Name: Iniezione intrafemorale di cellule staminali e progenitrici ematopoietiche umane in topi immunocompromessi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-12-08T15:00:00.000+00:00
Duration: 3 min 40 s
Description: Scopri l'iniezione intrafemorale di cellule staminali ematopoietiche umane in topi immunocompromessi per migliorare l'innesto cellulare. Questo metodo fornisce una prospettiva quantitativa sull'evoluzione delle cellule staminali nel tempo.

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<meta charset="utf8"></head><body>Iniezione di HSPC umane nel femore di topi irradiati in modo subletale

<ol><li>Dancey, J. T., Deubelbeiss, K. A., Harker, L. A., Finch, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+kinetics+in+man%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Neutrophil kinetics in man.</a> J Clin Invest. 58 (3), 705-715 (1976).</li>
<li>Purton, L. E., Scadden, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limiting+factors+in+murine+hematopoietic+stem+cell+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Limiting factors in murine hematopoietic stem cell assays.</a> Cell Stem Cell. 1 (3), 263-270 (2007).</li>
<li>Laurenti, E., Göttgens, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+haematopoietic+stem+cells+to+complex+differentiation+landscapes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">From haematopoietic stem cells to complex differentiation landscapes.</a> Nature. 553 (7689), 418-426 (2018).</li>
<li>Cosgrove, J., Hustin, L. S. P., de Boer, R. J., Perié, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hematopoiesis+in+numbers%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Immunol%22%5BJournal%5D)">Hematopoiesis in numbers.</a> Trends Immunol. 42 (12), 1100-1112 (2021).</li>
<li>Mazurier, F., Doedens, M., Gan, O. I., Dick, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+myeloerythroid+repopulation+after+intrafemoral+transplantation+of+NOD-SCID+mice+reveals+a+new+class+of+human+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Rapid myeloerythroid repopulation after intrafemoral transplantation of NOD-SCID mice reveals a new class of human stem cells.</a> Nat Med. 9 (7), 959-963 (2003).</li>
<li>McKenzie, J. L., Gan, O. I., Doedens, M., Dick, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+short-term+repopulating+stem+cells+are+efficiently+detected+following+intrafemoral+transplantation+into+NOD%2FSCID+recipients+depleted+of+CD122%2B+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Human short-term repopulating stem cells are efficiently detected following intrafemoral transplantation into NOD/SCID recipients depleted of CD122+ cells.</a> Blood. 106 (4), 1259-1261 (2005).</li>
<li>Notta, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+single+human+hematopoietic+stem+cells+capable+of+long-term+multilineage+engraftment%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Isolation of single human hematopoietic stem cells capable of long-term multilineage engraftment.</a> Science. 333 (6039), 218-221 (2011).</li>
<li>Belluschi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelo-lymphoid+lineage+restriction+occurs+in+the+human+haematopoietic+stem+cell+compartment+before+lymphoid-primed+multipotent+progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Myelo-lymphoid lineage restriction occurs in the human haematopoietic stem cell compartment before lymphoid-primed multipotent progenitors.</a> Nat Commun. 9 (1), 4100(2018).</li>
<li>McDermott, S. P., Eppert, K., Lechman, E. R., Doedens, M., Dick, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+human+cord+blood+engraftment+between+immunocompromised+mouse+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Comparison of human cord blood engraftment between immunocompromised mouse strains.</a> Blood. 116 (2), 193-200 (2010).</li>
<li>Billerbeck, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+human+CD4%2BFoxP3%2B+regulatory+T+cells+in+human+stem+cell+factor-%2C+granulocyte-macrophage+colony-stimulating+factor-%2C+and+interleukin-3-expressing+NOD-SCID+IL2R%CE%B3%28null%29+humanized+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Development of human CD4+FoxP3+ regulatory T cells in human stem cell factor-, granulocyte-macrophage colony-stimulating factor-, and interleukin-3-expressing NOD-SCID IL2Rγ(null) humanized mice.</a> Blood. 117 (11), 3076-3086 (2011).</li>
<li>Rongvaux, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+function+of+human+innate+immune+cells+in+a+humanized+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Development and function of human innate immune cells in a humanized mouse model.</a> Nat Biotechnol. 32 (4), 364-372 (2014).</li>
<li>McIntosh, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonirradiated+NOD%2CB6.SCID+Il2r%CE%B3%E2%88%92%2F%E2%88%92+KitW41%2FW41+%28NBSGW%29+Mice+support+multilineage+engraftment+of+human+hematopoietic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Nonirradiated NOD,B6.SCID Il2rγ−/− KitW41/W41 (NBSGW) Mice support multilineage engraftment of human hematopoietic cells.</a> Stem Cell Reports. 4 (2), 171-180 (2015).</li>
<li>Notta, F., Doulatov, S., Dick, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engraftment+of+human+hematopoietic+stem+cells+is+more+efficient+in+female+NOD%2FSCID%2FIL-2Rgc-null+recipients%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Engraftment of human hematopoietic stem cells is more efficient in female NOD/SCID/IL-2Rgc-null recipients.</a> Blood. 115 (18), 3704-3707 (2010).</li>
<li>Futrega, K., Lott, W. B., Doran, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+bone+marrow+HSC+transplantation+enhances+local+engraftment+at+the+expense+of+systemic+engraftment+in+NSG+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Direct bone marrow HSC transplantation enhances local engraftment at the expense of systemic engraftment in NSG mice.</a> Sci Rep. 6, 23886(2016).</li>
<li>Mende, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unique+molecular+and+functional+features+of+extramedullary+hematopoietic+stem+and+progenitor+cell+reservoirs+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Unique molecular and functional features of extramedullary hematopoietic stem and progenitor cell reservoirs in humans.</a> Blood. 139 (23), 3387-3401 (2022).</li>
<li>Medyouf, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelodysplastic+cells+in+patients+reprogram+mesenchymal+stromal+cells+to+establish+a+transplantable+stem+cell+niche+disease+unit%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Myelodysplastic cells in patients reprogram mesenchymal stromal cells to establish a transplantable stem cell niche disease unit.</a> Cell Stem Cell. 14 (6), 824-837 (2014).</li>
<li>Eppert, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cell+gene+expression+programs+influence+clinical+outcome+in+human+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Stem cell gene expression programs influence clinical outcome in human leukemia.</a> Nat Med. 17 (9), 1086-1093 (2011).</li>
<li>Sanchez, P. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+robust+xenotransplantation+model+for+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">A robust xenotransplantation model for acute myeloid leukemia.</a> Leukemia. 23 (11), 2109-2117 (2009).</li>
<li>Li, J., Chen, H., Zhao, S., Wen, D., Bi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+intrafemoral+orthotopic+xenografts+of+peripheral+blood+or+bone+marrow+from+acute+myeloid+and+acute+lymphoblastic+leukemia+patients%3A+clinical+characterization%2C+methodology%2C+and+validation%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Patient-derived intrafemoral orthotopic xenografts of peripheral blood or bone marrow from acute myeloid and acute lymphoblastic leukemia patients: clinical characterization, methodology, and validation.</a> Clin Exp Med. 23 (4), 1293-1306 (2023).</li>
<li>Dobson, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relapse-fated+latent+diagnosis+subclones+in+acute+B+lineage+leukemia+are+drug+tolerant+and+possess+distinct+metabolic+programs%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discov%22%5BJournal%5D)">Relapse-fated latent diagnosis subclones in acute B lineage leukemia are drug tolerant and possess distinct metabolic programs.</a> Cancer Discov. 10 (4), 568-587 (2020).</li>
<li>Marktel, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrabone+hematopoietic+stem+cell+gene+therapy+for+adult+and+pediatric+patients+affected+by+transfusion-dependent+%C3%9F-thalassemia%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Intrabone hematopoietic stem cell gene therapy for adult and pediatric patients affected by transfusion-dependent ß-thalassemia.</a> Nat Med. 25 (2), 234-241 (2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Siringa da insulina da 0,5 ml con ago da 29 g x 12,7 mm</td><td>BD</td><td>324892</td><td></td></tr><tr><td>Siringa da insulina da 1 ml con ago da 29 G x 0,5"</td><td>BD</td><td>324827</td><td></td></tr><tr><td>tubo da 1,5 mL</td><td>Fisherbrand</td><td>509-GRD-PFB</td><td></td></tr><tr><td>siringa da 3 ml&nbsp;</td><td>HENKE SASS WOLF GMBH</td><td>4020.000V0</td><td></td></tr><tr><td>Provetta in polistirene a fondo tondo da 5 mL con tappo per filtro cellulare 12 x 75 mm</td> Provetta <td>Falcon</td><td>352235</td><td>FACS</td></tr><tr><td>Provetta in polistirene a fondo tondo da 5 mL con tappo a scatto 12 x 75 mm</td><td>Falcon</td><td>352058</td><td>FACS</td></tr><tr><td>tubo 27 G 1/2" ago&nbsp;</td><td>BD&nbsp;</td><td></td><td></td>300635</tr><tr><td>40 &micro; filtro cellulare m per provetta da 50 mL</td><td>Greiner Bio-one</td><td>542040</td><td></td></tr><tr><td>provetta da 50 mL</td><td>Sarstedt Ltd</td><td>62.547.254</td><td></td></tr><tr><td>piastra a fondo tondo a 96 pozzetti&nbsp;</td><td>Tampone</td><td></td> imbevuto di alcol Falcon 351177 <td></td></tr><tr><td></td><td>VITREX MEDICAL A/S</td><td></td><td></td></tr> 520213 <tr><td>BD LSR Fortessa X-20 Cell Analyzer&nbsp;</td><td></td><td>Citometro a</td><td>flusso</td>BD</tr><tr><td>Buphrenorphine</td><td>Animalcare</td><td>XVD190</td><td></td></tr><tr><td>CD14/PECy7 (clone M5E2)</td><td>biolegend</td><td>301814</td><td>utilizzato a 1 su 1000</td></tr><tr><td>CD19/Alexa 700 (clone HIB19)</td><td>biolegend</td><td>302226</td><td>utilizzato a 1 su 300</td></tr><tr><td>CD19/FITC (clone HIB19)</td><td>biolegend</td><td>302206</td><td>utilizzato a 1 su 200</td></tr><tr><td>CD3/APCCy7&nbsp;( Clone HIT3a)</td><td>biolegend</td><td>300318</td><td>Utilizzato a 1 su 100</td></tr><tr><td>CD33/APC (clone P67.6)</td><td>BD</td><td>345800</td><td>Utilizzato a 1 su 200</td></tr><tr><td>CD45/BV510 (clone HI30)</td><td>biolegend</td><td>304036</td><td>Utilizzato a 1 su 500</td></tr><tr><td>CD45/PECy5 (clone 2D1)</td><td>biolegend</td><td>368526</td><td>utilizzato a 1 su 300</td></tr><tr><td>CompBeads Anti-mouse Ig, &kappa;/negative Control Compensation Particles Set</td><td>BD</td><td></td><td></td>552843</tr><tr><td>Dnase 1</td><td>Worthington Biochemical</td><td>LS002139</td><td></td></tr><tr><td>Siero fetale bovino (FBS)</td><td>PAN-Biotech</td><td>P40-37500</td><td></td></tr><tr><td>Glicoforina A (GlyA)/PE (Clone GA-R2)</td><td>BD</td><td></td><td>340947 Utilizzato a 1 su 1000</td></tr><tr><td>Iscove Modified Dulbecco Media (IMDM)</td><td>PAN-Biotech</td><td>P04-20250</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano (IsoFlo 100% con vapore per inalazione, liquido)</td><td>Zoetis</td><td>115095</td><td></td></tr><tr><td>Microvette 300 Litio eparina LH, 300 &micro; L</td><td>Sarstedt Ltd</td><td>20.1309</td><td>Provetta per prelievo di sangue di topo</td></tr><tr><td>NOD. Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) topi&nbsp;</td><td>Charles River&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pancoll umano, Densità: 1,077 g/mL</td><td>PAN-Biotech</td><td>P04-60500</td><td></td></tr><tr><td>Penicillina-Streptomicina&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>soluzione salina tamponata con fosfato (PBS)</td><td>Gibco</td><td>14190169</td><td></td></tr></tbody></table>

iniezione intrafemorale di cellule staminali e progenitrici ematopoietiche umane in topi immunocompromessi 

Intrafemoral Injection of Human Hematopoietic Stem and Progenitor Cells into Immunocompromised Mice

L'attecchimento delle cellule iniettate per via intrafemorale può essere valutato in qualsiasi momento a partire da 24 ore a seconda del disegno sperimentale. Al momento finale, possono essere raccolti IF, BM, PB e milza. Questi possono essere elaborati e il livello di attecchimento valutato tramite citometria a flusso. Per definire in modo robusto l'attecchimento umano anche a bassi livelli, abbiamo colorato con due anticorpi distinti contro il CD45 umano (clone HI30 e clone 2D1). Solo le cellule positive per entrambi g...

Iniezione intrafemorale di cellule staminali e progenitrici ematopoietiche umane in topi immunocompromessi 

Hematopoietic stem cells (HSCs) are defined by their lifelong ability to produce all blood cell types. This is operationally tested by transplanting cell ...

intrafemoral-injection-human-hematopoietic-stem-progenitor-cells-into

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Questa dettagli del protocollo la derivazione di cellule staminali ematopoietiche trapiantabili da topo cellule staminali embrionali (ESC) e la loro successiva iniezione in topi irradiati letalmente destinatario. In breve, ESC si differenziano come corpi embrionali, che sono poi infettati con HoxB4 retrovirali e co-coltura con cellule stromali OP9 e citochine ematopoietiche.

Derivazione di cellule staminali ematopoietiche da cellule staminali embrionali murini

Questo video dimostra una tecnica per generare topi del sistema immunitario umano (HIS). Le cellule staminali ematopoietiche (HSC) CD34+ sono isolate dalle cellule del buffy coat del sangue del cordone ombelicale umano utilizzando perle magnetiche rivestite di anticorpi. Le HSC CD34+ vengono espanse in un terreno di crescita arricchito con citochine e crioconservate. Infine, le HSC scongelate vengono iniettate in un cucciolo di topo immunodeficiente per stabilire il modello murino HIS.

Isolamento delle cellule staminali ematopoietiche del sangue del cordone ombelicale per generare topi del sistema immunitario umano

Questo protocollo descrive una procedura per il campionamento seriale del midollo osseo femorale (BM) senza richiedere il sacrificio di topi. Questa procedura facilita gli studi longitudinali della composizione del midollo osseo dei topi nel tempo e fornisce un accesso seriale alle cellule all'interno del midollo osseo per studi ex vivo e di trapianto.

Femorale aspirazione del midollo osseo in Live Mice

Combinatorie 5 proteine ​​fluorescenti marcatura di cellule staminali e progenitrici ematopoietiche consente il monitoraggio in vivo clonale tramite confocale e microscopia a due fotoni, fornendo approfondimenti midollo osseo emopoietico architettura durante la rigenerazione. Questo metodo permette di mappatura destino non invasiva di cellule HSPCs derivate spettralmente-codificati nei tessuti intatti per lunghi periodi di tempo dopo il trapianto.

In vivo clonale Monitoraggio di staminali ematopoietiche e cellule progenitrici Contrassegnato da cinque proteine ​​fluorescenti che utilizzano confocale e microscopia Multiphoton

La natura delle interazioni tra staminali e progenitrici di cellule ematopoietiche (HSPCs) e nicchie di midollo osseo è poco conosciuta. Modifiche hardware personalizzato e un protocollo di acquisizione multi-step consentono l'utilizzo di due fotoni e microscopia confocale per immagine ex vivo HSPCs etichettati homed all'interno delle aree del midollo osseo, interazioni monitoraggio e movimento.

In Vivo inseguimento 4-dimensionale di emopoietiche staminali e progenitrici celle di topo adulto cranica di Midollo Osseo

Microscopia di fluorescenza intravital (IVFM) del calvarium è applicata in combinazione con i modelli genetici animali per studiare l'homing e l'attecchimento di cellule ematopoietiche in nicchie del midollo osseo (BM).

La combinazione di microscopia di fluorescenza Intravital (IVFM) con modelli genetici per studiare la dinamica di attecchimento delle cellule ematopoietiche per nicchie di midollo osseo

Descriviamo una cellula mononucleare del sangue periferico umano (PBMC), basato sul modello murino xenotrapianto umanizzato per la ricerca sull'immuno-oncologia traslazionale. Questo protocollo potrebbe servire come linea guida generale per stabilire e caratterizzare modelli simili per la valutazione della terapia I-O.

Un ormone e mezzo umano (PBMC) Un modello di Xenotrapianto umanizzato per la ricerca sull'immuno-oncologia traslazionale (I-O)

Qui sono descritti tre approcci sperimentali per studiare la dinamica dell'infezione da HIV nei topi umanizzati. Il primo consente lo studio di eventi di infezione cronica, mentre i due ultimi consentono lo studio di eventi acuti dopo l'infezione primaria o la riattivazione virale.

Infezione da HIV cronica, acuta e riattivata in modelli di topo immunodeficienti umanizzati

Questo protocollo descrive l'iniezione intrafemorale di alcune cellule staminali ematopoietiche o leucemiche, comprese le cellule geneticamente modificate, in modelli murini di xenotrapianto, che consentiranno non solo il trapianto rapido e sicuro di cellule, ma anche analisi seriali del midollo osseo.

Le iniezioni intrafemorali semplificate con topi vivi consentono un'analisi continua del midollo osseo

Qui, abbiamo stabilito osteo-organoidi in vivo innescati da scaffold di gelatina caricati con proteina morfogenetica ossea 2 per raccogliere cellule staminali/progenitrici ematopoietiche terapeutiche per la ricostruzione di un sistema ematopoietico e immunitario danneggiato. Nel complesso, questo approccio può fornire una promettente fonte cellulare per le terapie cellulari.

Approccio osteo-organoide in vivo per la raccolta di cellule staminali/progenitrici ematopoietiche terapeutiche

Scopri l'iniezione intrafemorale di cellule staminali ematopoietiche umane in topi immunocompromessi per migliorare l'innesto cellulare. Questo metodo fornisce una prospettiva quantitativa sull'evoluzione delle cellule staminali nel tempo.

Iniezione intrafemorale di cellule staminali e progenitrici ematopoietiche umane in topi immunocompromessi

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