Preparazione del campione per la criotomografia in situ di cellule di mammifero

Lo scopo di questa ricerca è quello di sviluppare una metodologia per la preparazione dei campioni che sia accessibile e riproducibile in modo affidabile. Raggiungendo questo obiettivo, la potenza della tomografia crioelettronica cellulare diretta può essere utilizzata per rispondere a un'ampia varietà di domande biologiche. Le sfide della preparazione della rete sono enormi.

Le cellule non si attaccano facilmente alle griglie e la manipolazione può causare danni allo strato di carbonio, con conseguente perdita di aree della griglia visualizzabili. Inoltre, la prevalenza di sottili protrusioni cellulari viene ridotta senza prestare attenzione alle corrette condizioni di preparazione del campione. I protocolli attuali richiedono in genere attrezzature specializzate per risolvere i principali colli di bottiglia della semina, come il micro patterning e i supporti stampati in 3D per l'attacco e la manipolazione delle cellule, rispettivamente.

Questo protocollo fornisce soluzioni con una maggiore accessibilità, pur mantenendo la flessibilità per questi strumenti specializzati da utilizzare per le applicazioni a valle.