Name: Fabbricazione dei canali termoplastico Microfluidic (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-02-03T23:56:00.000+00:00
Duration: 16 min
Description: Impara la fabbricazione di dispositivi microfluidici termoplastici mediante micro hot embossing e thermal bonding. Questo metodo consente l'isolamento degli acidi nucleici per applicazioni diagnostiche e PCR.

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I canali microfluidica sono fabbricati in poliolefine ciclico (Zeonex ® 690R, Zeon Chemical Inc., Louisville, KY). Zeonex ha una temperatura di transizione vetrosa (Tg) di 136 ° C ed è trasparente ai raggi UV, che è essenziale per la chimica luce diretta utilizzato nella formazione porosa monolite. I microcanali sono realizzati da micro-hot-embossing con Nico elettroformati master-stampo, che è il negativo (inverso) caratteristiche della piattaforma microfluidica. Il caldo, goffratura è fatto come segue: <ol><li> Lo stampo e il substrato polimerico sono posti tra due piastre metalliche parallele. </li><li> Le piastre vengono riscaldate fino alla temperatura di rilievo (166 ° C), che è di 30 º C al di sopra della T g di Zeonex. </li><li> Le piastre vengono premuti insieme per circa 5 min e la pressione è mantenuta a 250 psi. </li><li> Lo stampo e il substrato vengono poi rimossi dai piani riscaldati, lasciato raffreddare per 1-2 minuti, e poi manualmente separati l&#39;uno dall&#39;altro. </li><li> Pozzi di 1,5 mm di diametro sono forati alle estremità dei canali per l&#39;introduzione del campione e la raccolta. </li><li> Il substrato di plastica in rilievo è poi termosaldata con un altro pezzo di Zeonex al modulo allegato canali microfluidica. Il substrato in rilievo e il pezzo di copertura può essere UV-ozono o plasma trattati prima dell&#39;incollaggio termico per migliorare l&#39;efficienza di tenuta e garantire la fedeltà della struttura del canale chiuso (Bhattacharyya e Klapperich, 2007). </li></ol> Fabbricazione di estrazione in fase solida (SPE) colonna all&#39;interno dei canali di plastica microfluidica Realizzazione della fase solida è un processo in due fasi. In un primo momento, i microcanali fabbricato sono superficie modificata in modo da migliorare l&#39;adesione della colonna SPE al dispositivo in plastica. L&#39;innesto tramite fotopolimerizzazione superficie viene utilizzato per funzionalizzare le pareti della microcanali polimerici. La procedura di innesto è la seguente: <ol><li> I microcanali sono riempite con una miscela 1:1 di diacrilato etilene (EDA) e metil metacrilato (MMA) con 3% benzofenone, che è un fotoiniziatore idrogeno astrazione. L&#39;, EDA MMA e benzofenone sono acquistati da Sigma-Aldrich, St. Louis, MO. </li><li> Il chip viene poi UV irradiata per 10 minuti a 254 nm di lunghezza d&#39;onda UV e 200 mJ / cm 2 di energia in uno strumento esposizione ai raggi ultravioletti (CL-1000 Crosslinker UV, UPV Inc., Ontario, CA). L&#39;innesto avviene attraverso H-astrazione polimerizzazione e dei risultati in superficie legato catene di polimeri, che vengono inseriti all&#39;interno di polimerizzazione la miscela utilizzata per la preparazione del monolite nel secondo passaggio. </li><li> Il monomero in eccesso viene rimosso dai canali di risciacquo con 15 ml di metanolo con l&#39;aspirazione a vuoto. </li></ol> Dopo il processo di photografting, un polimero microporoso monolite è costituito all&#39;interno della microcanali che intrappolano le particelle di silice per l&#39;estrazione del DNA. Il monolite poroso viene preparato in situ come segue: <ol><li> I canali superficie modificata sono riempite con una miscela precursore monolite composto da Buma (15% in peso), EDMA (10% in peso), 1-dodecanolo (52,5% in peso), cicloesanolo (22,5% in peso), DMPAP (peso 1% rispetto di monomeri) e 0,7 micron particelle di silice (15% rispetto al volume totale del pre-polimero misto). Le microsfere di silice sono stati acquistati da Polysciences, Inc. (Warrington, PA) ed i monomeri e solventi porogenic sono acquistati da Sigma-Aldrich, St. Louis, MO. </li><li> Il chip viene irradiato con raggi UV nel reticolante UV a 200 mJ / cm 2 per 1.1 minuti per iniziare la polimerizzazione, e il monomero in eccesso viene rimosso dai canali di risciacquo con 15 ml di metanolo con l&#39;aspirazione a vuoto. </li><li> I collegamenti fluidica (NanoPorts connessioni TM, Upchurch scientifico, Oak Harbor, WA) sono poi attaccati l&#39;introduzione e pozzetti di raccolta dei canali microfluidica. </li><li> Il monolite poroso viene poi lavato di nuovo con il metanolo per almeno 30 minuti utilizzando la pompa a siringa con un flusso di 100mL/hour. </li></ol> Fabbricazione di CNT lisi monolite all&#39;interno dei canali di plastica microfluidica Realizzazione della (nanotubi di carbonio) lisi monolite CNT è un processo in due fasi. In primo luogo, i microcanali fabbricato sono superficie modificata (innestata) nello stesso modo come per le colonne SPE nel dispositivo di plastica. Dopo il processo di photografting, un monolite microporoso polimero si forma all&#39;interno del microcanali che è impregnato di multi-parete nanotubi di carbonio. Il monolite poroso viene preparato in situ come segue: <ol><li> Multi-nanotubi a parete sono risospesi in cicloesanolo ad una concentrazione di 2.27M. Questo risospensione è ultrasonicated per 30 minuti al 50% di ampiezza e duty cycle del 50% con una cella sonifier distruttore (Sonifier S-250D, prodotto da ultrasuoni Branson, Danbury, CT). La sonicazione fornito una sospensione efficace e stabile 0.5M di CNT. I nanotubi di carbonio sono stati acquistati da Nanolabs (Brighton, MA). </li><li> I canali superficie modificata sono riempiti con una miscela simile precursore monolite solo che adesso la soluzione di cicloesanolo + CNT viene utilizzato. La miscela monolite è costituito da Buma (15% in peso), EDMA (10% in peso), 1-dodecanolo (52,5% in peso), e cicloesanolo + nanotubi di carbonio (22,5% in peso). Per questa soluzione il DMPAP fotoiniziatore viene aggiunto (1,13% in peso rispetto ai monomeri). I monomeri, solventi e porogenic DMPAPA sono acquistati da Sigma-Aldrich, St. Louis, MO. </li><li> Il chip viene irradiato con raggi UV nel reticolante UV a 120 mJ / cm 2 per 0,9 minuti per iniziare la polimerizzazione. Il dispositivo viene capovolto di 180 gradi in crossliker e irradiati per un altro min 0,9 a 120 mJ / cm 2. Il monomero in eccesso viene rimosso dai canali di risciacquo con 50 ml di metanolo con l&#39;aspirazione a vuoto. </li><li> I collegamenti fluidica (NanoPorts connessioni TM, Upchurch scientifico, Oak Harbor, WA) sono poi attaccati l&#39;introduzione e pozzetti di raccolta dei canali microfluidica. </li></ol> Preparazione del campione batterico per l&#39;uso con CNT lisi monolito La preparazione del campione per un campione batterica consiste nel prelievo di una misurazione della densità ottica a 600nm per garantire che il campione non è estremamente concentrata in modo da evitare di intasare il canale. <ol><li> Prendete una lettura OD a 600nm con i batteri in media, questo è fatto con un BioPhotometer (Eppendorf BioPhotometer, Eppendorf Scientific, Inc., Westbury, NY). Diluire il campione fino a quando le letture OD rientrano nell&#39;intervallo 0,18-0,25 A. </li><li> Centrifugare il campione a 6.500 giri per 5 minuti e decantare il surnatante. </li></ol> Lisi <ol><li> Batteri risospendere in GuSCN * + 0,01% SDS + 4% proteinasi K (0.8mg/ml). Vortex brevemente (1 ml di batteri in media dovrebbero essere risospeso in 1ml GuSCN). Proteinasi K è stato aggiunto alla soluzione di un aiuto con denaturazione delle proteine ​​che sono attaccati al DNA batterico e di inibire DNAases e RNAases. Un ulteriore vantaggio della proteinasi K è che si aiuta anche con la rottura verso il basso le proteine ​​della parete cellulare, che è auspicabile in quanto entrambi i batteri gram-positivi e gram-negativi pareti cellulari dei batteri contengono grandi quantità di proteine ​​(anche se i batteri gram-negativi hanno in genere più proteine ). Il buffer caotropico aiuti ulteriormente la proteinasi K con denaturazione delle proteine, mentre il detergente rompe la parete cellulare. Proteinasi K e tiocianato guanidinio (GuSCN) sono stati acquistati da Qiagen Inc. (Valencia, CA). SDS (Dodecyl solfato di sodio) è stato acquistato da Pierce (Rockford, IL). </li><li> Immediatamente carico il campione in una siringa collegata al tubo di PEEK. Aspirare la siringa in modo che l&#39;aria non è nel sistema. Collegare il tubo alla nanoport e canale. </li></ol> Una pompa a siringa KDS100 (prodotto da KD scientifico, Holliston, MA) è stato utilizzato per gli esperimenti e la portata utilizzata è di 450 microlitri / ora per tutti i passaggi. Flusso del canale lisi campione a 450ul/hr. <ol><li> Raccogliere il campione e procedere con l&#39;estrazione del DNA tramite SPE (vedi protocollo di estrazione del DNA). Nota: questo esempio batteri non avrà bisogno di seguire passo carico 2, dal momento che la sospensione è GuSCN *. </li></ol> Protocollo di estrazione del DNA La procedura di estrazione è costituito da 3 fasi: <ol><li> Carico. </li><li> Washington </li><li> Eluire. </li></ol> Pompa a siringa KDS100 (prodotto da KD scientifico, Holliston, MA) è stato utilizzato per gli esperimenti e la portata è stato utilizzato 300 ml / h per tutti i passaggi. Carico <ol><li> Condizione il canale con il tampone caotropico (GuSCN *, guanidinio tiocianato) per 1-2 minuti prima di iniziare l&#39;esperimento. </li><li> Mescolare il campione con il tampone caotropico in rapporto 1:1. </li><li> Flusso di miscela campione attraverso il canale per 3 min. </li></ol> Lavare <ol><li> Lavare il canale con etanolo al 70% per 2 minuti. </li><li> Lavare il canale con il 100% di etanolo per 2 min. </li></ol> Eluire <ol><li> Eluire il DNA estratto in acqua Millipore per 3 min. Raccogliere 15 ml di purificato, PCR-ready DNA. </li></ol> * Il GuSCN dal kit Qiagen (buffer RLT) è stato utilizzato.

<ol><li>Bhattacharyya, A., Klapperich, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+and+chemical+analysis+of+plasma+and+ultraviolet-ozone+surface+treatments+for+thermal+bonding+of+polymeric+microfluidic+devices%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">Mechanical and chemical analysis of plasma and ultraviolet-ozone surface treatments for thermal bonding of polymeric microfluidic devices.</a> Lab Chip. 7, 876-882 (2007).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla da dichiarare.

fabbricazione dei canali termoplastico microfluidic

Fabrication of the Thermoplastic Microfluidic Channels

Nel nostro laboratorio, abbiamo isolato con successo gli acidi nucleici direttamente dai volumi e submicroliter microlitri di sangue umano, urine e feci con polimero / nanoparticelle lisi composito microscala e solide colonne di estrazione di fase. I campioni recuperati sono concentrati, i campioni di piccolo volume che sono PCRable, senza alcuna pulizia supplementare. Qui, dimostriamo come fabbricare chip termoplastico microfluidica con goffratura a caldo e saldatura a caldo. Poi, ci dimostrano come l&#39;uso in superficie chiara situ l&#39;innesto diretto e la polimerizzazione attraverso il chip sigillati a formare le colonne composte in fase solida. Dimostriamo innesto e polimerizzazione di una colonna di nanotubi di carbonio / polimero composito per lisi cellulare batterica. Poi mostrano il processo di lisi seguita da estrazione in fase solida degli acidi nucleici dal campione sul chip di silicio con un / colonna polimero composito. I protocolli allegati contengono istruzioni dettagliate su come fare sia lisi e colonne di estrazione in fase solida.

Qui mostriamo come fabbricare chip microfluidici termoplastico con goffratura a caldo e saldatura a caldo. Poi ci dimostrano come l&#39;uso in superficie chiara situ l&#39;innesto diretto e la polimerizzazione attraverso il chip sigillati a formare le colonne composte in fase solida.

Fabbricazione dei canali termoplastico Microfluidic

Nel nostro laboratorio, abbiamo isolato con successo acidi nucleici direttamente da volumi di microlitri e sottomicrolitri di sangue, urina e feci umane utilizzando...

Ciao, mi chiamo Aida Pria e ho appena completato il mio dottorato nel laboratorio della dottoressa Katherine KLAS presso la BU. Oggi dimostrerò la fabbricazione di un dispositivo microfluidico in materiale termoplastico mediante micro imbutitura a caldo e saldatura termica. Successivamente, illustrerò l'isolamento di acidi nucleici utilizzando una fase solida contenente particelle di silice, gli acidi nucleici estratti potranno poi essere utilizzati per la rilevazione mediante amplificazione PCR o qualsiasi altro modulo diagnostico.Ciao, mi chiamo Dominika Kalinski e sono una studentessa laureata presso il laboratorio di microdispositivi e microambienti biomedici della Boston University. Parlerò della formazione di un monolite di lisi a base di nanotubi di carbonio in un dispositivo microfluidico e della formazione di un monolite per estrazione in fase solida per l'estrazione del DNA in un dispositivo microfluidico. Oggi dimostreremo un esperimento sulla produzione e applicazione di colonne di lisi e colonne di estrazione in fase solida su scala microscopica all'interno di canali microfluidici in termoplastica.Queste colonne possono essere utilizzate per la lisi delle cellule batteriche e l'isolamento degli acidi nucleici dal lisato cellulare. Il primo passaggio del processo è la fabbricazione dei dispositivi microfluidici. Nel poliolefina ciclica, utilizziamo un polimero, commercializzato con il nome xx XX six 90 R, che ha una temperatura di transizione vetrosa di 136 gradi Celsius ed è trasparente ai raggi UV.La trasparenza ai raggi UV è fondamentale per la chimica guidata dalla luce utilizzata nella fabbricazione del monolite poroso all'interno dei canali microfluidici. Questa piattaforma microfluidica viene realizzata mediante micro imbutitura a caldo e saldatura termica. Per prima cosa, illustrerò il processo di micro imbutitura a caldo.Quindi partiamo da un modello principale, che è uno stampo elettroformato al nichel-cobalto, e presenta le caratteristiche negative o inverse rispetto a quelle richieste sulla piattaforma microfluidica. Posizioniamo quindi le palette Zion Nex sopra le caratteristiche che desideriamo ottenere sul substrato di plastica. Lo stampo viene poi inserito in una pressa calda, riscaldata fino a 30 gradi al di sopra della temperatura di transizione vetrosa (GLO) del polimero.Successivamente, si copre con un'altra piastra metallica e si comprime a una pressione compresa tra 50 e 500 PSI, che è adeguata. Dopo cinque minuti, si può rilasciare la pressione e rimuovere le PLA. Si lascia raffreddare leggermente, quindi le due piastre vengono separate manualmente e il modello si stacca dal substrato.Questo è l'aspetto del substrato. Dopo essere stato rilasciato dallo stampo, pratichiamo fori di 1,5 millimetri alle estremità del canale, che fungeranno da pozzi di introduzione e raccolta. Questo substrato goffrato viene quindi saldato termicamente a un altro pezzo di plastica liscia per formare e chiudere le strutture microfluidiche.Entrambi i pezzi vengono posizionati sulla piastra riscaldata in questo modo. La temperatura viene ridotta alla temperatura di transizione vetrosa del polimero, che è di 136 gradi Celsius. Per il processo di saldatura termica, nuovamente, le piastre metalliche vengono inserite nella pressa riscaldata, che viene portata alla temperatura di transizione vetrosa, ovvero 136 gradi Celsius, e pressate insieme a 250 PSI per due minuti.Alla temperatura di transizione vetrosa, il polimero inizia a fondere e a unirsi, ed è così che otteniamo le strutture microfluidiche racchiuse. Dopo due minuti, la pressione viene rilasciata. Questo è l'aspetto del dispositivo microfluidico finale, con i canali racchiusi e i porti di accesso per l'introduzione e la raccolta del campione. Ora procederemo a preparare i microcanali per la formazione del monolite polimerico poroso.Il primo passaggio di questo processo è un'operazione di innesto. Modifichiamo la chimica superficiale dei microcanali e della piattaforma Xan X six 90 R. Questo è necessario per ottenere l'ancoraggio covalente del monolite polimerico poroso all'interno del microcanale.Questa modifica della superficie è un processo di innesto, che prevede un rapporto uno a uno tra EDA e MMA con un iniziatore fotochimico benzo fenone. Quindi, quello che sto facendo qui è preparare una concentrazione equimolare di MMA ed EDA nella soluzione. Aggiungo il 3% di benzo fenone in modo da poter reticolare questo monolite all'interno del canale.Dopo aver preparato la soluzione di innesto, la si introduce nel microcanale, che viene riempito per azione capillare. Una volta riempito il canale, lo si posiziona in un incrociatore UV, dove avviene la reticolazione per 10 minuti con un livello di energia di 200 millijoule per centimetro quadrato. Al termine dei 10 minuti di esposizione ai raggi UV, la soluzione di innesto e il microcanale vengono risciacquati con metanolo, utilizzando l'aspirazione sotto vuoto.Quello che farò qui è posizionare il metanolo a un'estremità del canale utilizzando un vuoto per risciacquare il canale con metanolo. Questo passaggio serve a rimuovere qualsiasi soluzione in eccesso che non è stata polimerizzata. Questo è un confronto tra ciclo, etanolo e ciclina, tutti con i nanotubi di carbonio a una concentrazione di 2,27 molare.Il ciclone con nanotubi di carbonio verrà agitato per garantire una dispersione uniforme dei nanotubi di carbonio all'interno della soluzione. Dopo il processo di innesto, la chimica superficiale è stata modificata ed è ora pronta per un'adesione ferma del monolite all'interno del microcanale. Ora descriverò la formazione del monolite in nanotubi di carbonio VICIS.Questo è composto da geni, solventi e monomeri. I quattro elementi coinvolti in questo processo sono al to ecol, butil metacrilato ed EDMA. Inoltre, aggiungiamo un iniziatore fotochimico per poter formare il monolite in sotu mediante polimerizzazione UV.Preparerò un campione di cento microlitri. Pipetterò 52,5 microlitri di ecol. Questa operazione deve essere eseguita lentamente poiché l'ecol è viscoso.Dopo l'ecol, aggiungeremo i nanotubi di carbonio con ciclo anolo. È necessario vortexare vigorosamente per alcuni minuti per garantire una corretta dispersione. Ancora una volta, dobbiamo pipettare lentamente il ciclo andolo e i nanotubi di carbonio perché questa è una soluzione Abicus.Quindi aggiungiamo 15 microlitri di butyl meth Aly. E infine aggiungiamo 10 microlitri di EDMA. Vortexiamo brevemente, aggiungiamo il nostro iniziatore fotochimico e quindi sottoponiamo a sonica.L'iniziatore fotochimico che aggiungiamo è DM PAP al monolite di lisi. Questo viene aggiunto a una concentrazione di 1,13 all'intero volume di questa soluzione di cento microlitri. Dopo l'aggiunta, poiché si tratta di un iniziatore fotochimico, dobbiamo coprire la nostra soluzione del monolite di lisi per garantire che non vi sia esposizione mentre sottoponiamo la soluzione a sonica.Questo verrà trattato per 30 minuti a un'ampiezza del 50% con un ciclo di lavoro del 50%. Questo ciclo di lavoro del 50% serve ad evitare il surriscaldamento della soluzione. È estremamente importante prendere la soluzione dopo la sonificazione e lavorare rapidamente.Questo perché vogliamo garantire una dispersione uniforme dei nanotubi di carbonio nella soluzione, dato che preleveremo la soluzione e la trasferiremo nel microcanale. Qui abbiamo la soluzione di lisi. Immediatamente dopo la sonificazione e lavorando molto rapidamente, pipettiamo il volume nel microcanale sfruttando l'azione capillare, che permette alla soluzione di fluire all'interno del canale.Posizioniamo questo nel crosslinker per 0,9 minuti a un livello di energia di 120 millijoule per centimetro quadrato. Trascorsi questi 0,9 minuti, capovolgiamo il dispositivo. Questo capovolgimento ha essenzialmente lo scopo di consentire una polimerizzazione più uniforme e una distribuzione più omogenea dei nanotubi di carbonio nel canale.Dopo che il monolite è stato polimerizzato e risciacquato con metanolo, la soluzione del monomero all'interno non sarà più trasparente, ma di un bianco intenso; saranno inoltre visibili piccole macchie nere, corrispondenti ai nanotubi di carbonio presenti nel monolite. Il monolite per l'estrazione in fase solida viene preparato in maniera analoga al monolite con nanotubi di carbonio e lisato. Questa è la coltura batterica in forma liquida, e qui abbiamo un campione del nostro terreno di coltura.Dopo aver diluito il campione, lo si pipetta in un vetrino e lo si centrifuga. Successivamente, si decanta il mezzo avendo cura di non disturbare il pellet batterico sulla parete del tubo einor. I batteri vengono quindi risospesi in una soluzione contenente gudo, dium, thio, SDS e proteasi K. La guanidina tiocianato che viene pipettata è in un volume identico a quello in cui i batteri erano stati sospesi.Qui, i batteri sono stati sospesi in un millilitro, quindi risospendo i batteri in un millilitro di tiocianato di guanidina per ottenere il tiocianato di guanidina. Aggiungo proteinasi K. Aggiungo 45 microlitri e RNA. L'ultima soluzione che aggiungo è l'SDS.Dopo questo passaggio, la soluzione viene vorticata. Dopo la vorticosità, preleveremo il campione batterico con una pipetta e lo trasferiremo in una siringa monouso. In questo caso stiamo utilizzando una siringa monouso Excel da tre millilitri.Questo presenta un attacco a esca, che si collega al tubo capillare, e ci collegheremo al nostro dispositivo tramite nano porte. Quindi pipetterò la soluzione nella siringa monouso. Dobbiamo aspirare per assicurarci che non ci sia aria nel sistema.Si desidera procedere fino a ottenere una o due gocce che fuoriescono dall'altro estremo. Ora che abbiamo preparato la nostra soluzione per il collegamento al dispositivo, posizioneremo la siringa monouso sulla nostra pompa per siringa KDS e collegheremo l'estremità del nostro raccordo al nostro dispositivo con licenza, che dispone di nano porte su ciascuna estremità alle quali siamo eped. Ciò consente un collegamento sicuro al dispositivo.Questi sono raccordi a vite e di solito preferiamo fissare il dispositivo con del nastro per assicurarci che non si capovolga. Qui imposteremo una portata di quattro o cinque mililitri all'ora. Si tratta di una pompa a spostamento che forzerà la soluzione attraverso la siringa, il tubicino e questo collegamento, fino al canale.E preleveremo il campione attraverso questa nano-valvola di uscita. Possiamo raccogliere l'inquinante utilizzando una pipetta, e questo inquinante verrà sottoposto alla fase successiva, il processo di estrazione in fase solida, per isolare il DNA batterico per l'isolamento degli acidi nucleici. La fase solida contenente le particelle di silice viene condizionata con guad l'esignato contenente il tampone di lisi.Questo viene effettuato riempiendo una siringa con il buffer di lisi e collegandola alla pompa per siringa, quindi il buffer viene fatto passare attraverso il canale a una velocità di flusso di 300 microlitri all'ora. Successivamente segue il caricamento del campione. Il campione in questo caso è il lisato cellulare batterico ottenuto nel precedente passaggio di lisi.Di nuovo, il campione viene caricato per tre minuti a una portata di 300 microlitri all'ora. Successivamente, il canale viene lavato con etanolo al 70% vol/vol, nuovamente a una portata di 300 microlitri all'ora. Questo passaggio di lavaggio rimuove tutte le proteine assorbite e le impurità, e lo scarto viene raccolto dal sistema di raccolta.Utilizzando una pipetta, prelevare il campione dal pozzetto dopo il passaggio di lavaggio, che rimuove tutti i contaminanti. Il DNA legato alla silice viene quindi eluito in acqua. Questa è una siringa contenente acqua priva di DNA.È collegato al chip e, ancora una volta, l'acqua viene fatta fluire a una portata di 300 microlitri all'ora, raccogliendo il campione all'altra estremità. Questa operazione viene eseguita per tre minuti, raccogliendo 15 microlitri di eluato, costituito semplicemente da DNA puro in acqua, pronto per la PCR per la fabbricazione del dispositivo termoplastico. La sfida maggiore è rappresentata dall'aspetto del legame termico, poiché la saldatura avviene a una temperatura molto elevata, pari o prossima alla temperatura di transizione vetrosa del polimero; lievi variazioni di pressione o temperatura possono completamente distruggere il canale o creare una sigillatura scadente tra le due parti di plastica.Pertanto, mantenere la temperatura e la pressione ottimali è molto importante e può risultare un po' impegnativo. Gli elementi chiave che risultano difficili in questo processo sono ottenere una distribuzione uniforme dei nanotubi di carbonio nella soluzione del monomero che viene polimerizzata mediante UV in situ. Si tratta di una sfida simile a quella relativa alla dispersione uniforme delle particelle di silice nel monolite polimerico poroso per l'estrazione in fase solida.

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