Approcci complementari per interrogare il flusso mitofagico nelle cellule β pancreatiche

Questo protocollo delinea due metodi per l'analisi quantitativa della mitofagia nelle cellule β pancreatiche: in primo luogo, una combinazione di coloranti specifici per mitocondri permeabili alle cellule e, in secondo luogo, un reporter mitofagico geneticamente codificato. Queste due tecniche sono complementari e possono essere implementate in base a esigenze specifiche, consentendo flessibilità e precisione nell'affrontare quantitativamente il controllo di qualità mitocondriale.

Il nostro protocollo descrive due metodi complementari per studiare il flusso della mitofagia delle cellule beta alla risoluzione di una singola cellula tramite citometria a flusso. Il protocollo mt-Keima utilizza un reporter genetico della mitofagia, mentre il protocollo MtPhagy combina tre coloranti fluorescenti, il che lo rende facile da estrapolare a cellule difficili da trasfettare in campioni umani. Le valutazioni della mitofagia utilizzando approcci biochimici tradizionali e approcci di imaging richiedono tempo e sono impegnative in termini di tempo.

Pertanto, è importante sviluppare metodi nuovi, robusti ed efficaci per studiare il flusso mitofagico nelle cellule beta. Sia il metodo mt-Keima che il metodo MtPhagy sono valutazioni quantitative efficienti per lo studio del flusso mitofagico nelle cellule beta pancreatiche. Quindi, il laboratorio Soleimanpour si concentra sui diversi meccanismi che guidano l'insufficienza delle cellule beta pancreatiche e il diabete.

E ci concentriamo in particolare sui diversi aspetti del ciclo di vita mitocondriale, inclusa la mitofagia, per capire come i difetti nella funzione mitocondriale guidano lo sviluppo del diabete.