Misurazione delle variazioni dinamiche del pH glisomiale nel Trypanosoma brucei vivente

Il metabolismo del glucosio è fondamentale per il Trypanosoma brucei, ma si sa poco su come le cellule percepiscono e rispondono ai cambiamenti dei livelli di glucosio nell'ambiente. Abbiamo sviluppato un biosensore di pH che ci permette di monitorare il pH glicosomico nei parassiti vivi, che aiuterà a comprendere le risposte dinamiche dei parassiti alle fluttuazioni dei nutrienti. Una sfida per questo esperimento sarebbe la disponibilità di un citometro a flusso dotato di un lettore di piastre per microtitolazione, nonché dei set di filtri appropriati per misurare la fluorescenza del biosensore.

Inoltre, T.brucei è un organismo del gruppo di rischio due, quindi il citometro deve essere alloggiato all'interno di una struttura di livello di biosicurezza due. È stato scoperto che il livello di pH dei glicosomi può influenzare la glicolisi poiché l'esochinasi e la fosfofruttochinasi sono sensibili al pH. Tuttavia, le sonde di pH utilizzate in precedenza non miravano con precisione al glicosoma nella forma del flusso sanguigno.

Era necessario uno strumento migliore per studiare la relazione tra pH glicosomico e glicolisi in questa fase di vita del parassita. Il sensore di pHluorin2-PTS1 è uno strumento che è in grado di localizzare meglio il glicosoma rispetto alle sonde chimiche di pH in questa fase di vita. È facile da usare, in quanto è sufficiente indurre l'espressione del sensore di pH durante la notte e le cellule produrranno e localizzeranno pHluorin2 nel glicosoma.

L'uso della citometria a flusso per misurare la pHluorin2 aumenta la produttività e migliora le misurazioni statistiche rispetto alla microscopia.