Ottimizzazione del modello murino per parodontite indotta da legatura per la ricerca preclinica

Il nostro laboratorio indaga la malattia parodontale, esaminando come l'infiammazione causi danni gengivali e ossei in diversi gruppi di individui. Miriamo a ostacolare la gengivite e la parodontite puntando a nuovi giocatori e a nuove vie di malattia. Il modello semplificato per parodontite indotta da legatura utilizza un singolo filo doppio annodato tra i denti, utilizzando strumenti stampati in 3D, il letto dentale del topo e il portalegature, che risulta meno complesso rispetto ai modelli tradizionali.

Questo approccio utilizza la tecnica dell'inalazione dell'anestesia, che porta a un recupero più rapido per i topi, meno di 10 minuti, rispetto a quelli dei modelli più tradizionali che utilizzano anestesia iniettabile, dove il tempo di recupero può essere di circa 30 minuti. Per preparare l'insieme del letto dentale del topo, distesi tutte le parti del letto dentale e la colla sulla piattaforma di lavoro. Poi, fissa in posizione i pezzi stabilizzanti la testa usando la colla.

Utilizzando una lama numero tre su un manico di una lama da bisturi 15C, bisellate i bordi affilati della parte esterna del portalegatura bloccano ad un angolo di 45 gradi per ridurre il disagio durante il blocco o lo sblocco. Squadra tutti gli angoli arrotondati interni della serratura del portalegature. Rimuovi il flash dai bordi superiore e inferiore della stampa 3D e smussa questi bordi a 45 gradi.

Rimuovi una fetta di ciascuna punta del portalegatura con un angolo di 45 gradi per prevenire lesioni traumatiche ai tessuti molli. Assicurati che ogni punta sul portalegatura abbia una tacca a V. Se questa tacca a V è visibile, posiziona delicatamente una lama da bisturi 15C alla base della taccetta.

Ora, inclina con attenzione la lama verso la superficie esterna della punta e affina la base della tacca a V sul bordo esterno. Se la tacca a V non è visibile, posiziona una lama da bisturi 15C al centro della punta del portalegatura e, con un solo movimento deliberato, fai un taglio superficiale per creare una tacca a V. Durante l'infilamento della legatura nelle scanalature, assicurati che i due nodi siano centrati e in linea quando visti dalla parte anteriore del portalegatura.

Utilizzando un esploratore dentale, verifica che la legatura rimbalzi in posizione senza scivolare quando viene applicata una leggera forza tra i nodi. Per la posa della legatura, posizionare il topo anestetizzato nel letto dentale del topo con la schiena contro il letto e il naso posizionato in prossimità del cono nasale. Usando elastici, stabilizza la testa del topo e apri la bocca.

Per posizionare una legatura sul lato destro, tieni il portalegatura nella mano destra e l'esploratore nella sinistra. Posiziona delicatamente la punta dell'esploratore sotto il contatto interprossimale del primo e del secondo molare sul lato palatale. Usando la punta da esploratore, prima tocca i denti, poi scivola giù e appoggia la gengiva per evitare di traumatizzare i tessuti molli.

Appoggia la maniglia esploratrice in un'angolazione orizzontale una volta posizionata correttamente. Assicurati di utilizzare correttamente la punta esploratrice per il posizionamento della legatura. Agganciare l'esploratore all'area di contatto prossimale e stabilizzare la testa contro forze reazionarie.

Ritrai la guancia usando il supporto per legatura e posiziona la legatura sopra il contatto interprossimale tra il primo e il secondo molare. Successivamente, ruota il manico del portalegatura fino a 45 gradi e, con una combinazione di dondolo delicato e scivolamento, spingi la legatura attraverso il contatto. Usando pinze a ago fine, chiudi il filo in eccesso attaccato al nodo sul lato destro.

Tira il filo attraverso i denti verso sinistra e fai scivolare le forbici lungo il filo finché non le posizioni a circa 1,5 millimetri dal nodo prima di tagliare. Per l'analisi micro CT, apri il software e clicca su File, poi Importa immagine. Nel menu pop-up, clicca su Sfoglia.

Vai nella cartella contenente i file DICOM per una scansione e seleziona il primo file. Clicca su Esamina per trovare e selezionare qualsiasi altro file all'interno della cartella per lo stesso campione scansionato. Poi, clicca su OK. Quando le immagini iniziano a caricarsi, clicca su Visualizza e Isosurface.

Cambia la soglia dell'immagine a 5.000 e la percentuale del fattore di qualità superficiale al 55. Seleziona le caselle Abilita Fluido Immagine e Clip Surface con il ROI attuale, e clicca su Aggiorna. Per regolare le proprietà del livello, clicca con il tasto destro su Finestra/Livello in basso e poi su Modifica Proprietà Finestra/Livello.

Imposta il valore della densità ossea a 2.000 e mantieni costante per tutte le misurazioni. Per manipolare i piani, usa scorciatoie da tastiera IJK hide and show per i tre diversi piani. Clicca con il tasto destro e sposta il cursore per zoomare avanti e indietro.

Premi Shift e clicca sinistro per panare. Poi, clicca su Slice per spostare e ruotare i piani. Successivamente, clicca sul centro dell'aereo per spostarlo avanti o indietro.

In alternativa, posiziona il cursore al centro del piano desiderato e usa i tasti freccia su e giù per muovere il piano una fetta alla volta. Clicca sul bordo del piano per ruotare attorno a una linea parallela a questo bordo al centro del piano. Clicca sull'angolo di un piano per ruotare attorno al piano.

Successivamente, orientare la fetta Z, visibile in blu nella parte superiore dello schermo, in modo che le superfici di tutti e tre i denti diventino visibili contemporaneamente o il più vicino possibile. Poi, scorri lungo lo stesso piano di taglio Z finché le radici del primo e secondo molare non diventano visibili, assicurandosi che l'anatomia circostante e i canali siano ben definiti. Allinea l'asse x con le radici buccali del primo e del secondo molare attraverso la parte centrale di ciascun canale radicolare.

In alternativa, allinearsi attraverso la radice buccale del primo molare e la radice distobucale del secondo molare. Successivamente, usa l'orientamento della fetta X come riferimento per l'allineamento della fetta Y. Allinea la fetta Y verticalmente parallela attraverso la radice del primo molare nel pannello della fetta X.

Ruota il piano per orientare verticalmente la radice e osserva che le linee blu attraversano il centro della radice. Nel pannello a Y slice, per misurare la distanza dalla giunzione cemento-smalto, o CEJ, alla cresta alveolare, o ABC, posiziona il cursore nel punto più profondo della scanalatura al CEJ e premi 1. Poi, posiziona il cursore nel punto più vicino all'ABC e premi 2.

Una freccia blu indica il primo punto, mentre il secondo è indicato da una freccia verde. Se le frecce che indicano i punti di misura non appaiono immediatamente, passa la freccia sopra le aree desiderate e premi i tasti numerici sulla tastiera. Se il CEJ è difficile da determinare, usa i tasti freccia su e giù per scorrere tra le fette adiacenti e confermarne la posizione.

Quando è difficile determinare il punto più vicino dell'ABC, misura più punti per garantire una misurazione coerente. Nonostante il nostro successo con il nostro articolo sui protocolli, i nuovi ricercatori hanno ancora riscontrato difficoltà nell'assemblaggio e nell'utilizzo degli strumenti stampati in 3D, del letto dentale per topi e del portalegature. Per affrontare questo problema, abbiamo creato un video passo dopo passo che guida i ricercatori attraverso l'assemblaggio e l'utilizzo di questi strumenti stampati in 3D, affinché possano essere utilizzati in laboratorio.

Il nostro team di ricerca ha utilizzato studi clinici e il modello semplificato della parodontite indotta da legatura per scoprire come un gruppo di proteine chiamato inflammasoma possa essere utilizzato per fermare lo sviluppo di infiammazione e parodontite.