Name: Isolamento, espansione in vitro e caratterizzazione di cellule staminali mesenchimali da tessuto adiposo epididimo di topo (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-01-12T13:05:00.000+00:00
Duration: 4 min 53 s
Description: Scopri l'isolamento e la caratterizzazione di cellule staminali mesenchimali da tessuto adiposo epididimo di topo. Questo metodo offre un protocollo affidabile per applicazioni terapeutiche nel controllo dell'infiammazione.

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Ricerca sostenuta da una sovvenzione del Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnologico (480807/2011-6) e della Fundação de Amparo à Pesquisa de Minas Gerais (APQ-01237-11). Questo studio è stato finanziato in parte dal PROPP UESC (073.6764.2019.0021079-85). MGAG e URS grazie alla borsa di studio concessa rispettivamente dalla Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado da Bahia (FAPESB) e dalla Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES).

Coltura primaria di cellule staminali derivate da tessuto adiposo da epididimo di topo

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<li>Fernández, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose-derived+mesenchymal+stem+cells+%28AdMSC%29+for+the+treatment+of+secondary-progressive+multiple+sclerosis%3A+A+triple+blinded%2C+placebo+controlled%2C+randomized+phase+I%2FII+safety+and+feasibility+study%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Adipose-derived mesenchymal stem cells (AdMSC) for the treatment of secondary-progressive multiple sclerosis: A triple blinded, placebo controlled, randomized phase I/II safety and feasibility study.</a> PLoS One. 13 (5), 0195891(2018).</li>
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</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Le MSC possono essere estratte da diversi tessuti. Nonostante il midollo osseo rappresenti una fonte comune di MSC sia nei murini che nell'uomo25,26, abbiamo scelto di lavorare con il tessuto adiposo in questo studio per la sua ricchezza di MSC, la distribuzione nel corpo e la facilità di accesso. In alternativa, le cellule staminali di derivazione adiposa possono essere utilizzate per generare cellule immortalizzate simili alle MSC27.
Alcuni punti dell'estrazione meritano un'attenzione particolare per la buona riuscita dei protocolli qui condivisi. Innanzitutto, evidenziamo la cura per raccogliere il tessuto che deve essere eseguita in condizioni asettiche. Quindi, assicurati che i topi siano adeguatamente disinfettati con alcol al 70% prima di iniziare l'intervento chirurgico. Un altro punto importante è quello di non utilizzare lo stesso set di pinzette e forbici per prelevare il tessuto adiposo dell'epididimo, evitando così qualsiasi fonte di contaminazione. 
Una seconda preoccupazione è l'elaborazione dei tessuti. I frammenti nella provetta conica devono essere agitati correttamente e vigorosamente con 10 minuti di incubazione a 37 °C. È molto importante cambiare il mezzo il giorno successivo e poi ogni 2-3 giorni. Si consiglia di osservare la coltura quotidianamente, controllando il colore del mezzo, la forma delle cellule e qualsiasi interferenza nell'ambiente della coltura. 
Una terza preoccupazione riguarda il miglior tempo/passaggio per la caratterizzazione delle MSC. Qui, si consiglia di farlo al terzo passaggio delle celle, ma questo non è obbligatorio. Dipende dall'obiettivo dello studio. Nel terzo passaggio, abbiamo circa l'80% delle cellule caratterizzate come MSC, il che è sufficiente per gli obiettivi di questo studio, ad esempio. La caratterizzazione fenotipica viene eseguita analizzando l'espressione di marcatori ematopoietici (CD34 e CD45, ad esempio) e mesenchimali (CD29, CD73, CD90 e CD105, ad esempio). Inoltre, l'International Society for Cell and Gene Therapy (ISCT)21 evidenzia che le ADSC dovrebbero avere una morfologia simile a quella dei fibroblasti e aderire alla plastica della piattaforma di coltura. La morfologia può essere osservata al microscopio durante la coltura in crescita. La caratterizzazione funzionale viene eseguita analizzando il potenziale delle ADSC di differenziarsi in cellule di osteoblasti, adipoblasti e condroblasti. Nella caratterizzazione fenotipica, la percentuale di marcatori mesenchimali ed ematopoietici può variare a seconda della specie animale e della fonte cellulare, non soddisfacendo pienamente i numeri raccomandati dall'ISCT. Ad esempio, l'ISCT raccomanda per le MSC umane l'≥95% di CD105, CD73, CD90 e il ≤2% di CD45, CD34, CD14 o CD11b, CD79a o CD19, Antigene leucocitario umano - Isotipo DR (HLA-DR)21. Inoltre, è importante fare la caratterizzazione funzionale e confermare la multipotenza delle cellule che si differenziano in osteoblasti, condrociti e linee adipocitarie. Almeno due di questi lignaggi sono raccomandati per dimostrare la multipotenza. 
Oltre a questi punti evidenziati, alcuni saggi qui suggeriti possono essere sostituiti, ad esempio il rosso di alizarina S invece della colorazione di Von Kossa, il candore acido periodico invece del blu di alciano e la reazione a catena della polimerasi (PCR) invece della citometria a flusso. 
Tra i tre tipi di tessuto adiposo descritti nell'uomo (bianco, marrone e beige), il tessuto adiposo bianco ha la più alta fonte di MSC28. Questo tessuto può essere ottenuto dalle regioni sottocutanee, addominali e inguinali, come il grasso sopra l'epididimo qui riportato. La frammentazione fisica e la digestione enzimatica da parte della collagenasi utilizzate nel protocollo qui condiviso derivano dalla frazione vascolare stromale (SVF) composta da molti tipi di cellule, ad eccezione degli adipociti, che vengono esauriti durante il processo. 
In conclusione, i principali vantaggi dell'utilizzo del tessuto adiposo come fonte di MSC includono la loro abbondanza e facilità di metodi per l'isolamento cellulare, associati al potenziale terapeutico delle MSC come proprietà antinfiammatorie e rigenerative.

Le cellule staminali mesenchimali (MSC) sono cellule multipotenziali adulte che si differenziano in cellule come osteoblasti, condroblasti e adipociti 1,2. Queste cellule risiedono in diversi organi e, per questo motivo, possono essere estratte da tessuti adulti come midollo osseo, muscoli, grasso, follicolo pilifero, radice dei denti, placenta, derma, pericondrio, cordone ombelicale, polmone, fegato e milza 3,4.
Gli effetti delle MSC sulla fisiologia e sul sistema immunitario sono stati riportati 5,6. Queste cellule sono state promettenti per il trattamento di diverse malattie, sia in medicina umana che veterinaria. Le MSC possono controllare l'infiammazione e promuovere l'angiogenesi e l'omeostasi tissutale attraverso diversi meccanismi, come il contatto cellula-cellula, i fattori solubili e le piccole vescicole extracellulari 7,8,9,10. Inoltre, le MSC sono cellule immuno-privilegiate in grado di sopravvivere in riceventi di trapianto allogenico immunologicamente incompatibili perché queste cellule mostrano una bassa espressione di molecole del complesso maggiore di istocompatibilità (MHC) di classe I e sono utilizzate nella terapia cellulare per il trapianto allogenico11,12. La bassa immunogenicità combinata con il potenziale rigenerativo rende le MSC candidate ideali per la terapia cellulare, come la malattia del trapianto contro l'ospite (GvHD)13, il lupus eritematoso sistemico (LES)14 e la sclerosi multipla15, tra le altre16,17.
Nonostante il fatto che le MSC risiedano in diversi tessuti adulti, il tessuto adiposo offre vantaggi rispetto ad altre fonti, come l'accessibilità per il prelievo, con un intervento chirurgico minimo; gran numero di celle disponibili con alto tasso di espansione; e facile espansione in vitro utilizzando un protocollo facile da eseguire senza la necessità di apparecchiature specifiche e materiali a basso costo 18,19,20. Una volta estratte, le cellule staminali derivate dal tessuto adiposo (ADSC) devono essere caratterizzate come stabilito dalla Società Internazionale per la Terapia Cellulare (ISCT)21. Pertanto, le MSC devono mostrare una morfologia fibroblastica, aderenza alla coltura plastica, esprimendo un'alta percentuale (≥95%) di marcatori mesenchimali come l'endoglina (CD105), l'ecto-5'-nucleotidasi (CD73) e Thy-1 (CD90) e una bassa percentuale (≤2%) di marcatori ematopoietici come l'antigene comune leucocitario (CD45), la fosfoglioglicoproteina transmembrana (CD34), la glicoproteina di membrana ancorata ai glicolipidi (CD14), l'integrina alfa M (CD11b), la catena alfa associata al complesso del recettore dell'antigene delle cellule B (CD79α) o Antigene di superficie dei linfociti B B4 (CD19) e antigene leucocitario umano di classe II (HLA-II). Inoltre, è necessaria una caratterizzazione funzionale e le cellule dovrebbero essere in grado di differenziarsi in cellule di osteoblasti, condroblasti o adipoblasti21.
Qui, mostriamo come ottenere le MSCs dal tessuto adiposo dell'epididimo utilizzando la dissociazione meccanica e la digestione enzimatica per studi in vitro e la caratterizzazione morfologica preconizzata da ISCT.

<table><tbody><tr><td>140 &deg; C Sterilizzazione ad alta temperatura CO2 Incubatore</td><td>RADOBIO SCIENTIFIC CO. LTD, Cina</td><td>C180</td><td></td></tr><tr><td>3-Isobutil-1-metilxantina</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>I7018</td><td></td></tr><tr><td>Acido acetico glaciale</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>PHR1748</td><td></td></tr><tr><td>Alcian Blue 8GX</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>A9186</td><td>BioReagent, adatto per la rilevazione di glicoproteine. 1% in acido acetico, pH 2,5</td></tr><tr><td>Alcool 70%</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>65350-M</td><td>70% in acqua</td></tr><tr><td>Amfotericina B</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>PHR1662</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpi anti-topo anti-CD29 FITC (Clone Ha2/5)</td><td>BD Biosciences, San Diego, CA, USA</td><td>555005</td><td>Funzioni nella cellula: Adesione e attivazione, embriogenesi, Leucociti, DC, piastrine, mastociti, fibroblasti e cellule endoteliali</td></tr><tr><td>Anticorpi anti-topo anti-CD34 PE (Clone RAM34)</td><td>BD Biosciences, San Diego, CA, USA</td><td>551387</td><td>Funzioni nella cellula: Fattore di adesione cellulare. Cellule staminali ematopoietiche</td></tr><tr><td>Anticorpi anti-topo anti-CD45 APC (Clone 30-F11)</td><td>BD Biosciences, San Diego, CA, USA</td><td>559864</td><td>Funzioni nella cellula: Aiuta nell'attivazione dei leucociti</td></tr><tr><td>Anticorpi anti-topo anti-CD71 FITC (Clone C2)</td><td>BD Biosciences, San Diego, CA, USA</td><td>553266</td><td>Funzioni nella cellula: Controlla l'assorbimento del ferro durante la proliferazione cellulare. Cellule proliferanti, reticolociti e precursori</td></tr><tr><td>Anticorpi anti-topo anti-CD90 PerCP (Clone OX-7)</td><td>BD Biosciences, San Diego, CA, USA</td><td>557266</td><td>Funzioni nella cellula: Segnalazione, adesione. Linfocita T, NK, monocita, HSC, neurone, fibroblasto</td></tr><tr><td>Acido ascorbico</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>PHR1008</td><td></td></tr><tr><td>Pipette automatiche</td><td>Thermo Fisher Scientific, Waltham, Massachusetts, USA</td><td>4700850N</td><td>Finnpipette F1 Good Laboratory Pipetting (GLP) Kit</td></tr><tr><td>Becher</td><td>Non applicabile</td><td></td><td>1 unità</td></tr> di <tr><td>albumina sierica bovina</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>A7906</td><td></td></tr><tr><td>Piastre per colture cellulari (6 pozzetti)</td><td>Merck, Darmstadt, Germania</td><td>Z707759</td><td>07 unità sterili. Piastre per colture tissutali TPP</td></tr><tr><td>Piastre per colture cellulari (96 pozzetti. Merck</td><td>, Darmstadt, Germania</td><td>CLS353077</td><td>01 unità sterile. Wells, 96, superficie trattata con coltura tissutale (TC), pozzetti chiari a fondo tondo,</td></tr><tr><td>terreno condrogenico</td> sterile <td>Derivazione Pro condrogenesi dello stelo... Life Technologies</td><td>A1007101</td><td>TGF-&beta; 2, TGF-&beta; 3, desametasone, insulina, transferrina, ITS, sodio-l-ascorbato, piruvato di sodio, ascorbato-2-fosfato</td></tr><tr><td>Collagenasi tipo II</td><td>Life Technologies, California, USA</td><td>17101015</td><td></td></tr><tr><td>sughero o polistirolo rivestito in alluminio</td><td>Non applicabile</td><td></td><td>1 unità</td></tr><tr><td>di cotone</td><td>Non applicabile</td><td></td><td>50 g</td></tr><tr><td>di desametasone</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>D4902</td><td></td></tr><tr><td>Forbice da dissezione</td><td>Non applicabile</td><td></td><td>03 unità DPX sterile</td></tr><tr><td>Mountant per istologia</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>6522</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco' s Eagle modificato' s medium (DMEM)</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>D5523</td><td>Con 1000 mg/L di glucosio e L-glutammina, senza bicarbonato di sodio, in polvere, adatto per colture cellulari</td></tr><tr><td>Eosina B</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>861006</td><td></td></tr><tr><td>Siero fetale bovino (FBS)</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>F4135</td><td></td></tr><tr><td>Formaldeide</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>47608</td><td></td></tr><tr><td>Formalina</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>HT501128</td><td></td></tr><tr><td>Gentamicina</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>G1397</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxylin</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>H3136</td><td></td></tr><tr><td>Ago ipodermico (0,3 mm x 13 mm)</td><td>Non applicabile</td><td></td><td>5 unità</td></tr><tr><td>Indometacina</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>I0200000</td><td></td></tr><tr><td>Insulina</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>I3536</td><td></td></tr><tr><td>Isopropanolo</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>563935</td><td>70% in soluzione H2O</td></tr><tr><td>Ketamina-D4 cloridrato</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>K-006</td><td>1,0 mg/mL in metanolo (come base libera), materiale di riferimento certificato, Cerilliant&reg;</td></tr><tr><td>Camera Neubauer</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>Camera di conteggio BR718620</td><td>BRAND BLAUBRAND Modello Neubauer. Con clip,</td></tr><tr><td>puntali per pipette Nichiryo a doppia riga (0,1&ndash; 10 &mu; L)</td><td>Merck, Darmstadt, Germania</td><td>Z645540</td><td>Gamma di volume 0,1&ndash; 10 &mu; L, allungato, confezione sfusa. Puntali sterili</td></tr><tr><td>per pipette Nichiryo (1&ndash; 10 mL)</td><td>Merck, Darmstadt, Germania</td><td>Z717401</td><td>Gamma di volume 1&ndash; 10 mL, universale, confezione sfusa. Puntali per</td></tr><tr><td>pipette sterili Nichiryo (200 &mu; L)</td><td>Merck, Darmstadt, Germania</td><td>Z645516</td><td>Volume massimo 200 &mu; L, laureato, ministack. Soluzione sterile</td></tr><tr><td>di olio-rosso O</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>O1391</td><td>0,5% in isopropanolo</td></tr><tr><td>Paraffina</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>107.151</td><td>46&ndash; 48, in blocco</td></tr><tr><td>Penicillina/Streptomicina</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>Soluzione P4333</td><td>stabilizzata, con 10.000 unità di penicillina e 10 mg di streptomicina/mL, 0,1 &mu; m filtrato, BioReagent, adatto per colture cellulari</td></tr><tr><td>Soluzione salina tamponata con fosfato 1x (PBS).</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>P3813</td><td>in polvere, pH 7,4, per la preparazione di soluzioni da 1 L. Provette coniche in polipropilene bilanciate e sterili</td></tr><tr><td>(15 mL)</td><td>Falcon, Fisher Scientific</td><td>14-959-53A</td><td>Provette coniche sterili</td></tr><tr><td>in polipropilene (50 mL)</td><td>Falcon, Fisher Scientific</td><td>14-432-22</td><td>2 unità</td></tr><tr><td>bisturi sterile (opzionale)</td><td>Non applicabile</td><td></td><td>1 unità</td></tr><tr><td>Nitrato d'argento</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>85228</td><td></td></tr><tr><td>Tiosolfato di sodio</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>72049</td><td></td></tr><tr><td>Pinzetta chirurgica (15 cm)</td><td>Non applicabile</td><td></td><td>3 unità</td></tr><tr><td>di topi maschi svizzeri sterili (6&ndash; 8 settimane)</td><td>Bioterium, Santa Cruz State University</td><td>021/22</td><td></td></tr><tr><td>siringa (1 mL)</td><td>Non applicabile</td><td></td><td>1 unità</td></tr><tr><td>Trypan Blue Dye</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>T8154</td><td>0,4%, liquido, filtrato sterile, adatto per colture cellulari</td></tr><tr><td>Tripsina/EDTA (acido etilendiamminotetraacetico)</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>T3924</td><td></td></tr><tr><td>Xilazina</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>PHR3263</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-glicerofosfato sale disodico idrato</td><td>Sigma-Aldrich, San Luis, Missouri, USA</td><td>G9422</td><td>BioUltra, adatto per colture cellulari, &ge; 99% (titolazione)</td></tr></tbody></table>

isolamento, espansione in vitro e caratterizzazione di cellule staminali mesenchimali da tessuto adiposo epididimo di topo

Isolation, In Vitro Expansion, and Characterization of Mesenchymal Stem Cells from Mouse Epididymal Adipose Tissue

Le cellule staminali mesenchimali (MSC) sono state ampiamente studiate come nuovo approccio terapeutico, principalmente per fermare l'infiammazione esacerbata grazie al loro potenziale di modulare la risposta immunitaria. Le MSC sono cellule immuno-privilegiate in grado di sopravvivere in riceventi di trapianto allogenico immunologicamente incompatibili sulla base di una bassa espressione di molecole del complesso maggiore di istocompatibilità (MHC) di classe I e nell'uso della terapia cellulare per il trapianto allogenico. Queste cellule possono essere isolate da diversi tessuti, i più comunemente usati sono il midollo osseo e i tessuti adiposi. Forniamo un protocollo semplice per isolare, coltivare e caratterizzare le MSC dal tessuto adiposo epididimo dei topi. Il tessuto adiposo dell'epididimo viene asportato chirurgicamente, frammentato fisicamente e digerito con una soluzione di collagenasi di tipo II allo 0,15%. Quindi, le cellule staminali primarie derivate dal tessuto adiposo (ADSC) vengono coltivate ed espanse in vitro e la caratterizzazione fenotipica viene eseguita mediante citometria a flusso. Forniamo anche i passaggi per differenziare le ADSC in cellule osteogeniche, adipogeniche e condrogeniche, seguite dalla caratterizzazione funzionale di ciascuna linea cellulare. Il protocollo qui fornito può essere utilizzato per esperimenti in vivo ed ex vivo e, in alternativa, le cellule staminali di derivazione adiposa possono essere utilizzate per generare cellule immortalizzate simili alle MSC.

Le cellule estratte dal tessuto adiposo secondo il protocollo qui presentato hanno mostrato una morfologia che corrisponde ai criteri minimi per le MSC proposti dall'ISCT. Una panoramica del protocollo è mostrata nella Figura 1. Fenotipicamente, le ADSC hanno mostrato aderenza alla morfologia plastica e fibroblastica nei primi giorni di coltura cellulare (Figura 2A). Inoltre, sono cresciuti in modo omogeneo e hanno formato colonie. Inoltre, le ADSC hanno mostrato una bassa espressione di CD34 (2,12%) e CD45 (1,81%), entrambi marcatori ematopoietici, e un'alta espressione di CD71 (42,6%), CD29 (74,2%) e CD90 (55,1%), tutti marcatori di cellule mesenchimali (Figura 2B).
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65722/65722fig02.jpg"> Figura 2: Caratterizzazione fenotipica di cellule derivate dal tessuto adiposo. (A) Morfologia delle ADSC che cambia da rotonda a fibroblastica nei giorni 2, 4 e 8 di coltura; barra della scala = 22,22 μm. (B) Istogrammi per i marcatori espressi (CD71, CD29 e CD90) o meno (CD34 e CD45) da ASC. Questa figura è stata riprodotta con il permesso di Miranda et al.24. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65722/65722fig02large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
Dal punto di vista funzionale, le ADSC hanno mostrato multipotenza nel differenziarsi in osteoblasti, adipoblasti e condroblasti quando coltivate in terreni condizionati per ciascun lignaggio per 14 o 21 giorni (Figura 3). La colorazione di Von Kossa ha rivelato noduli mineralizzati nella matrice extracellulare, caratteristici del processo di osteogenesi (Figura 3). La colorazione Oil-red O ha evidenziato vacuoli lipidici nel citoplasma delle ADSC e la colorazione con Alcian Blue ha confermato la presenza di glicosaminoglicani nella matrice extracellulare (Figura 3). Insieme, le caratteristiche fenotipiche e funzionali hanno confermato la popolazione di cellule estratte dal tessuto adiposo dell'epididimo come MSC.
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65722/65722fig03.jpg"> Figura 3: Caratterizzazione funzionale di cellule derivate dal tessuto adiposo. Potenziale multilineage osteogenico, adipogenico e condrogenico dell'ADSC dopo 14 e 21 giorni in coltura. Barra della scala = 50 μm (pannello superiore), 100 μm (pannello centrale e inferiore). Questa figura è stata riprodotta con il permesso di Miranda et al.24. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65722/65722fig03large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>

Il tessuto adiposo è un'ottima fonte di cellule staminali mesenchimali. Qui, portiamo l'estrazione, la coltivazione e la caratterizzazione passo dopo passo di cellule staminali derivate dal tessuto adiposo (ADSC) da topi svizzeri tessuto adiposo epididimale.

Isolamento, espansione in vitro e caratterizzazione di cellule staminali mesenchimali da tessuto adiposo epididimo di topo

Mesenchymal stem cells (MSCs) have been extensively studied as a new therapeutic approach, mainly to stop exacerbated inflammation due to their potential ...

La mia ricerca si concentra sulle cellule staminali mesenchimali di derivazione adiposa come nuovo approccio al trattamento associato o non associato ad altre terapie per migliorare l'infiammazione di diverse malattie. Abbiamo dimostrato che l'uso di cellule staminali mesenchimali adipose in combinazione con Praziquantel ha controllato significativamente la reazione granulomatosa nell'infezione da Schistosoma mansoni, evidenziando i benefici di questo approccio terapeutico combinato. Il nostro protocollo affronta la lacuna della ricerca nella raccolta meticolosa di tessuto adiposo epididimo in condizioni asettiche, che l'elaborazione fisica comporta un vigoroso agitamento, e identifica il momento ottimale per l'utilizzo di cellule staminali di derivazione adiposa.Il nostro protocollo offre vantaggi significativi, in particolare l'abbondante disponibilità e la potenziale forza per l'isolamento delle cellule staminali mesenchimali. Inoltre, le cellule staminali mesenchimali possiedono potenti proprietà terapeutiche, tra cui capacità antinfiammatorie e di rigenerazione dei tessuti.

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Questo video mostra una tecnica per isolare e coltivare cellule staminali derivate dalla cresta neurale (ADSC) derivate da creste neurali marcate in modo fluorescente da tessuto adiposo dell'arco periaortico murino. Dopo l'isolamento, le NCADSC vengono rilevate, selezionate utilizzando la smistamento cellulare attivata dalla fluorescenza e successivamente coltivate su una piastra, promuovendo la proliferazione cellulare.

Isolamento di cellule staminali di derivazione adiposa da tessuto adiposo periaortico murino

Vi presentiamo un protocollo per isolare frammenti adiposo microvascolari derivate dal tessuto che rappresentano le unità di vascolarizzazione promettenti. Possono essere isolati rapidamente, non richiedono l'elaborazione in vitro e, pertanto, può essere utilizzato per un passo prevascularization in diversi campi dell'ingegneria dei tessuti.

L&#39;isolamento di Murine adiposo derivate dal tessuto microvascolare Frammenti come vascolarizzazione Unità per Tissue Engineering

Questo protocollo fornisce un metodo privo di enzimi per isolare le cellule staminali mesenchymal da campioni di abdominoplastica e lipoaspirati utilizzando un metodo explant. L'assenza di enzimi duri o passaggi di centrifugazione prevede cellule staminali clinicamente rilevanti che possono essere utilizzate per studi in vitro o trasferite di nuovo alla clinica.

Un metodo privo di enzimi per l'isolamento e l'espansione delle cellule staminali mesenchimale derivate dall'Adipo

Questo protocollo descrive l'approccio tecnico per isolare sottopopolazioni di cellule stromali adipogeniche e fibro-infiammatorie da depositi di tessuto adiposo bianco (WAT) murino intra-addominale mediante smistamento cellulare attivato dalla fluorescenza o separazione di microsfere immunomagnetiche.

Isolamento di sottopopolazioni di cellule stromali adipogeniche e fibro-infiammatorie da depositi adiposi intra-addominali murini

Presentiamo un metodo semplice per isolare le cellule progenitrici adipose altamente vitali dalle pastiglie di grasso epididimale del topo utilizzando lo smistamento delle cellule attivato a fluorescenza.

Preparazione di cellule progenitrici adipose dai tessuti adiposi epididimali del topo

Le cellule staminali mesenchimali derivate dal tessuto adiposo (Ad-MSC) possono essere una potenziale fonte di MSC che si differenziano in cellule produttrici di insulina (IPC). In questo protocollo, forniamo passaggi dettagliati per l'isolamento e la caratterizzazione di Ad-MSC epididimali di ratto, seguiti da un protocollo semplice e breve per la generazione di IPC dallo stesso Rat Ad-MSCs.

Isolamento delle cellule staminali mesenchimali del tessuto adiposo di ratto per la differenziazione in cellule produttrici di insulina

Questo protocollo descrive una metodologia per isolare e identificare le cellule staminali mesenchimali (MSC) derivate dal tessuto adiposo da ratti Sprague Dawley.

Isolamento e identificazione di cellule staminali mesenchimali derivate dal tessuto adiposo di ratti Sprague Dawley

Cellule progenitrici endoteliali formanti colonia (ECFCs) sono uno strumento promettente per studiare l'omeostasi vascolare e la riparazione.

Isolamento e di espansione su vasta scala di umano adulto cellule progenitrici endoteliali che formano colonie

Questo protocollo descrive l'isolamento e la successiva espansione delle cellule stromali mesenchimali e le cellule endoteliali che formano colonie senza l'uso di siero animale per generare le coppie a fini di trapianto autologo sperimentali.

Isolamento e di espansione degli animali siero gratuito di cordone ombelicale umano derivato cellule stromali mesenchimali (MSC) e cellule endoteliali progenitrici formanti colonia (ECFCs)

In questo articolo dimostriamo l'isolamento di cellule staminali murine residente polmone mesenchimali (MSC polmone), la loro espansione, caratterizzazione e analisi delle proprietà immunomodulanti.

Isolamento e caratterizzazione di Hoechst Basso CD45 Negativo Mouse cellule staminali mesenchimali del polmone

Scopri l'isolamento e la caratterizzazione di cellule staminali mesenchimali da tessuto adiposo epididimo di topo. Questo metodo offre un protocollo affidabile per applicazioni terapeutiche nel controllo dell'infiammazione.

Isolamento, espansione in vitro e caratterizzazione di cellule staminali mesenchimali da tessuto adiposo epididimo di topo

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