risoluzione per valutare i cambiamenti nella risposta del potenziale della membrana mitocondriale alla domanda di energia nelle cellule T umane, nei monociti e nelle cellule mononucleate periferiche.

Fluorespirometria ad alta risoluzione per valutare i cambiamenti dinamici del potenziale di membrana mitocondriale nelle cellule immunitarie umane

Scopri come misurare il metabolismo mitocondriale nelle cellule T CD8 naive ed effettrici utilizzando il Mito Stress Test. Questo metodo analizza la bioenergetica cellulare e la flessibilità metabolica in tempo reale.

Misurazione della funzione mitocondriale delle cellule T CD8 naive ed effettrici

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