Name: Screening farmacologico di piccole molecole ad alto rendimento per i disturbi del sonno legati alletà utilizzando Drosophila melanogaster (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-10-20T14:15:00.000+00:00
Duration: 5 min 59 s
Description: Scopri lo screening farmacologico ad alto rendimento per studiare i disturbi del sonno legati all'età utilizzando Drosophila melanogaster. Questo metodo automatizzato migliora l'accuratezza delle misurazioni comportamentali.

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Ringraziamo i membri del laboratorio del Prof. Junhai Han per la loro discussione e i loro commenti. Questo lavoro è stato sostenuto dalla National Natural Science Foundation of China 32170970 a Y.T e dal "Cyanine Blue Project" della provincia di Jiangsu a Z.C.Z.

Questo protocollo utilizza le mosche w1118 di 30 giorni del Bloomington Drosophila Stock Center (BDSC_3605, vedi Tabella dei materiali).
1. Preparazione dei moscerini della frutta invecchiati
<ol><li>Preparazione del cibo<ol><li>Preparare il terreno di coltura standard per amido di mais mescolando 50 g/L di cornflakes, 110 g/L di zucchero, 5 g/L di agar e 25 g/L di lievito. Scaldare i cornflakes e il lievito con acqua per gelatinizzare, quindi sciogliere completamente tutte le sostanze.</li>
		<li>Quando il terreno si raffredda a 50-60 °C, aggiungere 6 mL/L di acido propionico e confezionarli prontamente in flaconi di coltura.</li>
	</ol></li>
	<li>Allevamento di mosche e preparazione di mosche invecchiate<ol><li>Allevare il ceppo w1118in bottiglie contenenti un terreno di coltura standard per amido di mais e mettere le bottiglie in un'incubatrice a temperatura costante a 25° C, 68% di umidità relativa, condizioni di illuminazione 500-1000 lux e un ciclo luce:buio di 12 h:12 h.</li>
		<li>Trasferire le mosche in una nuova bottiglia ogni 7 giorni in base al ciclo di crescita delle mosche, mantenendo costante l'età degli individui nella stessa bottiglia.</li>
		<li>Raccogli il nuovo lotto di mosche che si schiudono dalla bottiglia originale 3 giorni dopo averle trasferite e mettile in una nuova bottiglia. Seguendo il principio di cambiare la bottiglia ogni 7 giorni, saranno coltivati fino a circa 30 giorni di età.</li>
	</ol></li>
</ol>2. Preparazione di alimenti medicinali e provette di vetro per il monitoraggio
NOTA: La procedura per la preparazione del tubo di vetro segue il lavoro di Jin et al. con modifiche34.
<ol><li>Pulizia e asciugatura dei tubi di vetro<ol><li>Mettere il tubo di vetro (5 mm di diametro x 65 mm di lunghezza, vedi Tabella dei materiali) in un bicchiere grande, immergerlo e farlo bollire con acqua bidistillata per 20 minuti. Ripeti 3 volte.</li>
		<li>Rimuovere e avvolgere il tubo di vetro, sciacquare l'interno con acqua bidistillata 3-5 volte e metterlo in forno per l'asciugatura.</li>
	</ol></li>
	<li>Preparazione del terreno di coltura semplice (100 mL)<ol><li>Sciogliere 1,5 g di agar e 5 g di saccarosio in acqua bidistillata, scaldare e concentrare a 100 ml.</li>
		<li>Aggiungere 600 μL di acido propionico quando il mezzo si raffredda a circa 70 °C, impedendone la solidificazione utilizzando un bagnomaria a temperatura costante.</li>
		<li>Aggiungere circa 4 mL di terreno semplice e Reserpina (vedere Tabella dei materiali) in un becher piccolo da 10 mL fino a quando il farmaco raggiunge i 20 μM o 50 μM. Aggiungere dimetilsolfossido (DMSO) alla concentrazione dello 0,2% nel gruppo di controllo negativo.</li>
	</ol></li>
	<li>Preparazione delle provette di vetro contenenti il medicinale<ol><li>Per facilitare il flusso del fluido, inserire con cautela un tubo di vetro di lunghezza adeguata in un piccolo becher. Il fluido entrerà naturalmente nel tubo di vetro a causa della pressione atmosferica.</li>
		<li>Estrarre la provetta di vetro quando il terreno di coltura è completamente solidificato e pulire la parete esterna per ottenere una provetta di vetro di monitoraggio con un terreno di coltura contenente farmaci a un'estremità.</li>
		<li>Scaldare la paraffina solida in un becher fino a quando non si scioglie a 70 °C, mettere l'estremità del tubo di vetro vicino al cibo nel liquido di paraffina per circa 5 mm e rimuoverlo rapidamente. Attendere che la paraffina si solidifichi per sigillare l'estremità alimentare del tubo di vetro.</li>
	</ol></li>
</ol>3. Disegno sperimentale e trattamento della mosca
<ol><li>Progettare l'esperimento per il trattamento della mosca seguendo la Tabella 1.</li>
</ol>4. Assemblaggio della Drosophila e monitoraggio del sonno
NOTA: La procedura per l'assemblaggio della Drosophila segue il lavoro di Jin et al.34 con modifiche.
<ol><li>Anestetizzare le mosche con gas CO2 , metterle in provette di vetro sigillate in paraffina (una per provetta) e bloccare l'estremità non alimentare con un batuffolo di cotone assorbente per impedire la fuoriuscita delle mosche e garantire la circolazione dell'aria.</li>
	<li>Caricare i tubi sul monitor a infrarossi per monitorarli.<ol><li>Assemblare i tubi di vetro contenenti le mosche su un monitor a infrarossi nella stessa direzione e registrare il numero del monitor e il numero di foro corrispondenti a ciascun farmaco.</li>
		<li>Regola l'allineamento di ciascun tubo e fai in modo che i raggi infrarossi passino verticalmente attraverso il centro dell'intervallo di attività della mosca.</li>
		<li>Posizionare il monitor all'interno di un'incubatrice a 25 °C situata nella camera oscura del sonno delle mosche, seguendo le impostazioni specificate: temperatura di 25 °C, Zeitgeber 12 (ZT12) (equivalente all'ora locale delle 20:00) e ZT24 (equivalente all'ora locale delle 08:00). Questa configurazione assicura che le mosche sperimentino periodi alternati di 12 ore di luce e buio. NOTA: Cercare di non aprire la porta fino al completamento della raccolta dei dati di monitoraggio per mantenere un ambiente stabile nell'incubatrice durante il monitoraggio.</li>
		<li>Avviare il monitoraggio utilizzando il sistema DAM2 (vedi Tabella dei materiali).</li>
		<li>Una volta completato il monitoraggio, scaricare i dati raccolti in formato .txt dal sistema.</li>
	</ol></li>
</ol>5. Trattamento dei dati
NOTA: L'elaborazione dei dati utilizzando il sistema DAM, DAMFileScan107 e SCAMP è stata eseguita secondo le istruzioni sui loro siti Web ufficiali (vedere la tabella dei materiali).
<ol><li>Importare il file txt di cui sopra nel software DAMFileScan107 per la scansione e dividerlo secondo necessità per ottenere i dati del sonno.<ol><li>Impostare l'ora di inizio dei dati di segmentazione alle 8:01 (segmentazione di 1 minuto) o alle 8:00 (segmentazione di 30 minuti) della terza mattina dopo l'avvio dei monitoraggi e l'ora di terminazione è alle 8:00 di tre giorni dopo l'ora di inizio (Figura 2A1). NOTA: Le mosche devono adattarsi all'ambiente di monitoraggio per almeno un giorno. Quindi, è possibile impostare l'ora di inizio dei dati divisi alle 8 del mattino del terzo giorno dopo l'inizio del monitor.</li>
		<li>Suddividere i dati a intervalli di 1 minuto e 30 minuti. Modificare l'opzione "Lunghezza del contenitore" a 1 minuto, modificare l'opzione "Tipo di file di output" in File canale, rinominare ed emettere. Il metodo di segmentazione dei dati di 30 minuti è lo stesso di cui sopra (Figura 2A2-5). NOTA: Quando si esegue la segmentazione dei dati a intervalli di 1 minuto e 30 minuti, la ridenominazione finale dei due file deve essere coerente; in caso contrario, potrebbe essere illeggibile durante la successiva elaborazione Matlab. Se necessario, il nome del file può essere modificato dopo l'output per facilitare la differenziazione.</li>
	</ol></li>
	<li>Trattamento dei dati mediante SCAMP2020<ol><li>Aprire il pacchetto del programma SCAMP2020 in Matlab e fare doppio clic su Vecsey Sleep and Circadian Analysis MATLAB Program (SCAMP) (Figura 2B).</li>
		<li>Aggiungi la sua sottocartella "Vecsey SCAMP Scripts" al percorso, trova il file "scamp.m" in quella cartella ed eseguilo. Nella seguente finestra pop-up, selezionare le cartelle del processo 1 min e 30 min in sequenza (Figura 2C,D).</li>
		<li>Selezionare un monitor, fare clic su Carica singoli grafici per visualizzare l'anteprima (Figura 3A1) e controllare l'immagine visualizzata. Deselezionare il canale corrispondente delle mosche morte (Figura 3A2, Figura 3B).</li>
		<li>Ripetere i passaggi precedenti per controllare tutti i monitor.</li>
		<li>Rinominare ciascun canale in ciascun monitor in base al farmaco corrispondente da testare (Figura 3A3), selezionare tutti i monitor e fare clic su ANALIZZA dati selezionati per l'analisi (Figura 3A4).</li>
		<li>Per impostazione predefinita, selezionare Analizza per il contenitore scelto, selezionare Esporta dati e infine fare clic su GRAFICO 30 min Tipi di dati per tutti i giorni per gruppi selezionati e ESPORTA tutti i dati per visualizzare i risultati (Figura 3C).</li>
	</ol></li>
	<li>Selezionare il file denominato s30 dal file CSV, trovare il valore medio corrispondente e i dati di errore standard per ciascun monitor, eseguirne il backup in Excel per la modifica e la regolazione e incollarlo in GraphPad Prism (vedere Tabella dei materiali) per disegnare un diagramma dello stato del sonno (Figura 4A,B).</li>
	<li>Trova il file denominato "stdur" e calcola i valori medi del sonno diurno, notturno e totale per ogni mosca nell'arco di tre giorni (Figura 4A,C). Incolla i dati nel software Prism per completare il test delle differenze e disegnare un grafico.</li>
</ol>

Avanzamento dei trattamenti per i disturbi del sonno: un approccio di screening basato sulla drosofila

<ol><li>Le Bon, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationships+between+REM+and+NREM+in+the+NREM-REM+sleep+cycle%3A+a+review+on+competing+concepts%5BTitle%5D)+AND+%22Sleep+Medicine%22%5BJournal%5D)">Relationships between REM and NREM in the NREM-REM sleep cycle: a review on competing concepts.</a> Sleep Medicine. 70, 6-16 (2020).</li>
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<li>Kabra, M., Robie, A. A., Rivera-Alba, M., Branson, S., Branson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((JAABA%3A+interactive+machine+learning+for+automatic+annotation+of+animal+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">JAABA: interactive machine learning for automatic annotation of animal behavior.</a> Nature Methods. 10 (1), 64-67 (2013).</li>
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</ol>

Gli autori dichiarano di non avere interessi contrastanti.

Il metodo descritto è adatto per lo screening rapido di farmaci per il sonno di piccole e medie dimensioni. Attualmente, la maggior parte dei principali metodi di screening dei farmaci ad alto rendimento si basa su livelli biochimici e cellulari. Ad esempio, vengono esaminate la struttura e le proprietà del recettore per cercare ligandi specifici che possano legarsi ad esso22. Un altro approccio prevede l'analisi della modalità di legame e della forza dei frammenti molecolari di farmaci selezionat...

Il sonno, uno dei comportamenti essenziali necessari per la sopravvivenza umana, è caratterizzato da due stati principali: il sonno REM (Rapid Eye Movement) e il sonno NREM (Non-Rapid Eye Movement)1. Il sonno NREM comprende tre fasi: N1 (la transizione tra veglia e sonno), N2 (sonno leggero) e N3 (sonno profondo, sonno a onde lente), che rappresentano la progressione dalla veglia al sonno profondo1. Il sonno svolge un ruolo cruciale sia per la salute fisica che per quella mentale2. Tuttavia, l'invecchiamento riduce la durata totale del sonno, l'efficienza del sonno, la percentuale di sonno a onde lente e la percentuale di sonno REM negli adulti3. Gli individui più anziani tendono a trascorrere più tempo nel sonno leggero rispetto al sonno a onde lente, rendendoli più sensibili ai risvegli notturni. Con l'aumentare del numero di risvegli, il tempo medio di sonno diminuisce, con conseguente frammentazione del sonno negli anziani, che può essere associata a un'eccessiva eccitazione dei neuroni Hcrt nei topi4. Inoltre, il declino dei meccanismi circadiani legato all'età contribuisce a un cambiamento anticipato nella durata del sonno 5,6. In combinazione con la malattia fisica, lo stress psicologico, i fattori ambientali e l'uso di farmaci, questi fattori rendono gli anziani più suscettibili ai disturbi del sonno, come l'insonnia, il disturbo del comportamento del sonno REM, la narcolessia, i movimenti periodici delle gambe, la sindrome delle gambe senza riposo e la respirazione disturbata dal sonno 7,8.
Studi epidemiologici hanno dimostrato che i disturbi del sonno sono strettamente legati alle malattie croniche negli anziani9, tra cui la depressione 10, le malattie cardiovascolari11 e la demenza12. Affrontare i disturbi del sonno svolge un ruolo cruciale nel miglioramento e nel trattamento delle malattie croniche e nel miglioramento della qualità della vita degli anziani. Attualmente, i pazienti si affidano principalmente a farmaci come benzodiazepine, non benzodiazepine e agonisti del recettore della melatonina per migliorare la qualità del sonno13. Tuttavia, le benzodiazepine possono portare a una sottoregolazione dei recettori e alla dipendenza dopo un uso a lungo termine, causando gravi sintomi di astinenza al momento dell'interruzione14,15. Anche i farmaci non benzodiazepinici comportano rischi, tra cui demenza 16, fratture17 e cancro18. L'agonista del recettore della melatonina comunemente usato, il ramelteon, riduce la latenza del sonno ma non aumenta la durata del sonno e presenta problemi legati alla funzione epatica a causa dell'ampia eliminazione di primo passaggio19. L'agomelatina, un agonista del recettore della melatonina e antagonista del recettore della serotonina, migliora l'insonnia correlata alla depressione, ma comporta anche un rischio di danno epatico20. Di conseguenza, c'è un urgente bisogno di farmaci più sicuri per trattare o alleviare i disturbi del sonno. Tuttavia, le attuali strategie di screening dei farmaci, basate su esperimenti molecolari e cellulari combinati con sistemi automatizzati e analisi computerizzate, sono costose e richiedono molto tempo21. Le strategie di progettazione di farmaci basate sulla struttura, che si basano sulla struttura e sulle proprietà dei recettori, richiedono una chiara comprensione della struttura tridimensionale dei recettori e mancano di capacità predittive per gli effetti dei farmaci22.
Nel 2000, sulla base dei criteri del sonno proposti da Campbell e Tobler nel 1984 23, i ricercatori hanno stabilito semplici modelli animali per studiare il sonno 24, tra cui Drosophila melanogaster, che ha mostrato stati simili al sonno25,26. Nonostante le differenze anatomiche tra la Drosophila e gli esseri umani, molti componenti neurochimici e le vie di segnalazione che regolano il sonno nella Drosophila sono conservati nel sonno dei mammiferi, facilitando lo studio delle malattie neurologiche umane27,28. La Drosophila è anche ampiamente utilizzata negli studi sul ritmo circadiano, nonostante le differenze negli oscillatori principali tra mosche e mammiferi 29,30,31. Pertanto, la Drosophila funge da prezioso organismo modello per lo studio del comportamento del sonno e la conduzione di screening farmacologici correlati al sonno.
Questo studio propone un approccio semplice ed economico basato sul fenotipo per lo screening di farmaci a piccole molecole per il trattamento dei disturbi del sonno utilizzando mosche anziane. La regolazione del sonno in Drosophila è altamente conservatae il declino del sonno osservato con l'età può essere reversibile attraverso la somministrazione di farmaci. Pertanto, questo metodo di screening basato sul fenotipo del sonno può riflettere intuitivamente l'efficacia del farmaco. Nutriamo i moscerini con una miscela del farmaco in esame e del cibo, monitoriamo e registriamo il comportamento del sonno utilizzando il Drosophila Activity Monitor (DAM)32 e analizziamo i dati acquisiti utilizzando il pacchetto di dati SCAMP2020 open source in MATLAB (Figura 1). L'analisi statistica viene eseguita utilizzando software di statistica e grafici (vedi Tabella dei Materiali). A titolo di esempio, dimostriamo l'efficacia di questo protocollo presentando dati sperimentali sulla Reserpina, una piccola molecola inibitrice del trasportatore vescicolare delle monoamine che aumenta il sonno33. Questo protocollo fornisce un approccio prezioso per identificare i farmaci per il trattamento dei problemi del sonno legati all'età.

<table><tbody><tr><td>Ager</td><td>BIOFROXX</td><td>8211KG001</td><td></td></tr><tr><td>Scatola per il clima artificiale</td><td>PRANDT</td><td>PRX-1000A</td><td>sito ufficiale:https://www.nbplt17.com/PLTXBS-Products-20643427/</td></tr><tr><td>DAM2 Drosophila Activity Monitor</td><td>TriKineics</td><td>DAM2</td><td>sito ufficiale:https://www.trikinetics.com/</td></tr><tr><td>DAM2system</td><td>Versione TriKineics</td><td>:v3.03</td><td>sito ufficiale:https:// www.trikinetics.com/</td></tr> <tr><td>DAMFileScan</td><td>TriKineics</td><td>versione:1.0.7.0</td><td>sito ufficiale:https://www.trikinetics.com/</td></tr><tr><td>Dimethyl Sulfoxide</td><td>SIGMA</td><td>276855</td><td></td></tr><tr><td>Drosophila Activity Monitoring Incubator Tritech</td><td>Research</td><td>DT2-CIRC-TK</td><td>sito ufficiale:https://www.tritechresearch.com/DT2-CIRC-TK.html</td></tr><tr><td>Drosophila Bottles</td><td>Biologix</td><td>51-17720</td><td>sito ufficiale: http://biologixgroup.com/goods.php?id=48</td></tr><tr><td>Drosophila: w1118</td><td>Bloomington Drosophila Stock Center&nbsp;</td><td></td><td></td>BDSC_3605</tr><tr><td>Excel</td><td>versione Microsoft</td><td>:Sito ufficiale di Excel 2016</td><td>:https://www.microsoftstore.com.cn/software/office/excel</td></tr> Sito <tr>ufficiale dei<td>tubi</td><td>di vetro TriKinetics</td><td>PPT5x65</td><td>:https://www.trikinetics.com/</td></tr><tr><td>MATLABR2022b</td><td>Versione MathWorks</td><td>:9.13.0.2049777</td><td>sito ufficiale:https://ww2.mathworks.cn/products/matlab.html</td></tr><tr><td>Prism</td><td>GraphPad</td><td>Versione:Prism 8.0.1</td><td>sito ufficiale:https://www.graphpad.com/features</td></tr><tr><td>Reserpine</td><td>MACKLIN</td><td>R817202-1g</td><td></td></tr><tr><td>Saccharose</td><td>SIGMA</td><td>1245GR500</td><td></td></tr><tr><td>SCAMP</td><td>Vecsey Lab</td><td>N/A</td><td>sito ufficiale:https://academics.skidmore.edu/blogs/cvecsey/</td></tr></tbody></table>

screening farmacologico di piccole molecole ad alto rendimento per i disturbi del sonno legati all'età utilizzando drosophila melanogaster

High-Throughput Small Molecule Drug Screening For Age-Related Sleep Disorders Using Drosophila melanogaster

Il sonno, una componente essenziale della salute e del benessere generale, presenta spesso sfide per le persone anziane che spesso soffrono di disturbi del sonno caratterizzati da una durata del sonno ridotta e schemi frammentati. Queste interruzioni del sonno sono anche correlate a un aumento del rischio di varie malattie negli anziani, tra cui diabete, malattie cardiovascolari e disturbi psicologici. Sfortunatamente, i farmaci esistenti per i disturbi del sonno sono associati a effetti collaterali significativi come il deterioramento cognitivo e la dipendenza. Di conseguenza, è urgentemente necessario lo sviluppo di nuovi, più sicuri e più efficaci farmaci per i disturbi del sonno. Tuttavia, l'alto costo e la lunga durata sperimentale degli attuali metodi di screening dei farmaci rimangono fattori limitanti.
Questo protocollo descrive un metodo di screening economico e ad alto rendimento che utilizza la Drosophila melanogaster, una specie con un meccanismo di regolazione del sonno altamente conservato rispetto ai mammiferi, rendendola un modello ideale per lo studio dei disturbi del sonno negli anziani. Somministrando vari piccoli composti ai moscerini anziani, possiamo valutare i loro effetti sui disturbi del sonno. I comportamenti del sonno di questi moscerini vengono registrati utilizzando un dispositivo di monitoraggio a infrarossi e analizzati con il pacchetto di dati open source Sleep and Circadian Analysis MATLAB Program 2020 (SCAMP2020). Questo protocollo offre un approccio di screening a basso costo, riproducibile ed efficiente per la regolazione del sonno. I moscerini della frutta, grazie al loro breve ciclo di vita, ai bassi costi di allevamento e alla facilità di manipolazione, sono soggetti eccellenti per questo metodo. A titolo di esempio, la Reserpina, uno dei farmaci testati, ha dimostrato la capacità di favorire la durata del sonno nei moscerini anziani, evidenziando l'efficacia di questo protocollo.

La reserpina è un inibitore a piccola molecola del trasportatore vescicolare delle monoamine (VMAT), che inibisce la ricaptazione delle monoamine nelle vescicole presinaptiche, portando ad un aumento del sonno33. Gli effetti di promozione del sonno della reserpina sono stati esaminati in moscerini di 30 giorni, con il gruppo di controllo alimentato esclusivamente con il solvente dimetilsolfossido (DMSO). Nel gruppo Reserpina, i moscerini più anziani hanno mostrato un aumento significativo del sonn...

Viene presentato un protocollo per lo screening farmacologico ad alto rendimento per migliorare il sonno monitorando il comportamento del sonno dei moscerini della frutta in un modello di Drosophila anziana.

Screening farmacologico di piccole molecole ad alto rendimento per i disturbi del sonno legati all'età utilizzando Drosophila melanogaster

Sleep, an essential component of health and overall well-being, often presents challenges for older individuals who frequently experience sleep disorders ...

Le tecniche di screening dei farmaci includono lo screening ad alto rendimento, che utilizza l'automazione per la scoperta di farmaci, i progetti basati sulla struttura e la ricerca di molecole di legame del recettore in base alla struttura, e un design basato sui frammenti, che utilizza la risonanza magnetica nucleare e la spettrometria di massa per ottimizzare i frammenti molecolari e identificare i composti. Il sistema DAM misura il sonno delle mosche rilevando i mattoni del raggio infrarosso. Tuttavia, questo metodo può sovrastimare il sonno se le mosche rimangono statiche a un'estremità del tubo o se la mosca non è molto mobile.Inoltre, l'ordine di qualsiasi farmaco testato può influire sull'assunzione di frutti di mosca, distorcendo potenzialmente i risultati sperimentali. Pertanto, il nostro esperimento incorporerà vari allungamenti per mitigare questi fattori e migliorare l'accuratezza. Rispetto ai metodi basati sull'analisi video, il nostro metodo offre capacità di throughput elevate, riduce i costi e semplifica il funzionamento.Quindi anche il processo dei dati sperimentali è relativamente semplice, in cui il grafico risultante rappresenta visivamente gli effetti del farmaco.

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Si descrivono le modalità per la registrazione quotidiana ritmi di attività...

Saggio attività locomotoria per studiare ritmi circadiani del sonno e parametri in Drosophila</em

Nanoinjection associato e test Elettrofisiologia allo schermo per la bioattività dei composti con il Drosophila melanogaster Sistema Fiber Giant

Semplici saggi per misurare la sensibilità all'etanolo e la rapida tolleranza in Drosophila facilitano l'uso di questo organismo modello per studiare questi importanti comportamenti correlati all'etanolo. Qui viene descritto un test relativamente semplice e scalabile per misurare la sensibilità all'etanolo e la rapida tolleranza nei moscerini.

Un poco costoso, test comportamentale scalabile per la misurazione etanolo sedazione sensibilità e tolleranza Rapid in<em&gt; Drosophila</em

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Vi presentiamo un protocollo utilizzando un approccio genetico in avanti allo screening per i mutanti che mostrano neurodegenerazione in Drosophila melanogaster. Incorpora un saggio di arrampicata, analisi istologica, mappatura genica e sequenziamento del DNA per identificare in ultima analisi nuovi geni legati al processo di neuroprotezione.

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La drosophila è un modello sperimentale ampiamente utilizzato adatto per lo screening di farmaci con potenziali applicazioni per la terapia del cancro. Qui, descriviamo l'uso di fenotipi di colore degli occhi variati della Drosophila come metodo per lo screening di composti di piccole molecole che promuovono la formazione di eterocromatina.

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Gli attuali metodi per misurare la sensibilità all'alcol nella Drosophila sono progettati per testare gruppi di mosche. Vi presentiamo un semplice, a basso costo, ad alto costo di analisi per valutare la sensibilità di sedazione di alcol in un gran numero di mosche singole. Il metodo non richiede strumenti specializzati e può essere eseguito in qualsiasi laboratorio utilizzando materiali comuni.

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Scopri lo screening farmacologico ad alto rendimento per studiare i disturbi del sonno legati all'età utilizzando Drosophila melanogaster. Questo metodo automatizzato migliora l'accuratezza delle misurazioni comportamentali.

Screening farmacologico di piccole molecole ad alto rendimento per i disturbi del sonno legati alletà utilizzando Drosophila melanogaster (Video) | JoVE Journal

Screening farmacologico di piccole molecole ad alto rendimento per i disturbi del sonno legati all'età utilizzando Drosophila melanogaster

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