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Lo sviluppo e l'applicazione di saggi biofisici per la valutazione della formazione di complessi ...
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JoVE Journal Biochemistry
The Development and Application of Biophysical Assays for Evaluating Ternary Complex Formation Induced by Proteolysis Targeting Chimeras (PROTACS)

Lo sviluppo e l'applicazione di saggi biofisici per la valutazione della formazione di complessi ternari indotti da chimere mirate alla proteolisi (PROTACS)

Full Text
4,451 Views
07:22 min
January 12, 2024

DOI: 10.3791/65718-v

Wei Jiang1, Holly Soutter1

1Center for the Development of Therapeutics,The Broad Institute of MIT and Harvard

AI Banner

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Qui descriviamo i protocolli per la caratterizzazione biofisica della formazione di complessi ternari indotti da chimere mirate alla proteolisi (PROTACS) che coinvolgono le ubiquitina ligasi Von Hippel-Lindau E3 ligasi (VHL) e Cereblon (CRBN). I metodi biofisici qui illustrati includono la risonanza plasmonica di superficie (SPR), l'interferometria del biostrato (BLI) e la calorimetria di titolazione isotermica (ITC).

La nostra ricerca si concentra sulla replica di sistemi modello consolidati, sulla loro validazione attraverso saggi aggiuntivi e sull'adattamento di queste metodologie per adattarsi al nostro specifico contesto di ricerca. Il nostro obiettivo è quello di dimostrare un approccio versatile che può essere applicato a vari progetti. L'attuale sfida sperimentale, la selezione strategica delle licenze del formato e delle condizioni di analisi appropriate in base ai requisiti specifici del progetto e alle lacune di conoscenza esistenti.

Questo è essenziale per ottenere risposte efficienti e accurate nei nostri esperimenti. Il nostro protocollo fornisce un approccio semplificato per un adattamento senza soluzione di continuità ai vari sistemi ProTech. Inoltre, conduciamo una valutazione approfondita di ogni metodo, evidenziandone i rispettivi pro e contro.

Offriamo istruzioni informate sulla scelta del formato più adatto in base alle condizioni specifiche.

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