Sezionamento automatizzato con vibratomo del tessuto polmonare incorporato nell'agarosio per l'imaging a fluorescenza multiplex
October 6th, 2023
Abbiamo sviluppato una tecnica di processamento tissutale che utilizza un vibratomo e tessuto polmonare incorporato in agarosio per generare sezioni polmonari, consentendo così l'acquisizione di immagini ad alta risoluzione dell'architettura polmonare. Abbiamo utilizzato la colorazione a immunofluorescenza per osservare l'espressione spaziale delle proteine utilizzando specifici marcatori strutturali polmonari.
Questo protocollo è particolarmente utile nei modelli animali di trapianto e rigenerazione polmonare di grandi dimensioni, come i maiali, dove possiamo campionare piccoli pezzi nel tempo. Questa tecnica può aiutarci a comprendere meglio la biologia spaziale in gioco in questi modelli. Questa tecnica produce fette di polmone minimamente processate adatte per l'imaging a immunofluorescenza senza la necessità di recupero dell'antigene ed è stata efficace con tutti gli anticorpi testati fino ad oggi.
Questa procedura può essere adattata per tagliare sezioni leggermente più spesse, diciamo intorno a un millimetro, che possono poi essere utilizzate nella microscopia a fluorescenza a foglio di luce per studiare l'espressione spaziale della proteina in un volume più tridimensionale. La nostra ricerca sta studiando i fattori che influenzano il rigetto del trapianto di polmone e sta sviluppando terapie per ridurre il rigetto utilizzando il nostro modello suino. Questa tecnica aiuta a comprendere i cambiamenti spaziali delle proteine che influenzano gli esiti del trapianto dopo l'intervento chirurgico.
Attualmente stiamo utilizzando questa tecnica per esplorare il panorama spaziale dell'espressione proteica nel nostro modello di trapianto di polmone suino. Speriamo che ci aiuti a comprendere meglio i meccanismi alla base delle nostre terapie sperimentali. La chiave per avere successo qui risiede negli avvistamenti di vibratomi, nelle alte ampiezze delle pale e nelle velocità di forza inferiori sono cose fondamentali da guardare se il sezionamento va male.
Panoramica
Questo studio presenta una nuova tecnica di elaborazione dei tessuti che utilizza un vibratomo e tessuto polmonare incorporato in agarose per generare sezioni polmonari ad alta risoluzione. Il metodo permette la colorazione immunofluorescente per osservare l'espressione spaziale delle proteine nell'architettura polmonare.
Componenti chiave dello studio
Area della scienza
- Neuroscienze
- Biologia
- Trapianto di polmone
Contesto
- Comprendere la biologia spaziale nei modelli polmonari è cruciale per studiare il trapianto di polmone.
- La tecnica produce fette di polmone minimamente elaborate adatte all'imaging.
- È stata efficace con vari anticorpi senza richiedere il recupero dell'antigene.
- Adattabile per sezioni più spesse per tecniche di imaging avanzate.
Obiettivo dello studio
- Indagare i fattori che influenzano il rigetto del trapianto di polmone.
- Sviluppare terapie mirate a ridurre il rigetto nei trapianti di polmone.
- Esplorare l'espressione spaziale delle proteine in un modello di trapianto di polmone di maiale.
Metodi utilizzati
- Incorporazione del tessuto polmonare in agarose per il taglio.
- Utilizzo di un vibratomo per creare sezioni polmonari di spessore specificato.
- Colorazione immunofluorescente per visualizzare l'espressione proteica.
- Analisi comparativa della distribuzione dei pneumociti di tipo due in campioni umani.
Risultati principali
- Generazione di successo di sezioni polmonari ad alta risoluzione.
- Identificazione di cambiamenti proteici spaziali che influenzano gli esiti del trapianto.
- Conteggio più elevato di pneumociti di tipo due e copertura del Scaffold nei campioni infantili rispetto agli adulti.
- Uso efficace della tecnica su diversi campioni di tessuto polmonare.
Conclusioni
- La tecnica del vibratomo migliora la comprensione dell'architettura polmonare.
- Fornisce informazioni sull'espressione spaziale delle proteine rilevante per la biologia del trapianto.
- Questo metodo potrebbe facilitare la ricerca futura nel trapianto e nella rigenerazione polmonare.
