Name: Alleviamento della nefropatia da IgA mediata dalla dioscina inibendo lattivazione delle cellule B in vivo e diminuendo la produzione di IgA1 carente di galattosio in vitro (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-10-13T14:40:00.000+00:00
Duration: 14 min 18 s
Description: Scopri come la dioscina allevia la nefropatia da IgA inibendo l'attivazione delle cellule B in vivo e riducendo la produzione di IgA1 carente di galattosio in vitro.

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<meta charset="utf8"></head><body>Trattamento della nefropatia da immunoglobulina A (IgAN) con dioscina in un modello murino

<ol><li>Knoppova, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+origin+and+activities+of+IgA1-containing+immune+complexes+in+IgA+nephropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">The origin and activities of IgA1-containing immune complexes in IgA nephropathy.</a> Frontiers in Immunology. 7, 117(2016).</li>
<li>Suzuki, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pathophysiology+of+IgA+nephropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+The+American+Society+of+Nephrology%22%5BJournal%5D)">The pathophysiology of IgA nephropathy.</a> Journal of The American Society of Nephrology. 22 (10), 1795-1803 (2011).</li>
<li>He, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthetic+double-stranded+RNA+poly%28I%3AC%29+aggravates+IgA+nephropathy+by+triggering+IgA+class+switching+recombination+through+the+TLR3-BAFF+axis%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Synthetic double-stranded RNA poly(I:C) aggravates IgA nephropathy by triggering IgA class switching recombination through the TLR3-BAFF axis.</a> American Journal of Nephrology. 42 (3), 185-197 (2015).</li>
<li>Zhao, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+level+of+galactose-deficient+IgA1+in+the+sera+of+patients+with+IgA+nephropathy+is+associated+with+disease+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International%22%5BJournal%5D)">The level of galactose-deficient IgA1 in the sera of patients with IgA nephropathy is associated with disease progression.</a> Kidney International. 82 (7), 790-796 (2012).</li>
<li>Xing, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((C1GALT1+expression+is+associated+with+galactosylation+of+IgA1+in+peripheral+B+lymphocyte+in+immunoglobulin+a+nephropathy%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Nephrology%22%5BJournal%5D)">C1GALT1 expression is associated with galactosylation of IgA1 in peripheral B lymphocyte in immunoglobulin a nephropathy.</a> BMC Nephrology. 21 (1), 18(2020).</li>
<li>Qin, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((External+suppression+causes+the+low+expression+of+the+Cosmc+gene+in+IgA+nephropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrology+Dialysis+Transplantation%22%5BJournal%5D)">External suppression causes the low expression of the Cosmc gene in IgA nephropathy.</a> Nephrology Dialysis Transplantation. 23 (5), 1608-1614 (2008).</li>
<li>Sakai, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lactobacillus+gasseri+SBT2055+induces+TGF-%CE%B2+expression+in+dendritic+cells+and+activates+TLR2+signal+to+produce+IgA+in+the+small+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Lactobacillus gasseri SBT2055 induces TGF-β expression in dendritic cells and activates TLR2 signal to produce IgA in the small intestine.</a> PLoS One. 9 (8), 105370(2014).</li>
<li>Gutzeit, C., Magri, G., Cerutti, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+IgA+production+and+its+role+in+host-microbe+interaction%5BTitle%5D)+AND+%22Immunological+Reviews%22%5BJournal%5D)">Intestinal IgA production and its role in host-microbe interaction.</a> Immunological Reviews. 260 (1), 76-85 (2014).</li>
<li>Serino, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+a+retrospective+international+study%2C+circulating+miR-148b+and+let-7b+were+found+to+be+serum+markers+for+detecting+primary+IgA+nephropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International%22%5BJournal%5D)">In a retrospective international study, circulating miR-148b and let-7b were found to be serum markers for detecting primary IgA nephropathy.</a> Kidney International. 89 (3), 683-692 (2016).</li>
<li>Lu, F., et al. Therapeutic effect of Rhizoma Dioscoreae Nipponicae on gouty arthritis based on the SDF-1/CXCR 4 and p38 MAPK pathway: an in vivo and in vitro study. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLu%2C+F+%22Phytotherapy+research%3A+PTR%22">Phytotherapy research: PTR</a>. 28 (2), 280-288 (2014).</li>
<li>Wang, W., Xu, L., Zhou, L., Wan, S., Jiang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Network+pharmacology+approach+to+reveal+the+underlying+mechanisms+of+Rhizoma+Dioscoreae+Nipponicae+in+the+treatment+of+asthma%5BTitle%5D)+AND+%22Evidence-Based+Complementary+and+Alternative+Medicine%3A+eCAM%22%5BJournal%5D)">A Network pharmacology approach to reveal the underlying mechanisms of Rhizoma Dioscoreae Nipponicae in the treatment of asthma.</a> Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine: eCAM. 2022, 4749613(2022).</li>
<li>Tian, W. W., Wei, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Professor+TONG+Xiaolin+used+the+experience+of+Dioscoreae+Nipponicae%5BTitle%5D)+AND+%22Jilin+Journal+of+Chinese+Medicine%22%5BJournal%5D)">Professor TONG Xiaolin used the experience of Dioscoreae Nipponicae.</a> Jilin Journal of Chinese Medicine. 40 (05), 589-592 (2020).</li>
<li>Rao, X. R., Bai, Y. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Das+Xiwen%27s+experience+in+treating+IgA+nephropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Beijing+Journal+of+Traditional+Chinese+Medicine%22%5BJournal%5D)">Das Xiwen's experience in treating IgA nephropathy.</a> Beijing Journal of Traditional Chinese Medicine. 9, 691-693 (2008).</li>
<li>Si, Y., Zhang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+data+mining+study+on+the+pattern+of+medication+use+in+the+treatment+of+IgA+nephropathy+by+Professor+Zhang+Yu%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chinese+Physician%22%5BJournal%5D)">A data mining study on the pattern of medication use in the treatment of IgA nephropathy by Professor Zhang Yu.</a> Journal of Chinese Physician. 20 (01), 109-111 (2018).</li>
<li>Jiang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+the+enzymatic+extraction+technology+of+Diosgenin+from+Dioscorea+nipponica%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Traditional+Patent+Medicine%22%5BJournal%5D)">Optimization of the enzymatic extraction technology of Diosgenin from Dioscorea nipponica.</a> Chinese Traditional Patent Medicine. 39 (03), 621-624 (2017).</li>
<li>Qi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dioscin+alleviates+lipopolysaccharide-induced+inflammatory+kidney+injury+via+the+microRNA+let-7i%2FTLR4%2FMyD88+signaling+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacological+Research%22%5BJournal%5D)">Dioscin alleviates lipopolysaccharide-induced inflammatory kidney injury via the microRNA let-7i/TLR4/MyD88 signaling pathway.</a> Pharmacological Research. 111, 509-522 (2016).</li>
<li>Yang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+the+pharmacological+activities+of+Dioscin%5BTitle%5D)+AND+%22BioMed+Research+International%22%5BJournal%5D)">Recent advances in the pharmacological activities of Dioscin.</a> BioMed Research International. 2019, 5763602(2019).</li>
<li>Nal Zou, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toll-like+receptor+4+signaling+pathway+in+the+protective+effect+of+Pioglitazone+on+experimental+immunoglobulin+A+nephropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Medical+Journal%22%5BJournal%5D)">Toll-like receptor 4 signaling pathway in the protective effect of Pioglitazone on experimental immunoglobulin A nephropathy.</a> Chinese Medical Journal. 130 (8), 906-913 (2017).</li>
<li>Xu, S. Y., Bian, R. L., Chen, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacological+experiments+methodology%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Pharmacological+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Pharmacological experiments methodology.</a> Chinese Pharmacological Bulletin. 1, 19(1992).</li>
<li>Shen, J. C., Ren, Y., Rao, X. R., You, Y., Li, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Network+pharmacology%2C+molecular+docking%2C+and+in+vitro+experiments+to+explore+the+molecular+mechanism+of+Dioscorea+Nipponica+Makion+in+the+treatment+of+IgA+nephropathy%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Integrated+Traditional+and+Western+Medicine%22%5BJournal%5D)">Network pharmacology, molecular docking, and in vitro experiments to explore the molecular mechanism of Dioscorea Nipponica Makion in the treatment of IgA nephropathy.</a> World Journal of Integrated Traditional and Western Medicine. 16 (12), 2246-2254 (2021).</li>
<li>Mestecky, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IgA+nephropathy%3A+molecular+mechanisms+of+the+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">IgA nephropathy: molecular mechanisms of the disease.</a> Annual Review of Pathology. 8, 217-240 (2013).</li>
<li>Novak, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IgA1-containing+immune+complexes+in+IgA+nephropathy+differentially+affect+proliferation+of+mesangial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International%22%5BJournal%5D)">IgA1-containing immune complexes in IgA nephropathy differentially affect proliferation of mesangial cells.</a> Kidney International. 67 (2), 504-513 (2005).</li>
<li>Nihei, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+IgA+autoantibodies+targeting+mesangial+cells+redefines+the+pathogenesis+of+IgA+nephropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Advances%22%5BJournal%5D)">Identification of IgA autoantibodies targeting mesangial cells redefines the pathogenesis of IgA nephropathy.</a> Science Advances. 9 (12), (2023).</li>
<li>Raska, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+characterization+of+CMP-NeuAc%3A+GalNAc-IgA1+alpha2%2C6-sialyltransferase+in+IgA1-producing+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Identification and characterization of CMP-NeuAc: GalNAc-IgA1 alpha2,6-sialyltransferase in IgA1-producing cells.</a> Journal of Molecular Biology. 369 (1), 69-78 (2007).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Anti-CD20 / MS4A1 Anticorpo</td><td>Boster Biotechnology Company</td><td>A03780-3</td><td></td></tr><tr><td>Antifade mezzo di montaggio</td><td>Beyotime, Shanghai, Cina</td><td>P0128S</td><td></td></tr><tr><td>Balb / c topi</td><td>Beijing Weitong Lihua Laboratory Animal Technology Co., Ltd.</td><td></td><td></td>110322220101424000</tr><tr><td>siero bloccante</td><td>Solarbio, Pechino, Cina</td><td>SL038</td><td></td></tr><tr><td>Gamma globulina bovina</td><td>ShangHai YuanYe Biotechnology Company</td><td>S12031</td><td></td></tr><tr><td>C1GALT1 anticorpo policlonale</td><td>Proteintech Group, Inc, USA</td><td>27569-1-AP</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione di recupero dell'antigene citrato (50&times;)</td><td>Phygene Biotechnology Company</td><td>PH0422</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo policlonale COSMC</td><td>Proteintech Group, Inc, USA</td><td>19254-1-AP</td><td></td></tr><tr><td>Kit di rilevamento della citotossicità</td><td>Roche Company 4744926001</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sistema di rilevamento Dako REAL EnVision, Perossidasi/DAB+</td><td>Dako</td><td>K5007</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Invitrogen</td><td>D1306</td><td></td></tr><tr><td>Dioscina</td><td>Istituto nazionale per il controllo degli alimenti e dei farmaci</td><td>111707-201703</td><td></td></tr><tr><td>Compresse DIO</td><td>Chengdu No 1 Pharmaceutical Co., Ltd.</td><td></td><td></td>H51023866</tr><tr><td>soluzione di lavoro ECL</td><td>Merck Biotechnology, Inc</td><td>WBKLS0100&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Kit di conteggio cellulare migliorato-8</td><td>Beyotime, Shanghai, Cina</td><td>C0043</td><td></td></tr><tr><td>Mascheratura della rimozione in un solo passaggio della premiscela di sintesi del primo filamento di cDNA genico</td><td>TIANGEN, Pechino, Cina</td><td>KR118-02</td><td></td></tr><tr><td>Kit di colorazione Schiff acido periodico glicogeno (PAS)&nbsp;</td><td>BaSO Biotechnology Company</td><td>BA4080A</td><td></td></tr><tr><td>IgA-AF488 IgA-AF488</td><td>SouthernBiotech</td><td>1040-30</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo IgG anti-coniglio di capra (H+L), HRP coniugato</td><td>BeiJing Bioss Biotechnology Company</td><td>BS-0295G-HRP</td><td></td></tr><tr><td>Kit ELISA Gd-IgA1 umano</td><td>IBL</td><td>27600</td><td></td></tr><tr><td>Kit ELISA IgA umano</td><td>MultiSciences (LiankeBio)</td><td>70-EK174-96</td><td></td></tr><tr><td>Kit per il dosaggio delle proteine Pierce BCA</td><td>Thermo Scientific</td><td>23227</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione PMSF</td><td>Beyotime, Shanghai, Cina</td><td>ST507</td><td></td></tr><tr><td>Proteinasi K&nbsp;</td><td>Phygene Biotechnology Company</td><td>PH1521</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo policlonale anti-CXCR5 di coniglio&nbsp;</td><td>BeiJing Bioss Biotechnology Company</td><td>bs-23570R</td><td></td></tr><tr><td>tampone di lisi RIPA</td><td>Beyotime, Shanghai, Cina</td><td>P0013B</td><td></td></tr><tr><td>Kit di estrazione dell'RNA totale RNAsimple</td><td>TIANGEN, Pechino, Cina</td><td>DP419</td><td></td></tr><tr><td>RPMI Medium 1640</td><td>Solarbio, Pechino, Cina</td> Kit di analisi delle proteine <td>31800</td><td></td></tr><tr><td>Super-Bradford</td><td>CWBIO, Pechino, Cina</td><td>CW0013</td><td></td></tr><tr><td>Tritone X-100</td><td>Beyotime, Shanghai, Cina</td><td>ST795</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-Actina Coniglio mAbclonal</td><td>, Wuhan, Cina</td><td>AC026</td><td></td></tr></tbody></table>

alleviamento della nefropatia da iga mediata dalla dioscina inibendo l'attivazione delle cellule b in vivo e diminuendo la produzione di iga1 carente di galattosio in vitro

Dioscin Mediated IgA Nephropathy Alleviation by Inhibiting B Cell Activation In Vivo and Decreasing Galactose-Deficient IgA1 Production In Vitro

Effetto della DIO sul tessuto renale in un modello di topi IgAN
Rispetto al gruppo di controllo, il modello di topi IgAN immuno-indotti della mucosa (gruppo modello) ha avuto un aumento significativo della proteinuria (Figura 2 supplementare), la deposizione di IgA era visibile nella regione mesangiale, la fluorescenza era distribuita uniformemente in cluster in tutta la regione mesangiale (Figura 1A), la colorazione PAS del tessuto renale ha mostrato proliferazione delle cellule mesangiali e iperplasia stromale (Figura 1B), che è stato ridotto nel gruppo DIO gavage (gruppo DIO).
Effetto di DIO sui linfociti B nel cerotto di Peyer
Il cerotto di Peyer è il sito principale della conversione dei linfociti B in cellule secernenti IgA. Abbiamo preso il cerotto di Peyer come oggetto di ricerca per osservare l'effetto della DIO sui linfociti B rilevando l'espressione dei marcatori delle cellule B CD20 e CXCR5. I risultati immunoistochimici hanno mostrato che l'espressione di CD20 e CXCR5 era significativamente più alta nel gruppo modello rispetto al gruppo di controllo. DIO potrebbe inibire l'espressione dei suddetti marcatori molecolari (Figura 2A, B).
L'intervallo di concentrazione sicuro di DIO sulle celle DAKIKI
L'LDH è un marcatore dell'integrità della membrana plasmatica e un indicatore di morte cellulare, con tassi di rilascio di LDH più elevati che indicano un danno cellulare più grave. Il test di rilascio LDH è stato utilizzato per determinare l'intervallo di concentrazione sicuro di DIO. La concentrazione massima sicura di DIO è stata determinata da un tasso di rilascio di LDH inferiore al 10%. I risultati (Figura 3) non hanno mostrato citotossicità significativa indotta da DIO a concentrazioni comprese tra 0,25 e 1,0 μg/mL. Pertanto, lo studio seguente ha utilizzato 0,25, 0,5 e 1,0 μg/mL di DIO come livello di dosaggio.
Effetti della DIO sulla proliferazione delle cellule DAKIKI
I risultati sperimentali (Figura 4) hanno mostrato che, rispetto al gruppo modello (gruppo stimolato da LPS), DIO ha inibito la proliferazione delle cellule DAKIKI indotta da LPS in modo dipendente dalla concentrazione. La DIO a concentrazioni di 0,5 e 1,0 μg/mL ha inibito significativamente la proliferazione delle cellule DAKIKI indotta da LPS (P &lt; 0,01).
Effetti della DIO sulla funzione secretoria delle cellule DAKIKI
I livelli di Gd-IgA1 sono strettamente correlati al processo patologico delle IgAN, e le IgA totali vengono testate insieme come indicatore della funzione secretoria cellulare. Un test ELISA è stato utilizzato per rilevare il contenuto di IgA e Gd-IgA1 nel surnatante della coltura cellulare DAKIKI. I risultati hanno mostrato (Figura 5A, B) che le cellule DAKIKI stimolate da LPS secernono più IgA rispetto al gruppo di controllo (P &lt; 0,01). In confronto, DIO ha inibito significativamente le cellule DAKIKI dal secernere IgA (P &lt; 0,01) in modo dipendente dalla concentrazione. Rispetto al gruppo di controllo, le cellule DAKIKI stimolate da LPS hanno secreto più Gd-IgA1 con una tendenza statistica (P &lt; 0,10), e DIO ha inibito la secrezione di Gd-IgA1 dalle cellule DAKIKI stimolate da LPS in modo concentrazione-dipendente (P &lt; 0,05 e P &lt; 0,01), tra cui DIO a 1,0 μg/mL ha inibito significativamente la secrezione di Gd-IgA1 con un tasso di inibizione del 25%.
Il meccanismo di DIO inibisce la secrezione di Gd-IgA1 da parte delle cellule DAKIKI
Per indagare ulteriormente il possibile meccanismo di inibizione dell'eccessiva secrezione di Gd-IgA1 da parte delle cellule DAKIKI, i livelli di transferasi glicosilata C1GALT1 e proteina chaperone Cosmc mRNA nelle cellule DAKIKI sono stati rilevati mediante qRT-PCR e i risultati hanno mostrato (Figura 6A, B) che l'espressione relativa dell'mRNA di C1GALT1 e Cosmc era sottoregolata nelle cellule DAKIKI nel gruppo modello rispetto al gruppo di controllo (P &lt; 0,01). DIO ha sovraregolato l'espressione relativa dell'mRNA di C1GALT1 e Cosmc in misura diversa rispetto al gruppo modello, con DIO 1,0 μg/mL che ha aumentato significativamente l'espressione relativa dell'mRNA di C1GALT1 e Cosmc (P &lt; 0,05).
Allo stesso tempo, il metodo WB è stato utilizzato per rilevare l'effetto di DIO sull'espressione proteica di C1GALT1 e Cosmc nelle cellule DAKIKI. Rispetto al gruppo di controllo, l'espressione proteica di C1GALT1 e Cosmc nelle cellule DAKIKI nel gruppo modello è diminuita ovviamente (P &lt; 0,05). Rispetto al gruppo modello, l'espressione proteica di C1GALT1 e Cosmc dopo l'intervento di DIO è risultata sovraregolata. L'espressione proteica di C1GALT1 e Cosmc è stata significativamente sovraregolata da DIO a una concentrazione di 1,0 μg/mL (P &lt; 0,05) (Figura 7A-C).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65719/65719fig1.jpg"> Figura 1: Istopatologia dei reni. (A) Microscopio a immunofluorescenza. Le sezioni renali dei topi di ciascun gruppo sono state colorate con anti-IgA (verde) e DAPI (blu). La barra della scala dell'immagine sopra = 200 μm. La barra della scala dell'immagine sottostante = 50 μm. n = 6 per gruppo. (B) Immagini rappresentative della colorazione PAS del tessuto renale di topi nei gruppi Controllo, Modello e DIO. Barra di scala = 30 μm. La freccia verso il basso mostra le cellule mesangiali e la freccia verso l'alto mostra lo stroma. Barra di scala = 30 μm. n = 6 per gruppo. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65719/65719fig1large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65719/65719fig2.jpg"> Figura 2: Effetto di DIO sui marcatori dei linfociti B. (A) L'espressione di CD20 nel cerotto di Peyer. Barra della scala = 200 μm. n = 6 per gruppo. (B) L'espressione di CXCR5 nel cerotto di Peyer. Le barre della scala si trovano nell'angolo in basso a destra dell'immagine. Barra della scala = 200 μm. n = 6 per gruppo. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65719/65719fig2large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65719/65719fig3.jpg"> Figura 3. Screening della concentrazione sicura di DIO su cellule DAKIKI. I valori statistici sono espressi come media ± SD da tre esperimenti indipendenti. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65719/65719fig3large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65719/65719fig4.jpg"> Figura 4. Diverse concentrazioni di DIO influenzano la proliferazione delle cellule DAKIKI. I dati sono stati espressi come media ±SD. Rispetto al gruppo di controllo, **P &lt; 0,01; rispetto al gruppo di modelli, #P &lt; 0,05' ##P &lt; 0,01; I risultati di tutti gli esperimenti sono stati ripetuti tre volte. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65719/65719fig4large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65719/65719fig5.jpg"> Figura 5. DIO inibisce la secrezione di IgA e Gd-IgA1 da parte delle cellule DAKIKI. (A) Il metodo ELISA ha rilevato l'espressione di IgA in ciascun gruppo. (B) Il metodo ELISA ha rilevato l'espressione di Gd-IgA1 in ciascun gruppo. I dati sono stati espressi come media ± DS. Rispetto al gruppo di controllo, **P &lt; 0,01; rispetto al gruppo di modelli, #P &lt; 0,05, ##P &lt; 0,01; Tutti i risultati sperimentali sono stati ripetuti tre volte. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65719/65719fig5large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65719/65719fig6.jpg"> Figura 6. Il meccanismo della DIO inibisce l'eccessiva secrezione di Gd-IgA1 da parte delle cellule DAKIKI. (A) La QRT-PCR ha rilevato l'espressione dell'mRNA di C1GALT1. (B) La QRT-PCR ha rilevato l'espressione dell'mRNA di Cosmc. I dati sono stati espressi come media ± DS. Rispetto al gruppo di controllo, **P&lt;0,01; rispetto al gruppo di modelli, #P &lt; 0,05, ##P &lt; 0,01; Tutti i risultati sperimentali sono stati ripetuti tre volte. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65719/65719fig6large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65719/65719fig7.jpg"> Figura 7. DIO influenza l'espressione proteica di C1GALT1 e Cosmc nelle cellule DAKIKI. (A) WB ha verificato l'up-regolazione dell'espressione proteica di C1GALT1 e Cosmc da parte di DIO. (B) L'analisi semiquantitativa dell'espressione C1GALT1 è stata eseguita utilizzando l'immagine J. (C) Analisi semiquantitativa dell'espressione di Cosmc utilizzando l'immagine J. I dati sono stati espressi come media ±DS. Rispetto al gruppo di controllo,*P &lt; 0,05; rispetto al gruppo di modelli, #P &lt; 0,05, ##P &lt; 0,01, tutti i risultati sperimentali sono stati ripetuti tre volte. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65719/65719fig7large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
Figura supplementare 1. Lo schema per il modello in vivo. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65719/Supplementary_Figure_1.pdf" target="_blank">Clicca qui per scaricare questa figura.</a>
Figura supplementare 2. Cambiamenti nella proteinuria. I dati sono stati espressi come media ± SD; n = 6 per gruppo. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65719/Supplementary_Figure_2.jpg" target="_blank">Clicca qui per scaricare questa figura.</a>

Alleviamento della nefropatia da IgA mediata dalla dioscina inibendo l'attivazione delle cellule B in vivo e diminuendo la produzione di IgA1 carente di galattosio in vitro

The increase of circulating galactose-deficient IgA1 (Gd-IgA1) is caused by excessive activation of IgA-positive secretory cells in the process of mucosal ...

dioscin-mediated-iga-nephropathy-alleviation-inhibiting-b-cell

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Qui, descriviamo un semplice metodo di imaging confocale per visualizzare la localizzazione in situ delle cellule che secernono la gamma di interferone citochina negli organi linfoidi secondari murini. Questo protocollo può essere esteso per la visualizzazione di altre citochine in tessuti diversi.

Imaging di In Situ Interferon Gamma Production nella Spleen del topo dopo l'infezione da Listeria monocytogenes

Questo protocollo utilizza peptidi misti G6PI per costruire modelli di artrite reumatoide che sono più vicini a quello dell'artrite reumatoide umana in CD4- cellule T e citochine. Cellule T killer naturali ad alta purezza (principalmente iNKT2) con fenotipi e funzioni specifiche sono state ottenute mediante induzione e purificazione in vitro per l'immunoterapia adottiva.

Immunoterapia adottiva delle cellule iNKT in isomerasi indotta da glucosio (G6PI)

Qui presentiamo un protocollo per l'aumento in vivo dell'induzione delle cellule T regolatorie gut-homing. In questo protocollo, le cellule dendritiche sono progettate per produrre localmente alte concentrazioni della vitamina D attiva (1,25-dihydroxyvitamin D o 1,25[OH]2D) e la vitamina attiva A (acido retinoico o RA) de novo.

In Vivo Augmentazione dell'induzione delle cellule T regolatorie Gut-Homing

I microRNA sono coinvolti nella patogenesi della nefropatia da IgA. Abbiamo sviluppato un metodo affidabile per rilevare i livelli di espressione di microRNA nei reni di un modello murino di nefropatia IgA (topi HIGA). Questo nuovo metodo faciliterà il coinvolgimento dei miRNA nella nefropatia da IgA.

Rilevazione dell'espressione di microRNA nei reni di topi nefropatici con immunoglobuline A

L'infiammazione della superficie oculare danneggia i tessuti della superficie oculare e compromette le funzioni vitali dell'occhio. Il presente protocollo descrive un metodo per indurre l'infiammazione oculare e raccogliere i tessuti compromessi in un modello murino di disfunzione della ghiandola di Meibomio (MGD).

Induzione dell'infiammazione della superficie oculare e raccolta dei tessuti coinvolti

Qui vi proponiamo semplici metodi per testare e valutare la presenza di specie reattive dell'ossigeno nelle cellule.

Produzione e di rilevamento di specie reattive dell&#39;ossigeno (ROS) in Cancro

Descriviamo un protocollo generale per il monitoraggio in vivo cella utilizzando la risonanza magnetica in un modello di topo con cellule ex vivo etichettati. Un tipico protocollo di marcatura delle cellule, elaborazione acquisizione delle immagini e la quantificazione è inclusa.

In vivo 19 F MRI per il tracciamento cellulare

L'intestino tenue è spesso esposto alle tossine che possono influenzare il flusso di sangue e di influenzare negativamente l'assorbimento dei nutrienti. Utilizzando un multimyograph e mesenterica arteria e vena isolati, composti o tossine di interesse possono essere sottoposti a screening per vasoactivity.

Isolare e utilizzo Sezioni di mesenterica bovina arteria e vena come un saggio biologico per verificare Vasoactivity nel piccolo intestino

Questo manoscritto fornisce un protocollo per l'impianto di telemetri nel topo allo scopo di misurare le pressioni intrauterine durante la gravidanza.

Telemetria intrauterina misurare mouse contrattile Pressione<em&gt; In Vivo</em

Attivazione microglia e microgliosis sono risposte chiave per neurodegenerazione cronica. Qui vi presentiamo i metodi per in vivo, la visualizzazione a lungo termine della retina CX3CR1-GFP + cellule microgliali di oftalmoscopia confocale, e per la soglia e le analisi morfometrica per identificare e quantificare la loro attivazione. Monitoriamo modifiche microgliali durante fasi iniziali di glaucoma all'età.

In Vivo Dynamics of Retinal microglia attivazione durante neurodegenerazione: confocale oftalmoscopico Imaging e Morfometria cellulare in mouse Glaucoma

Scopri come la dioscina allevia la nefropatia da IgA inibendo l'attivazione delle cellule B in vivo e riducendo la produzione di IgA1 carente di galattosio in vitro.

Alleviamento della nefropatia da IgA mediata dalla dioscina inibendo lattivazione delle cellule B in vivo e diminuendo la produzione di IgA1 carente di galattosio in vitro (Video) | JoVE Journal

Alleviamento della nefropatia da IgA mediata dalla dioscina inibendo l'attivazione delle cellule B in vivo e diminuendo la produzione di IgA1 carente di galattosio in vitro

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